2. Reagente Armazenar entre 2-8ºC.

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1 LIPASE Liquiform Instruções de Uso Ref.:107 MS Finalidade. Sistema enzimático para determinação quantitativa da lipase pancreática em soro e plasma. Uso profissional. [Somente para uso diagnóstico in vitro.] Princípio. O substrato cromogênico 1-2-o-dilauril-rac-glicero- 3-ácido glutárico(6-metilresorufina)-ester é clivado em meio alcalino por ação catalítica da lipase e forma o 1-2-o-dilauril-rac-glicerol e o intermediário instável ácido glutárico-(6-metilresorufina)ester que se decompõe espontaneamente no meio alcalino para formar ácido glutárico e metilresorufina (cor vermelha). A intensidade da cor vermelha formada é diretamente proporcional à atividade da lipase na amostra. Concentrações de triglicérides até 2000 mg/dl, bilirrubina até 60 mg/dl e hemoglobina até 500 mg/dl não interferem significativamente na reação. O método pode ser utilizado em procedimento manual ou procedimentos semiautomáticos e totalmente automatizados que permitem a aplicação de sistema bi-reagente. Metodologia. Enzimática colorimétrica. Reagentes 1. Reagente Armazenar entre 2-8ºC. Contém tampão 50 mmol/l ph 8,0; colipase 1,0 mg/l; ativador; surfactante e azida sódica <0,095%. Lipase substrato cromogênico glutárico-(6-metilresorufina) ester. 1-2-o-dilauril-rac-glicerol + ácido 2. Reagente Armazenar entre 2-8ºC. Contém tampão 10 mmol/l ph 4,0; 1-2-o-dilauril-rac-glicero-3-ácido glutárico(6-metilresorufina)ester 270 mol/l; surfactante e azida sódica <0,095%. Ácido glutárico-(6-metilresorufina) ester ácido glutárico + metilresorufina decomposição espontânea Os reagentes quando armazenados nas condições indicadas são estáveis até a data de expiração impressa no rótulo. Durante o manuseio, os reagentes estão sujeitos a contaminações de natureza química e microbiana que podem provocar redução da estabilidade. 1,2 Características do sistema. O sistema Lipase Liquiform da Labtest utiliza um substrato cromogênico sintético similar aos triglicérides com ácidos graxos de cadeias longas, que é clivado por ação da lipase pancreática ativada enzimaticamente pela colipase na presença de surfactantes. O ensaio enzimático utiliza uma microemulsão homogênea estável que proporciona uma interface com qualidade constante entre as fases lipóide (substrato) e aquosa (meio da reação contendo lipase). Por consequência se obtém a otimização do desempenho do ensaio com elevada especificidade analítica e excelente reprodutibilidade metodológica. Várias esterases comumente presentes nas amostras de sangue, capazes de produzir interferências em outros métodos para determinação da lipase, incluindo o método turbidimétrico, não produziram interferência neste método. O método é cinco vezes mais sensível que o método turbidimétrico e não apresenta os inconvenientes de resultados negativos quando a lipase se encontra com atividade diminuída ou próxima do limite inferior do intervalo de referência. Os reagentes devem ser protegidos da luz. Precauções e cuidados especiais Os cuidados habituais de segurança devem ser aplicados na manipulação dos reagentes, que não devem ser pipetados com a boca. Os Reagentes 1 e 2 contêm azida sódica que é tóxica. Não ingerir e, no caso de contato com os olhos lavar imediatamente com grande quantidade de água e procurar auxílio médico. A azida sódica pode formar compostos altamente explosivos com tubulações de chumbo e cobre. Portanto, utilizar grandes volumes de água para descartar os reagentes. Materiais necessários e não fornecidos 1. Fotômetro com cubeta termostatizada a 37ºC capaz de medir com exatidão a absorbância em 570 nm (550 a 600). 2. Pipetas para medir amostras e reagentes. 3. Cronômetro. 01 Português - Ref.: 107

