POTÁSSIO ENZIMÁTICO Instruções de Uso
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- Ana Beatriz Moreira Balsemão
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1 POTÁSSIO ENZIMÁTICO Instruções de Uso Ref.:25 MS Finalidade. Sistema para determinação quantitativa do íon potássio em amostras de soro, por reação enzimática, em modo cinético. Uso profissional. [Somente para uso diagnóstico in vitro.] Princípio. O potássio é determinado via reação enzimática na qual o substrato fosfoenolpiruvato é convertido a piruvato pela piruvato quinase dependente de potássio. O piruvato gerado é convertido a lactato, na presença de NADH ( nicotinamida adenina dinucleotídeo), em reação catalisada pela lactato desidrogenase. A oxidação de NADH a NAD e consequente redução da densidade ótica em 380 nm é proporcional à concentração de potássio presente na amostra. Fosfoenolpiruvato ADP Piruvato NADH K Piruvato quinase Lactato desidrogenase Piruvato ATP Lactato NAD Características do sistema. O método Potássio Enzimático - Labtest foi desenvolvido utilizando a especificidade da enzima piruvato quinase dependente de potássio e é uma alternativa prática às metodologias fotometria de chama e Eletrodo Íon Seletivo (ISE) que demandam o uso de sistemas específicos. Os componentes da reação se encontram distribuídos em 2 reagentes, prontos para uso, conferindo maior estabilidade à forma líquida. A grande especificidade analítica, de simples e fácil aplicação em analisadores automáticos, capazes de medir absorbâncias em 380 nm, permite a realização da medição do íon junto aos demais exames bioquímicos, conferindo rapidez e praticidade ao processo analítico. Metodologia. Enzimática. Reagentes. - Reagente - Pronto para uso. Armazenar entre 2-8 ºC. Lactato desidrogenase <50 KU/L; fosfoenolpiruvato <00 mmol/l; NADH análogo<0 mmol/l; ADP <00 mmol/l e azida de lítio <0,095% Reagente 2 - Pronto para uso. Armazenar entre 2-8 ºC. Piruvato quinase <50 KU/L e azida de lítio <0,095%. Preparação líquida contendo íons potássio em solução tampão 50 mm ph 7,4 e azida sódica <0,095%. 4. CAL 2 - Calibrador 2 - Pronto para uso. Armazenar entre 2-8 ºC. Ver a concentração no rótulo do frasco. Preparação líquida contendo íons potássio em solução tampão 50 mm ph 7,4 e azida sódica <0,095%. Os reagentes devem permanecer fora da temperatura de armazenamento somente pelo tempo necessário para se obter o volume a ser utilizado. Os reagentes não abertos, quando armazenados nas condições indicadas, são estáveis até a data de expiração impressa no rótulo. Durante o manuseio, os reagentes e o calibrador estão sujeitos a contaminações de natureza química e microbiana que podem provocar redução da estabilidade. Precauções e cuidados especiais Assegurar que os calibradores estejam em equilíbrio com a temperatura ambiente antes do uso. Os calibradores devem ser homogeneizados suavemente antes do uso Assegurar que a determinação de potássio seja realizada após a determinação de sódio sempre que ambos os analitos forem determinados numa mesma amostra. Sugere-se inserir, no protocolo dos instrumentos automáticos, a lavagem da sonda antes da realização do ensaio para determinação de potássio, a fim de reduzir a contaminação do reagente oriunda de arraste. A existência de bolhas nos reagentes e/ou nas amostras (calibradores, controles e amostras de pacientes) durante a execução do teste, é causa comum de erros na determinação do analito. Sugere-se não misturar reagentes de diferentes lotes. Os cuidados habituais de segurança devem ser aplicados na manipulação dos reagentes, os quais não devem ser pipetados com a boca. Deve-se tomar cuidado para evitar a ingestão e no caso de contato com os olhos, deve-se lavar imediatamente com grande quantidade de água e procurar auxílio médico. Os reagentes e calibradores contêm azida que é tóxica. Deve-se tomar cuidado para evitar a ingestão e, no caso de contato com os olhos, devese lavar imediatamente com grande quantidade de água e procurar auxílio médico. A azida pode formar compostos altamente explosivos com tubulações de chumbo e cobre. Utilizar grandes volumes de água para descartar reagentes e calibradores. 