ANÁLISE MACRO MICRO HISTOQUÍMICA DE DROGAS VEGETAIS -

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1 ANÁLISE MACRO MICRO HISTOQUÍMICA DE DROGAS VEGETAIS - FBF Edna 2018 Análise de drogas vegetais X Identificação de planta ANÁLISE DE DROGAS VEGETAIS (COMPARAÇÃO COM MONOGRAFIAS FARMACOPEICAS) IDENTIFICAÇÃO DE ESPÉCIE VEGETAL (taxonomista) (exsicata) 1

2 OM/WATCH?V=MN_AH6D RFPE Política nacional de plantas medicinais (2006) programa de PLANTAS MEDICINAIS

3 Plantas medicinais secas (DROGAS VEGETAIS) uso episódico, oral ou tópico para alívio sintomático deve ser disponibilizadas exclusivamente na forma de droga vegetal para o preparo de infusos, decoctos e macerados em água não podem ser notificadas em qualquer outra forma (cápsula, tintura, comprimido, extrato, xarope, entre outros) indicação: doenças de baixa gravidade O PROBLEMA DOS NOMES POPULARES REGIONAIS 3

4 BOLDO DE JARDIM (BOLDO BRASILEIRO) BOLDO BAIANO Plectranthus barbatus Andrew - Lamiaceae Peumus boldus Molina- Monimiaceae BOLDO DO CHILE Acmella ciliata (Kunth) Cass (sin Vernonia condensata Baker)- Asteraceae PREPARO DE EXSICATAS ramo florido em jornal prensar ramo em jornal prensar em jornal+papelão 4 Exsicata: Encaminhar a taxonomista para Identificação Atribuição de nome botânico 4

5 Farmacopéia Brasileira Controle de qualidade É o conjunto de medidas destinadas a garantir, a qualquer momento, a produção de lotes de medicamentos e demais produtos, que satisfaçam às normas de identidade, atividade, teor, pureza, eficácia e inocuidade REGISTRO DE MEDICAMENTOS FITOTERÁPICOS E PRODUTOS TRADICIONAIS FITOTERÁPICOS 1 Documentação (dossiê de registro ) a relatório técnico b relatório de produção e controle de qualidade c relatório de segurança e eficácia d Cópia de licença de funcionamento da empresa (Alvará Sanitário); e Certificado de Responsabilidade Técnica (CRT) emitido pelo Conselho Regional de Farmácia (CRF) f protocolo da notificação da produção de lotes-piloto g Certificado de Boa Práticas de Fabricação e Controle (CBPFC), emitido pela Anvisa 5

6 Maca (Lepidium meyenii) Cultivation in the Andes Oct/Nov 2005 Maca (Lepidium meyenii) 6

7 Maca - Lepidium meyenii Walp Brassicaceae VIDEO: DO CULTIVO AOS PRODUTOS QUALIDADE, EFICÁCIA E SEGURANÇA FARMACOPEIAS Literatura especializada/ sítios oficiais Estabelecem parâmetros de contém informações atuais sobre QUALIDADE EFICÁCIA SEGURANÇA 7

8 Farmacopéi as/literatura especializad a ANÁLISE DE DROGAS VEGETAIS Pureza Identidade Avaliação de marcadores OPERAÇÕES amostragem; identificação 8

9 ANÁLISE DE DROGAS VEGETAIS AMOSTRAGEM IDENTIFICAÇÃO = COMPARAÇÃO CARACTERIZAÇÃO MACROSCÓPICA CARACTERIZAÇÃO MICROSCÓPICA (histoquímica) ANÁLISE QUÍMICA/MICROBIOLÓGICA ANÁLISE DE DROGAS VEGETAIS AMOSTRAGEM Número de embalagens Grau de divisão Quantidade de droga vegetal Brasília,

10 PUREZA IDENTIDADE Métodos de análise de drogas vegetais Diretos: visão; tato; olfato e degustação Indiretos: físicos (microscopia; cromatografia); químicos; biológicos 10

11 ANÁLISE MACROSCÓPICA/LUPA Lupa estereoscópica Celosia seed Cuscuta seed Astragalus seed CARACTERIZAÇÃO MICROSCÓPICA 11