2 Amostra Usar soro ou plasma (heparina). Amostras com EDTA, citrato ou fluoreto produzem resultados diminuídos por inibição da atividade da lipase. 7. Usar a diferença de absorbância ( A) entre os dois tempos (A180 - A 90) para calcular os resultados. Cálculos. Ver linearidade. A atividade da lipase na amostra é estável 7 dias entre 2-25ºC e 1 ano a 20ºC negativos. Congelar o material em recipiente hermeticamente fechado ( criotubos ) para evitar evaporação. Evitar congelamentos e descongelamentos repetidos. Amostras descongeladas devem ser bem homogeneizadas antes da utilização. Não usar vórtex ou similar. Não usar amostras com sinais de contaminação microbiana. Como nenhum teste conhecido pode assegurar que amostras de sangue não transmitem infecções, todas devem ser consideradas como potencialmente infectantes. Portanto, ao manuseá-las devem-se seguir as normas estabelecidas para biossegurança. Lipase (U/L) = Teste (A - A ) Calibrador (A - A ) CC: concentração do calibrador Exemplo Teste: A 90 = 0,0334 A 180 = 0,0864 Calibrador: A 90 = 0,0492 A 180 = 0,1273 x CC Para descartar os reagentes e o material biológico sugerimos aplicar as normas locais, estaduais ou federais de proteção ambiental. Interferências Concentrações de bilirrubina total até 60 mg/dl, hemoglobina até 500 mg/dl e triglicérides até 2000 mg/dl não interferem significativamente na reação. Amostras com bilirrubina, hemoglobina e triglicérides em concentrações maiores que as acima referidas devem ser diluídas em NaCl 150 mmol/l (0,85%) antes de se realizar os ensaios. Multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluição. Procedimento A metodologia deve ser necessariamente realizada em formato bireagente e a ordem de adição: reagente 1, amostra e reagente 2 não deve ser alterada. Os reagentes devem permanecer abertos e fora da temperatura de armazenamento somente o tempo necessário para obter o volume a ser utilizado no teste. 1. Ajustar a temperatura do fotômetro para 37ºC e o comprimento de onda em 570 nm ( ); 2. Acertar o zero com água deionizada; 3. Em um tubo rotulado Teste ou Calibrador, pipetar 0,70 ml do Reagente 1; 4. Adicionar 0,010 ml de amostra ou calibrador; 5. Adicionar 0,40 ml do Reagente 2, homogeneizar, transferir imediatamente para a cubeta termostatizada e disparar simultaneamente o cronômetro; Concentração do Calibrador: 93,4 U/L 0,0864-0,0334 Lipase (U/L) = x 93,4 = 63,4 0,1273-0,0492 Devido a grande reprodutibilidade que pode ser obtida com a metodologia, o método do fator pode ser empregado. FATOR = CC Calibrador (A - A ) Lipase (U/L) = Teste (A - A ) x Fator Exemplo 93,4 Fator = = ,1273-0,0492 Lipase (U/L) = (0,0864-0,0334) x 1196 = 63,4 Calibração. A absortividade molar da metilresorufina, produto da reação, é utilizada como sistema de referência para a calibração do ensaio. Calibrações manuais obter o fator de calibração ao usar novo lote de reagentes ou quando o controle interno da qualidade indicar. Sistemas automáticos Branco de reagentes: água ou solução de cloreto de sódio 150 mmol/l (0,85%); Calibrador: Linha Calibra da Labtest. Intervalos de calibração; Calibração de 2 pontos ao mudar de lote; Calibração de 2 pontos quando o controle da qualidade indicar. 6. Medir as absorbâncias aos 90 e 180 segundos; 02 Português - Ref.: 107

3 Linearidade A reação é linear entre 3,0 e 300 U/L. Em casos de valores maiores que 300 U/L, diluir a amostra com NaCl 150 mmol/l (0,85%), realizar nova determinação e multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluição. e interno da qualidade. O laboratório deve manter um programa de controle interno da qualidade que defina claramente os regulamentos aplicáveis, objetivos, procedimentos, critérios para especificações da qualidade e limites de tolerância, ações corretivas e registro das atividades. Materiais de controle devem ser utilizados para monitorizar a imprecisão da medição e desvios da calibração. Sugere-se que as especificações para o coeficiente de variação e erro total sejam 3-5 baseadas nos componentes da