3. CAL - Calibrador - Pronto para uso. Armazenar entre 2-8 ºC. Ver a concentração no rótulo do frasco. 0 Português - Ref.: 25
2 Material necessário e não fornecido. Analisador capaz de medir com exatidão a absorbância em 380 nm. 2. es da linha Qualitrol H - Labtest. 3. Banho-maria mantido à temperatura constante (37 ºC). 4. Pipetas para medir amostras e reagentes. 5. Cronômetro. Amostra Usar somente soro. Não utilizar amostra hemolisada. O analito é estável por até 5 dias se armazenado entre 2e8ºC,eporaté2meses em temperatura igual ou inferior a 20 ºC negativos, se armazenado em recipiente apropriado para congelamento. Assegurar que as amostras estejam descongeladas e homogeneizadas antes da sua utilização. Não usar amostras com sinais de contaminação ou amostras congeladas e descongeladas repetidas vezes. Deve ser criado um Procedimento Operacional Padrão (POP) para coleta, preparação e armazenamento da amostra. Enfatizamos que os erros devidos à amostra podem ser muito maiores que os erros ocorridos durante o procedimento analítico. Como nenhum teste conhecido pode assegurar que amostras de sangue não transmitem infecções, todas elas devem ser consideradas como potencialmente infectantes. Portanto, ao manuseá-las devem-se seguir as normas estabelecidas para biossegurança. Para descartar os reagentes e o material biológico sugerimos aplicar as normas locais, estaduais ou federais de proteção ambiental. Interferências Concentrações de íons sódio (Na ) até 50 mm, bilirrubina conjugada até 20 mg/dl, bilirrubina não conjugada até 5 mg/dl, ácido ascórbico até 0 mm e triglicérides até 000 mg/dl não produzem interferências significativas. Procedimento Sistema manual e semiautomático. Em um tubo rotulado Calibrador, Calibrador 2 e Teste, pipetar. 4. Homogeneizar e transferir imediatamente para a cubeta termostatizada a 37 ºC 0,2 ºC. Disparar simultaneamente o cronômetro e registrar a absorbância (A) após 2 minutos. 5. Registrar a absorbância (A2) decorridos 4 minutos. O procedimento sugerido é adequado para fotômetros cujo volume mínimo de solução necessário para medição é menor ou igual a 0,8 ml. Deve ser feita uma verificação da necessidade de ajuste do volume para o fotômetro utilizado. Os volumes de amostra e reagente podem ser modificados proporcionalmente, sem prejuízo para o desempenho do teste, mantendo-se inalterado o procedimento de cálculo. Em caso de redução dos volumes, é fundamental que se observe o volume mínimo necessário para a medição fotométrica. Volumes de amostra menores que 0,0 ml são críticos em aplicações manuais e devem ser usados com cautela porque aumentam a imprecisão da medição. Cálculos Sistema manual. Calcular a diferença entre a absorbância e a absorbância 2 para cada calibrador ( Abs): N 2 Calcular o fator conforme a equação descrita abaixo: [Cal. ] = concentração do Calibrador [Cal. 2] = concentração do Calibrador 2 [Cal. 2] - [Cal. ] 7,2-3,0 4,2 Fator = = = = 23,2 Abs Cal. 2 - Abs Cal. 0,562-0,38 0,8 Fator = 23,2 Calibradores Concentração (mmol/l) 3,0 7,2 Em seguida, calcular a interseção aplicando a seguinte equação: Interseção = Fator x Abs Cal. - [Cal. ] = 23,2 x 0,38-3,0 = 8,83-3,0 = 5,83 Interseção = 5,83 Absorbância Abs 2,022,829 Abs 2,64,267 Abs Abs - Abs 2 0,38 0,562 Reagente Amostra Calibrador Calibrador 2 0,600 ml 0,600 ml 0,05 ml 0,05 ml Teste 0,600 ml 0,05 ml Para obter a concentração da amostra, calcular o delta da absorbância e aplicar na equação a seguir: Concentração da amostra (mmol/l) = Abs amostra x fator - interseção 2. Homogeneizar e incubar em banho-maria a 37 ºC 0,2 ºC por 5 minutos. 