12 ANÁLISE QUÍMICA E MICROBIOLÓGICA Bibliografia básica OLIVEIRA, F; AKISUE, G; AKISUE, MK Farmacognosia 2ª ed São Paulo: Atheneu (Cap 1,2, 3) Brasília, 2017 BRASIL Ministério da Saúde Agência Nacional de Vigilância Sanitária Resolução de Diretoria Colegiada RDC 26 de 13 de maio de

13 ?? DNA Barcode (Código de barras) CAPÍTULO 4 ANÁLISE DE DROGAS FOLHAS FBF 0343 Edna Ginkgo biloba L 13

14 EXEMPLOS DE MEDICAMENTOS FITOTERÁPICOS PREPARADOS COM DROGAS VEGETAIS CONSTITUÍDAS DE FOLHAS Planta medicinal Droga vegetal 14

15 Incluídos na Rename 2012, por meio da Portaria GM/MS no 533, de 28 de março de 2012, 12 medicamentos fitoterápicos São eles: FOLHAS Aloe vera (Babosa), Cynara scolymus (Alcachofra), Glycine max (Soja - isoflavona), Harpagophythum procumbens (Garra-do-diabo), Maytenus ilicifolia (espinheira santa) Mentha x piperita (Hortelã), Mikania glomerata (Guaco), Plantago ovata (Plantago), Rhamnus purshiana (Cáscara-sagrada), Salix alba (Salgueiro), Schinus terebinthifolius (Aroeira-da-praia), 15

16 Registro de medicamentos fitoterápicos CRÍTÉRIOS (RDC 26 DE 13 DE MAIO DE 2014) REGISTRO (completo) MEDICAMENTOS FITOTERÁPICOS 1 emprego exclusivo de matériasprimas ativas vegetais 2 segurança e eficácia - baseadas em estudos clínicos 3 constância de sua qualidade REGISTRO SIMPLIFICADO Presença na lista da IN nº 2 de 13 de maio de 2014 ou suas atualizações) Monografias da COMMUNITY HERBAL MONOGRAPHS WITH WELL-ESTABLISHED USE da EMA (European Medicines Agency) 16

17 Registro simplificado na ANVISA CRÍTÉRIOS (RDC 26 DE 13 DE MAIO DE 2014): Presença na lista da IN nº 2 de 13 de maio de 2014 ou suas atualizações Monografias da COMMUNITY HERBAL MONOGRAPHS WITH WELL- ESTABLISHED USE da EMA (European Medicines Agency) RDC 26/2014 Instrução Normativa nº 2/2014 MEDICAMENTOS FITOTERÁPICOS (folhas, ramos floridos) PASSÍVEIS DE REGISTRO SIMPLIFICADO 1 UVA-URSI - Arctostaphylos uva-ursi (L) Spreng - Ericaceae 2 ALCACHOFRA - Cynara scolymus L - Asteraceae 3 EQUINÁCEA - Echinacea purpurea (L) Moench Asteraceae 4 GINCO Ginkgo biloba L Ginkgoaceae 5 SENE Senna alexandrina Mill - Leguminosae 6 TANACETO Tanacetum parthenium L Asteraceae 7 HIPÉRICO Hypericum perforatum L- Hypericaceae 8 MENTA Mentha x piperita - Lamiaceae 17

18 EXEMPLO DE MEDICAMENTO CONTENDO DOIS FITOFÁRMACOS, ISOLADOS A PARTIR DE MATÉRIA-PRIMA VEGETAL ENQUADRADO NA CATEGORIA DE MEDICAMENTO ESPECÍFICO 18

19 19

20 FOLHA SIMPLES: Lâmina (limbo) Pecíolo Base (bainha e/ou estípulas) COMPOSTA: Pinada (folíolo; peciólulo; raque) Digitada (não apresenta raque) Face adaxial Partes da folha Face abaxi al Folha Simples: - Limbo - Pecíolo 20

21 Partes da folha Raque composta: - Folíolo - Peciólulo Folíolo (Peciólulo) Itens da análise macroscópica de drogas - FOLHAS 1 Filotaxia (alterna; oposta; verticilada) 2 Aspecto geral; cor; odor; sabor 3 Superfície (tato/visão): limbo, pecíolo 4 Limbo: comprimento x largura 5 Forma: geral, ápice, base, margem 6 Nervação: padrão geral; nervuras laterais 7 Pecíolo: comprimento x largura; inserção; outros (canalículos,alas) 21

