RESUMO INTRODUÇÃO. Autor: MARTINS 1, Carlos M.C., Co-Autores PIRES 2, Cecílio M., DIAS 3, Luís M. A.

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1 Titulo: Comparação dos métodos de pesquisa de parasitas intestinais utilizados nos laboratórios clínicos em Cabo Verde com o método de Ritchie modificado O caso de Rincão Autor: MARTINS 1, Carlos M.C., Co-Autores PIRES 2, Cecílio M., DIAS 3, Luís M. A. 1 Licenciado em Análises Clínicas e Saúde Pública, Universidade Jean Piaget de Cabo Verde, 2 Licenciado em Biologia C&T, Diretor técnico do Laboratório de Análises Clínicas do Hospital Regional Santiago Norte Dr. Santa Rita Vieira, 3 Licenciado em Medicina, Clínico Geral, Hospital Agostinho Neto Tel / tcharles6@hotmail.com RESUMO As parasitoses intestinais constituem um grave problema de saúde pública, sendo o diagnóstico laboratorial essencial na sua identificação e controlo, tornando-se importante a escolha do método de eleição no processo. O presente estudo teve como objectivo avaliar a sensibilidade e especificidades das técnicas utilizadas no diagnóstico de parasitas intestinais nos laboratórios públicos de análises clínicas em Cabo Verde comparativamente ao método de Ritchie modificado. O estudo envolveu a análise de 251 amostras recolhidas em crianças dos 2 aos 12 anos da comunidade de Rincão em Santa Catarina. Os métodos de diagnósticos laboratoriais utilizados foram os métodos de concentração de Willis, Ritchie modificado por Sales de Cunha e o exame direto. As amostras foram analisadas na Unidade Sanitária Base de Rincão e no Laboratório de Análises Clínicas do Hospital Regional Santiago Norte. Para análise estatística, foram utilizadas o Excel (2007), SPSS (versão 17). Das 251 amostras avaliadas, 94,8% tinham amostras de fezes positivos. Os parasitas intestinais encontrados, foram Endolimax nana 25%, Entamoeba Histolytica 18%, Giardia sp 14,7%, Hymenolepis nana 7,7%, Ascaris sp 2,1%, Trichuris sp 0,9% e Enterobius sp 0,8%. Verificou-se 78,6% de índice de positividade para método de Ritchie modificado e 20,2% para o método de concentração de Willis, por conseguinte, o método de Ritchie modificado mostrou-se mais sensível que o método de concentração de Willis. Também verificou-se a necessidade da realização de técnicas cada vez mais sensíveis no diagnóstico laboratorial dos parasitas intestinais, uma vez os resultados levam-nos a concluir que há um subdiagnóstico nos exames rotineiros, já que a técnica atual detecta apenas 20,2% dos casos que foram positivos. Palavras-chaves: Parasitas intestinais, sensibilidade, especificidade, Ritchie modificado, métodos de diagnóstico laboratorial. INTRODUÇÃO Os parasitas intestinais constituem um problema médico-sanitário de grande importância, tanto pela frequência que ocorrem como causarem muitas vezes, distúrbios orgânicos capazes de incapacitarem os indivíduos infectados, reduzindo a resistência do organismo, predispondo-o inclusive a outras infecções (MARCONDES et al., 2003). Devido a estas incapacitações e maleficência que estes podem causar ao homem, tornase necessário que seja feito um diagnóstico fidedigno, através de técnicas sensíveis e específicas, pois o diagnóstico laboratorial constitui um processo importante e essencial no mecanismo de controlo e combate aos parasitas intestinais. Várias técnicas são usadas na identificação destes microrganismos, entre os quais o exame direto ou a fresco e vários métodos de concentração, como o método de Willis, Faust e Cols,