3. Ajustar o zero do fotômetro com água destilada ou deionizada e adicionar. Reagente 2 0,50 ml 0,50 ml 0,50 ml Exemplo Amostra Absorbância Abs Abs 2 2,036,62 Abs Abs - Abs 2 0,45 Concentração da amostra (mmol/l) = Abs amostra x fator - interseção. 02 Português - Ref.: 25
3 Concentração da amostra (mmol/l) = 0,45 x 23,2-5,83 Concentração da amostra (mmol/l) = 3,80 Calibração. Assegurar que os calibradores estejam em equilíbrio com a temperatura ambiente antes do uso. Homogeneizar suavemente os calibradores antes do uso. Sistema manual e semiautomático Calibração de 2 pontos Pontos e 2: Calibrador e 2 Sistema Automático. Realizar, diariamente, o branco de reagente com água deionizada. Calibração de 3 pontos Ponto 0: Água deionizada Pontos e 2: Calibrador e 2. Intervalo de calibrações Quando o controle interno da qualidade indicar. Quando utilizar novo lote de reagente. Quando utilizar novos frascos de reagente de um mesmo lote, caso uma nova calibração tenha sido realizada durante a utilização do frasco anterior. Parâmetros para analisadores automáticos Parâmetros Tipo de Reação Direção da Reação de Onda primário de Onda secundário Temperatura Calibração Modelo da Calibração Volume de Amostra* Volume de R* Incubação Volume de R2 Leitura (Absorbância ) Leitura 2 (Absorbância 2) Aplicação Cinética Decrescente 380 nm 700 nm 37 ºC 3 pontos Ponto 0: Branco (Água deionizada) Ponto : Calibrador Ponto 2: Calibrador 2 Linear 5 L 200 L 300 segundos de incubação a 37 ºC de R amostra 50 L Após 20 segundos de incubação a 37 ºC de R amostra R2 Após 240 segundos de incubação a 37 ºC de R amostra R2 *Os volumes de amostra e reagentes podem ser modificados proporcionalmente sem prejuízo para o desempenho do teste. Em caso de redução dos volumes é fundamental que se observe o volume mínimo necessário para a medição fotométrica. Intervalo operacional. O intervalo operacional de medição é de 2,0 a 8,0 mmol/l. e interno da qualidade. O laboratório deve manter um programa de controle interno da qualidade que defina claramente os regulamentos aplicáveis, objetivos, procedimentos, critérios para especificações da qualidade e limites de tolerância, ações corretivas e registro das atividades. Materiais de controle devem ser utilizados para monitorar a imprecisão da medição e desvios da calibração. Recomenda-se utilizar os produtos da linha Qualitrol - Labtest para controle interno da qualidade em ensaios de química clínica. Intervalo de referência 2 Estes valores devem ser utilizados apenas como orientação. Recomenda-se que cada laboratório estabeleça, na população atendida, sua própria faixa de valores de referência. Soro: 3,5-5, mmol/l Conversão: Unidade SI (mmol/l) x = Unidade Convencional (meq/l). Características do desempenho 3 Estudos de recuperação. Em uma amostra com concentração de potássio igual a 5,6 mmol/l foi adicionada quantidades diferentes do analito, sendo obtidos os seguintes resultados: Inicial 5,60 5,60 Concentração (mmol/l) Adicionada,20 2,40 O erro sistemático proporcional estimado no nível de decisão de 5,8 mmol/l é 0,003 mmol/l. O erro sistemático médio de (0,05%) atende a especificação ótima para Erro Sistemático Total (,8%) baseada nos componentes da variação biológica (VB) 4. Estudos de comparação de métodos. O método proposto foi comparado com método Eletrodo Íon Seletivo (ISE), sendo obtidos