22 FOLHAS MACROSCOPIA base Recortes na margem venação contorno Pecíolo-inserção ápice margem Folhas compostas Limbo: comprimento x largura Cymbopogon citratus - Poaceae Melissa officinalis L - Lamiaceae 22

23 Análise macroscópica de drogas vegetais - folhas Nervação: padrão geral; nervuras laterais Pecíolo: comprimento x largura; inserção; outros (canalículos,alas) VENAÇÃO Hickey, L (1973) Am J Bot, ?seq=12 23

24 VENAÇÃO Hickey, L (1973) Am J Bot, FOLHA PARIPINADA FOLHAS COMPOSTAS FOLHA IMPARIPINADA 24

25 Senna alexandrina Mill - Leguminosae Análise de drogas vegetais - FOLÍOLOS 1 Limbo: itens de folhas simples 2 Distância entre folíolos 3 Posição relativa entre si 4 Peciólulo: comprimento x largura; ângulo de inserção 5 Raque ( comprimento x largura, canalículos) 25

26 ANÁLISE MICROSCÓPICA DE DROGAS VEGETAIS CONSTITUÍDAS DE FOLHAS Corpo vegetal Corpo primário Corpo secundário Crescimento primário (meristemas apicais, subapicais) Crescimento secundário (meristemas laterais) 26

27 PLANTA ÓRGÃOS VEGETAIS TECIDOS VEGETAIS CÉLULAS VEGETAIS CARACTERIZAÇÃO MICROSCÓPICA DE FOLHAS CORTES: Longitudinais tangenciais (paradérmico) Transversais 27

28 CORTES HISTOLÓGICOS de DV FOLHAS POR QUE OS CORTES HISTOLÓGICOS PARA A ANÁLISE DE DROGAS VEGETAIS (DV) DEVEM SER FEITOS NO TERÇO MÉDIO (INCLUI A NERVURA MEDIANA) INFERIOR? 1) Devem-se selecionar folhas plenamente desenvolvidas 2) Nas extremidades pode-se observar tecidos ainda não plenamente desenvolvidos células meristemáticas Ver slide seguinte 3) Os tecidos adultos (nãomeristemáticos) tem formas /conteúdo diferenciados LOCALIZAÇÃO DOS MERISTEMAS: (1) APICAL, (2) LATERAL, (3) SUBAPICAL

29 VISTA FRONTAL OU CORTE PARADÉRMICO Corte superficial da lâmina foliar Observe nas fotos abaixo: com a lâmina de barbear nova, retirar os tecidos superficiais (face adaxial e abaxial), em plano paralelo à lâmina foliar Observam-se nestes cortes: a epiderme e seus anexos (estômatos, tricomas), além do tipo de cutícula e particularidades Corte paradérmico da face adaxial Corte paradérmico da face abaxial Fotos: ANÁLISE MICROSCÓPICA DE DROGAS FOLHAS Vista frontal região laminar Células epidérmicas e anexos * forma (retas, sinuosas); * grau de espessamento da parede celular; * cutícula (lisa, estriada, granulosa); * tricomas (tipos; classificação das partes; parede celular; conteúdo) * estômatos (classificação; freqüência) * particularidades 29

30 ANÁLISE MICROSCÓPICA FOLHAS tch?v=bfpkjlfwpmq&featu re=related face adaxial epiderme Vista frontal face abaxial epiderme Vista frontal cutícula: lisa cutícula: estriada observar tipo de estômato principalmente na face abaxial ANÁLISE MICROSCÓPICA FOLHAS Os tipos básicos de estômatos são classificados de acordo com: 1) o número; 2) a disposição e 3) a presença ou ausência de células subsidiárias célula subsidiária 30

31 ANÁLISE MICROSCÓPICA FOLHAS TIPOS DE TRICOMAS TRICOMA TECTOR TRICOMA GLANDULAR CORTE TRANSVERSAL FOLHA Os cortes transversais são obtidos em plano perpendicular ao maior eixo da lâmina foliar Selecionar cortes finos Descolorir Lavar Colorir Montar lâmina Observar ao microscópio Retirar fragmento (retangular - ) incluindo a nervura mediana Observar linha perpendicular (linhas vermelhas) à nervura Observar o fragmento de folha incluído entre os 2 suportes brancos (seta) Fazer cortes finos Fotos das folhas ( 31