2 Ritchie modificado, técnicas de sedimentação como Hoffmam, Pons e Janer, método de Baermann, método de Graham (fita adesiva), métodos de coloração com a hematoxilina férrica, coloração tricrómica, assim como o uso de técnicas moleculares e testes rápidos (DOLDMAN, 2009). Utilizado na pesquisa sobretudo de ovos de helmintos, o método de concentração de Willis fundamenta-se na propriedade que determinados ovos têm em flutuarem na superfície de uma solução saturada com cloreto de sódio e ficarem na superfície, aderindo assim a uma lamela colocada a superfície e observada ao microscópio (NEVES, 2005). O método de concentração difásico de Ritchie modificado constitui uma das técnicas mais utilizadas na pesquisa de quistos de protozoários e helmintos. Esta baseia-se na sedimentação por centrifugação e lavagem do material com éter, um solvente orgânico que forma uma fase apolar, retendo os artefactos vegetais e lípidos contida na amostra, durante a centrifugação da suspensão de fezes (REY, 2001). Para um melhor diagnóstico, é importante associar aos métodos de pesquisa de parasitas intestinais, métodos indirectos, como a avaliação da eosinofilia sanguínea, esteatoreia e a pesquisa de cristais de Charcot-Leyden nas fezes, ou seja, métodos auxiliares na pesquisa e identificação de parasitas intestinais (ENGELKIRK et ENGELKIRK, 2008). O estudo teve como objetivo avaliar a sensibilidade e especificidades das técnicas utilizadas no diagnóstico de parasitas intestinais, comparando com as técnicas utilizadas nos laboratórios públicos de análises clínicas em Cabo Verde com o método de Ritchie modificado. MATERIAIS E MÉTODOS As amostras foram recolhidas nas crianças dos 2 aos 12 anos da comunidade de Rincão de Santa Catarina, entre Junho a Setembro de 2011 e foram analisadas na Unidade Sanitária Base de Rincão e no Laboratório de Análises Clínicas do Hospital Regional Santiago Norte. Para a pesquisa dos parasitas intestinais realizou-se as técnicas de concentração de Willis, Ritchie Modificado associado ao método direto. Os dados obtidos foram organizados e analisados usando os programas estatísticos Excel e SPSS versão Para a correlação entre as variáveis usou-se o teste X 2 (Qui quadrado), com nível significância de 95%. RESULTADOS E DISCUSSÃO Das 251 crianças envolvidas no estudo, 94,8% tinham amostras de fezes positiva, dos quais 99,6% estavam infectadas por protozoário, 26,9% estavam infectadas por helminto, resultados superiores ao estudo realizado por BENZERROUG et al., 2005, que poderá ser explicada pela diferença dos métodos de pesquisa de parasitas intestinais, contudo os resultados vão de encontro a estudo realizado por PIRES A., Tabela 1: Frequência de amostras positivas e negativas nas 251 amostras. Designação Frequência Amostras positivas (n=251) 238 (94,8%) Amostras negativas (n=251) 13 (5,2%) Infeção por protozoários (n=238) 237 (99,6%) Infeção por helmintos (n=238) 64 (26,9%)

3 Tabela 2: Frequência de protozoários encontrados, pelos métodos utilizados. Métodos de pesquisa de parasitas intestinais Deteção de Protozoários Sim Não Total de positivos Método direto 220 (93%) 17 (7%) 237 Ritchie modificado 189 (80%) 48 (20%) 237 Método de Willis 47 (20%) 190 (80%) 237 Dos 237 casos de amostras positivas por protozoários, foram detectadas pelo exame direto 220 casos, pelo método de Ritchie modificado 189 casos e pelo método Willis apenas 47 casos. Verificou-se alta sensibilidade do exame direto e concentração de Ritchie modificado para pesquisa de protozoários (80%), enquanto o método de concentração de Willis mostrou baixa sensibilidade (20%), por ser menos específico para a pesquisa de protozoários (Tabela 2). Tabela 3: Frequência de helmintos encontrados pelos métodos utilizados. Métodos de pesquisa de parasitas intestinais Sim Detecção de helmintos Não Total de positivos Método direto Ritchie modificado Método de Willis De referir que dos 64 casos positivos dos helmintos detectadas, 56 casos pelo método direto, 55 pelo método de Ritchie e 43 pelo método de Willis. Observando os resultados, pode-se notar que as três técnicas se mostraram sensíveis para a pesquisa de helmintos, sendo os métodos de concentração de Ritchie modificado e exame direto mais sensíveis (Tabela 3). Tabela 4: Índice de positividade em relação as técnicas utilizadas. Técnica/Método Resultados por Técnica/Método Positivo Negativo Total de positivos (n=238) Método direto 221 (92,9%) 17 (7,1%) 238 (100%) Ritchie modificado 187 (78,6%) 51 (21,4%) 238 (100%) Método de Willis 48 (20,2%) 190 (79,2%) 238 (100%) Tendo em conta as técnicas utilizadas observou-se 92,9% de positividade para o método direto em relação a totalidade dos casos positivos, 78,6% para o método de Ritchie modificado e 20,2% para o método de concentração de Willis. A maior sensibilidade do método de concentração de Ritchie modificado em relação ao método de concentração de Willis, deve-se a capacidade deste método detetar tanto helmintos como