os seguintes resultados: Número de amostras Intervalo de concentração (mmol/l) Equação da regressão Coeficiente de correlação Esperada 6,80 8,0 Encontrada Percentual de recuperação 6,82 00,3% 7,96 99,6% Método Método Labtest Comparativo 52 2,7-7,7 2,5-7,8 Método Labtest =,0703 x Comparativo - 0,3042 0,990 Utilizando a equação da regressão, o erro sistemático (bias) foi igual 3,% e,79% na concentração de 3,0 e 5,8 mmol/l, respectivamente. Estudos de precisão. Os estudos de precisão foram realizados utilizando amostras com concentrações iguais a 4,62 mmol/l e 6,69 mmol/l. Repetitividade - Imprecisão intraensaio Amostra Amostra 2 N Média DP CV (%) 80 4,62 0,073, ,96 0,084,20 03 Português - Ref.: 25
4 Reprodutibilidade - Imprecisão total Amostra Amostra 2 O erro total (erro aleatório erro sistemático) estimado no nível de decisão igual a 5,8 mmol/l é igual a 4,7%. Os resultados indicam que o método atende à especificação desejável para Erro Total ( 5,8%) baseada nos componentes da VB. Sensibilidade metodológica. Limite de detecção: 0,29 mmol/l. Equivale a 3 desvios padrão (DP) obtido a partir de 80 medições de uma amostra com concentração de potássio igual a 4,62 mmol/l. Efeitos da diluição de matriz. Amostra com concentração igual a 8,0 mmol/l foi utilizada para avaliar a resposta do sistema na diluição da matriz com salina. Usando fatores de diluição entre,6 e 2, foi encontrada recuperação média de 98,0%. O erro sistemático médio (2,0%) atende à especificação mínima para o Erro Sistemático Total ( 2,8%) baseada nos componentes da VB. Significado clínico. A necessidade de K para o organismo é satisfeita por uma ingestão de 50 a 50 mmol/dia. O potássio absorvido do tubo digestivo é rapidamente distribuído; uma pequena quantidade é captada pelas células, mas a maior parte é excretada pelos rins. A perturbação no balanço eletrolítico do potássio pode levar a graves consequências. A hipocalemia (diminuição no K extracelular) pode ser causada por alcalinemia, uso de insulina, vômitos, diarréia e doenças renais e podem levar a fraqueza muscular, irritabilidade, paralisia, aumento do ritmo cardíaco e, eventualmente parada cardíaca. A hipercalemia (concentração extracelular elevada de K ) pode ocorrer na insuficiência renal aguda, hiperplasia adrenal congênita com perda de sal e administração de diuréticos que bloqueiam a secreção tubular distal de K (por exemplo, amilorida e espironolactona). Observações N Média DP CV (%) 80 4,62 0,08, ,96 0,22,77. A limpeza e secagem adequadas do material utilizado são fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obtenção de resultados corretos. 2. O laboratório clínico tem como objetivo fornecer resultados exatos e precisos. A utilização de água de qualidade inadequada é uma causa potencial de erros analíticos. A água utilizada no laboratório deve ter a qualidade adequada a cada aplicação. Assim, para preparar reagentes, usar nas medições e para uso no enxágue final da vidraria, a água deve ter resistividade megaohm.cm ou condutividade microsiemens/cm e concentração de silicatos <0, mg/l. Quando a coluna deionizadora está com sua capacidade saturada ocorre liberação de vários íons, silicatos e substâncias com grande poder de oxidação ou redução que deterioram os reagentes em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados de modo imprevisível. Assim, é fundamental estabelecer um programa de controle da qualidade da água. Referências. M.N. Berry, R. D. Mazzachi, M, Pejakolvc, and M. J. Peak Enzymatic Determination of Potassium Serum. Clin. Chem. 35/5, (989). 2. C.A. Burtis, E.R. Ashwood, D. E. Bruns - Tietz Text book of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics, 4 ed. 3. Labtest: Dados de Arquivo. 