32 ANÁLISE MICROSCÓPICA - FOLHAS ed Secção transversal: Lâmina foliar ANÁLISE MICROSCÓPICA - FOLHAS Secção transversal: região laminar 1 Células epidérmicas e anexos Epiderme múltipla hipoderme); * forma; número de camadas (epid múltipla; * grau de espessamento da parede celular; * camada cuticular (espessura); * tricomas (tipos; classificação das partes; parede celular; conteúdo); * estômatos (localização); Cripta estomática com tricomas tectores Epider me uniestra tificada * particularidades 32

33 ANÁLISE MICROSCÓPICA - FOLHAS Secção transversal: região laminar 2 Tecidos/ inclusões celularesteciduais * Hipoderme -(presença ou não) forma; número de camadas; * Mesofilo (dorsiventral, isolateral); n 0 camadas de paliçádico/lacunoso; Mesofilo dorsiventral * Estômatos (localização) * Inclusões (localização; freqüência) * particularidades Mesofilo isolateral NERVURA MEDIANA CORTE TRANSVERSAL Contorno da secção transversal Epiderme e anexos (forma, parede celular, número de camadas Tecido de sustentação Disposição do sistema vascular/ tipo de feixe vascular Tecidos/ inclusões celularesteciduais 33

34 EXEMPLO: IMPORTÂNCIA DAS INCLUSÕES CELULARES NA IDENTIFICAÇÃO CARBONATO DE CÁLCIO (CISTÓLITOS) LIPÍDEOS (GOTÍCULAS DE ÓLEO NOS TRICOMAS GLANDULARES) Inclusões celulares inorgânicas de CARBONATO DE CÁLCIO 34

35 Potencial em diminuir a frequência de crises convulsivas em pacientes com doenças neurológicas graves e que não respondem ao tratamento convencional CISTÓLITO NO TRICOMA TECTOR DRUSA NO MESOFILO GOTÍCULAS DE ÓLEO NO TRICOMA GLANDULAR 35

36 BOLDO DE JARDIM (BOLDO BRASILEIRO) BOLDO BAIANO Plectranthus barbatus Andrew - Lamiaceae Peumus boldus Molina- Monimiaceae BOLDO DO CHILE Acmella ciliata (Kunth) Cass (sin Vernonia condensata Baker)- Asteraceae 36

37 Peumus boldus - Monimiaceae 1 Composição Simples 2 Tamanho 1-7cm x 0,6-5cm 3 Contorno Elíptica, oval-eliptica 4 Ápice obtuso 5 Base Arredondada 6 Consistência Coriácea, quebradiça 7 Margem (bordo) Inteira, revoluta 8 Nervação camptódroma-bronquidródoma 9 Cor Verde-acinzentados a cinzenta-prateada 10 Odor Aromático, canforáceo 11 Transparência Pontos translúcidos correspondentes a cavidades secretoras (lente de aumento) 12 Aspecto da superfície (visão) 13 Aspecto da superfície ( tato) Tricomas estrelados (lente de aumento) face adaxial: áspera ao tato devido às saliências da base dos tricomas Peumus boldus Monimiaceae TRANSVERSAL 1 Epiderme Tricomas tectores bifurcados ou estrelados 1-3 camadas de hipoderme 2 Mesofilo dorsiventral, Células secretoras globosas, de paredes suberizadas 3 Nervura mediana Contorno côncavo-convexo Feixe vascular (FV) em arco aberto envolvido por bainha esclerenquimática Ilhotas de FV voltados para face adaxial PARADÉRMICO Epiderme * Células poligonais e * estômatos anomocíticos * Numerosos tricomas estrelados e caducos (hastes quebradiças) * Cutícula lisa 37

38 Peumus boldus Molina - Monimiaceae Desenhos esquemáticos: Oliveira et al - Farmacognosia Corte paradérmico da face adaxial Corte transversal da lâmina foliar Corte paradérmico da face abaxial ESPINHEIRA SANTA Maytenus ilicifolia Mart ex Reissek (M aquifolium Mart) - Celastraceae Maytenus aquifolium Julio Antonio Lombardi, UNESP, Sao Paulo 38