4 protozoários, permitindo maior concentração dos parasitas (pela centrifugação e sedimentação), com melhor visibilidade e clareza na identificação dos parasitas intestinais devido a remoção dos artefactos (Tabela 4 e gráfico 1). Gráfico 1: Relação de positividade entre amostras positiva em relação as técnicas aplicadas. Índice de positividade das técnicas/métodos Negativo Positivo 100,0% 7,1% 21,4% 80,0% Percentagem 60,0% 40,0% 92,9% 78,6% 79,2% 20,0% 20,2% 0,0% Exame a fresco/directo Ritchie modificado Concentração de Willis Tabela 5: Distribuição de parasitas intestinais encontrados em relação as técnicas aplicadas. Técnica/ Métodos de pesquisa parasitológico de fezes Parasitas Exame Direto Método de Willis Ritchie modificado E. Histolytica/Dispar (n=111) Giardia sp (n=89) C. parvum (n=15) H. nana (n=47) Ascaris sp (n=13) Taenia sp (n=9) Trichuris sp (n=6) Enteróbius sp (n=5) Relativamente aos parasitas intestinais encontrados no estudo e as respetivas sensibilidades, pode verificar-se uma elevada sensibilidade do método direto e Ritchie modificado tanto para os protozoários como os restantes parasitas e elevada sensibilidade do método de Willis para pesquisa de parasitas como Hymenolepis nana.

5 Tabela 6: Correlação de positividade das técnicas de concentração com o exame direto. Métodos de diagnóstico laboratorial Teste Qui quadrado (X 2 ) Positividade por técnicas Valor p Exame directo/willis 1,011 0,315 Exame Directo/Ritchie 32,759 0,000 Da associação das entre as técnicas utilizadas, nota-se que existe uma correlação estatisticamente significativa entre a técnica de concentração de Ritchie modificado e exame direto (p=0,000, X 2 =32,759), o que demonstra uma maior probabilidade de encontrar amostras positivas quando se utiliza estas duas técnicas comparativamente a associação do método de concentrado de Willis e exame direto (Tabela 6). CONCLUSÃO Conclui-se que relativamente a técnica de concentração utilizada no estudo, o método de concentração de Ritchie modificado mostrou-se mais sensível do que o método de concentração de Willis, com maior sensibilidade para pesquisa de helmintos e protozoários. É inegável que é importante associar aos métodos de concentração, um método direto possibilitando assim o aumento dos casos de positivos (p=0,000, X 2 =32,759). Dada a eficiência da técnica de Ritchie modificado e pelos resultados obtidos nesse estudo, recomenda-se que a mesma seja introduzida como o método de concentração associado ao método direto na rotina dos principais laboratórios clínicos do país na pesquisa de parasitas intestinais, para que se possa obter resultados cada vez mais precisos, contribuindo assim para um maior controlo das parasitoses intestinais que continuam a ser subdiagnosticada e por ser um método recomendado pela OMS. FINANCIAMENTO E COLABORAÇÃO Este trabalho foi totalmente financiado pelo Região Sanitária Santiago Norte e teve a colaboração do HRSN, Delegacia de saúde de Assomada e da USB de Rincão. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS BEHRMAN, Richard E; VAUGHAN, Victor C.; Tratado de Pediatria; 13ª edição; Volume I; Rio de Janeiro 1990; BENZERROUG Abla Bouda; Enquête sur la prévalence des parasitoses intestinales dans les écoles primaires et jardins d enfants au Cap Vert, Mai Juin 2004, Rapport PAM- ICASE. (Disponível em: BIENZ, Kurt A. ; ECKERT; Johnannes; KAYSER, Fritz H.; ZINKERNAGEL, Ralf M.; Medical Microbiology; 3ª edition, Zurick 2004; (Pag: ); CAVANAUGH, Bonita Morrow; Nurse s Manual of Laboratory and Diagnosis Tests; 4ª Edition; Davis Company; Philadelphia, 2003.

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