4.Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología Molecular. Disponible en: < biologica_%7c_bases_de_datos_y_documentos_del_comite_de_g arantia_de_la_cali.> (acesso em 02/20). Apresentação Produto Potássio Enzimático Referência 25-/33 25-/4 CS 400/ /4 O número de testes em aplicações automáticas depende dos parâmetros de programação. Informações ao consumidor [Termos e Condições de Garantia] CAL CAL 2 CAL CAL 2 CAL CAL 2 Conteúdo X 24 ml 2 X 9 ml X 3 ml 2 X 0 ml 2 X 3 ml 2 2 X 0 ml A Labtest Diagnóstica garante o desempenho deste produto, dentro das especificações, até a data de expiração indicada nos rótulos, desde que os cuidados de utilização e armazenamento indicados nos rótulos e nestas instruções sejam seguidos corretamente. Labtest Diagnóstica S.A. CNPJ: / Av. Paulo Ferreira da Costa, Vista Alegre - CEP Lagoa Santa. Minas Gerais Brasil - Serviço de Apoio ao Cliente (Ligação Gratuita) sac@labtest.com.br Revisão: Setembro, 202 Ref.: 0057 Copyright by Labtest Diagnóstica S.A. Reprodução sob prévia autorização 04 Português - Ref.: 25
5 PROTOCOLO DE AUTOMAÇÃO PARA O LABMAX Potássio Enzimático Ref. 25 Item Name DATA INFORMATION UNITS DECIMALS ANALYSIS TYPE # mmol/l RATE K25 CALIBRATION TYPE Linear STANDARD #4 #5 #3 #6 Main W.Length Sub W.length 2 METHOD Enzimático CORR. SLOPE INTER Y = X 0 NORMAL RANGE Serum Urine Plasma CSF Dialysis Other LOW MALE HIGH LOW FEMALE HIGH # Posição de a 77 no painel de a concentração do analito para o material Calibrador (Ref. 25.3) e Calibrador 2 (Ref. 25.4) Item Name ASPIRATION KIND SAMPLE REAGENT VOL REAGENT2 VOL MONITOR Single # Double VOLUME Third Mix. OFF ON 3 L R Blank Water Blank R-Blank 0 LEVEL POINT SPAN K25 DATA PROCESS READ MAIN SUB FACTOR Blank correction PROZONE CHECK FIRST SECOND THIRD ABSORBANCE LIMIT START END LOW HIGH ENDPOINT LIMIT LINEAR CHECK(%) START END LIMIT(%) Low Low 0 99 High High 2 Item Name AUTO RERUN SW # K25 AUTO RERUN CONDITION (ABSORBANCE) 3 ON OFF Absorbance Range AUTO RERUN RANGE (RESULTS) Serum Urine Plasma CSF Dialysis Other Lower Higher Lower Higher Prozone Range 05 Português - Ref.: 25
6 Símbolos utilizados com produtos diagnósticos in vitro Símbolos usados con productos diagnósticos in vitro Symbols used with ivd devices Conteúdo suficiente para < n > testes Contenido suficiente para < n > tests Contains sufficient for < n > tests Risco biológico Riesgo biológico Biological risk Data limite de utilização (aaaa-mm-dd ou mm/aaaa) Estable hasta (aaaa-mm-dd o mm/aaaa) Use by (yyyy-mm-dd or mm/yyyy) Marca CE Marcado CE CE Mark Calibrator Material Tóxico Tóxico Poison Calibrator Material Reagente Reactivo Reagent Limite de temperatura (conservar a) Temperatura limite (conservar a) Temperature limitation (store at) Fabricado por Elaborado por Manufactured by Representante Autorizado na Comunidade Europeia Representante autorizado en la Comunidad Europea Authorized Representative in the European Community Número do lote Denominación de lote Batch code Consultar instruções de uso Consultar instrucciones de uso Consult instructions for use e Número do catálogo Número de catálogo Catalog Number e negativo negativo Negative control Adições ou alterações significativas Cambios o suplementos significativos Significant additions or changes e positivo positivo Positive control Produto diagnóstico in vitro Dispositivo de diagnóstico in vitro In vitro diagnostic device e Liofilizado Liofilizado Lyophilized Corrosivo Corrosivo Corrosive Período após abertura Período post-abertura Period after-opening Uso veterinário Uso veterinario Veterinary use Instalar até Instalar hasta Install before Ref.: Português - Ref.: 25
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