39 cpqba Maytenus ilicifolia- Celastraceae 1 Composição Simples 2 Tamanho 2-9 cm x 1-3 cm 3 Contorno Elíptico-lanceolado 4 Ápice Mucronado 5 Base Aguda a obtusa 6 Consistência Coriácea a subcoriácea 7 Margem (bordo) Projeções ponteagudas (9-14 unidades) 8 Nervação Craspedródoma mista 9 Cor Verde mais escuro na face adaxial 10 Odor Aromático, canforáceo 11 Transparência Ausência de pontos translúcidos 12 Aspecto da superfície (visão) 13 Aspecto da superfície ( tato) Glabra (ausência de tricomas) face adaxial: áspera ao tato devido às saliências da base dos tricomas 14 Pecíolo Curto ( 0,2-0,5 cm) 39

40 Maytenus ilicifolia- Celastraceae TRANSVERSAL 1 Epiderme Uniestratificada, de paredes espessas Presença de cristais prismáticos 2 Mesofilo Dorsiventral No mesofilo são comuns células contendo compostos fenólicos, principalmente no parênquima paliçádico, além de cristais prismáticos de pequenas dimensões 3 Nervura mediana Contorno biconvexo Feixe vascular (FV) é único em arco aberto envolvido por bainha parenquimática PARADÉRMICO Epiderme Folha hipoestomática (estômato apenas na face abaxial) * Células poligonais e * estômatos anomocíticos * Glabra (ausência de tricomas) * Cutícula lisa Maytenus ilicifolia- Celastraceae Farmacopeia Brasileira, 5ª edição ic pp G esquema do aspecto geral da nervura mediana pj bp B detalhes parciais do mesofilo em secções transversais: face adaxial (ad); face abaxial (ab); epiderme (ep); cutícula (cu); idioblasto cristalífero (ic); parênquima paliçádico (pp); parênquima esponjoso (pj); xilema (x); fl oema (f); bainha parenquimática (bp); fi bras (fb); estômato (es) D e E detalhe da epiderme voltada para a face adaxial e abaxial, respectivamente, em vista frontal: idioblasto cristalífero (ic); célula subsidiária (csb); estômato (es) 40

41 Senna alexandrina Mill - Leguminosae Folha paripinada 41

42 Senna alexandrina Mil- Fabaceae (Leguminosae) Parte usada: folíolos Não confundir com FOLÍCULOS (FRUTOS) 1 Composição Folha composta (paripinada) 2 Tamanho 0,6-5 cm x 0,2-10 mm 3 Contorno lanceolado 4 Ápice agudo 5 Base do folíolo Assimétrico 6 Consistência Fina, frágil, membranácea 7 Margem (bordo) Inteiro 8 Nervação Camptódroma-broquidródoma 9 Cor Verde-acinzentados a verde-acastanhados 10 Sabor Mucilaginoso e amargo 9 Odor Fraco, característico 10 Peciólulo Curto (até 0,1 cm comp) Senna alexandrina Miller Leguminosae (Fabaceae) TRANSVERSAL 1 Epiderme *Tricomas tectores unicelulares, cônicos, curvos, geniculados, de paredes espessas e cutícula verrucosa * Epiderme uniestratificada 2 Mesofilo Isobilateral, comprimento das céls paliçádicas junto à face adaxial é maior Drusas 3 Nervura mediana Parênquima fundamental com drusas Feixe vascular envolvido por bainha, contendo cristal prismático PARADÉRMICO Epiderme *Células poligonais/cutícula lisa * estômatos com 2 céls anexas (paracíticos), às x, 3 * Cicatrizes circulares: ponto de inserção dos tricomas caducos * Tricomas implantados em agrupamento de células com distribuição radial 42

43 Senna alexandrina Mill Fabaceae =ZboX2t5aD8c Face adaxial corte paradérmico Corte transversal Face abaxial corte paradérmico Bibliografia básica OLIVEIRA, F; AKISUE, G; AKISUE, MK Farmacognosia 2ª ed São Paulo: Atheneu (Cap 4) Brasília,