variação biológica (VB). Sugere-se utilizar os produtos da linha Qualitrol - Labtest para controle interno da qualidade em ensaios de química clínica. Número de amostras Intervalo (U/L) Equação da regressão Coeficiente de correlação Método Comparativo (MC) Lipase Liquiform a a 374 Lipase Liquiform = 0,914*(MC)-0,581 U/L 0,985 Utilizando a equação da regressão, o erro sistemático (bias) estimado é igual a -10,5% para o nível de 30 U/L e -9,2% para o nível de 90 U/L. A média dos erros é menor que o erro sistemático analítico da especificação desejável baseada nos componentes da VB que é 10,1%. Estudos de precisão. Os estudos de precisão foram realizados utilizando duas amostras. 6,7 Intervalo de referência. Estes valores devem ser usados apenas como orientação. Recomenda-se que cada laboratório estabeleça, na população atendida, sua própria faixa de valores de referência. Repetitividade - imprecisão intraensaio Amostra 1 Amostra 2 N Média 30,0 90,0 DP (U/L) 0,204 0,585 CV (%) 0,68 0,65 Idade <1 ano 1 a 12 anos 13 a 18 anos >18 anos Intervalo de referência (U/L) Reprodutibilidade - imprecisão total Amostra 1 Amostra 2 N Média 30,0 90,0 DP (U/L) 0,390 1,125 CV (%) 1,30 1,25 Conversão: Unidades convencionais (U/L) x 0,0167 = Unidades SI ( kat/l) Características de desempenho 8 Estudos de Recuperação. Em duas amostras com concentrações de Lipase iguais a 48,7 U/L e 90,3 U/L foram adicionadas quantidades diferentes do analito, sendo obtidos os seguintes resultados: Atividade (U/L) Inicial 48,7 90,3 Adicionada Esperada Encontrada 48,7 90,3 97,4 180,6 90,3 164,2 Recuperação (%) 92,7 91,2 O erro sistemático proporcional médio estimado é igual a -2,4 U/L para o nível de 30 U/L e -7,2 U/L para o nível de 90 U/L. Estudos de comparação de métodos. A exatidão do método foi verificada por comparação com o método turbidimétrico, sendo obtidos os seguintes resultados: A imprecisão encontrada atende a especificação desejável para imprecisão total baseada nos componentes da VB que é 11,6%. O erro total (erro aleatório + erro sistemático) estimado é igual a 12,6% para o nível de 30 U/L e 11,3% para o nível de 90 U/L. Os resultados indicam que o método atende à especificação desejável para erro total ( 29,1%) baseada nos componentes da VB. Sensibilidade metodológica. Uma amostra não contendo Lipase foi utilizada para calcular o limite de detecção do ensaio, tendo sido encontrado um valor igual a 1,0 U/L, equivalente à média de 10 replicatas mais três desvios padrão. Efeitos da diluição da matriz. Uma amostra com concentração igual 298 U/L foi utilizada para avaliar a resposta do sistema na diluição da matriz com solução de NaCl 150 mmol/l (0,85%). Usando fator de diluição igual a 2 foi encontrada recuperação média de 110,2% que corresponde a um erro sistemático médio igual a 10,2%. Significado clínico. A lipase pancreática é uma enzima digestiva produzida principalmente pelas células acinares do pâncreas exócrino. Tem o papel fisiológico de hidrolisar triglicérides com ácidos graxos de cadeias longas no intestino delgado (lipólise). 03 Português - Ref.: 107

4 Sua avaliação é essencial no diagnóstico das patologias pancreáticas. Ela se eleva nas primeiras 8 horas após o início da agressão pancreática, atingindo valores mais altos em 24 horas e mantendo-se elevada em torno de 7 a 14 dias. Seus níveis geralmente não permanecem elevados por mais de 2 semanas. Quando isso acontece, sugere complicações como abscessos e pseudocistos. Normalmente seus níveis elevam-se quase que paralelamente aos da amilase, um pouco mais tarde, mantendo-se elevados por um período mais longo. Seu aumento não necessariamente se correlaciona com a gravidade da doença. O uso combinado da avaliação sérica da lipase e de amilase permite um melhor diagnóstico. Cerca de 20% dos casos de pancreatite aguda cursam com níveis de amilase normais e com a lipase isoladamente elevada. Nas parotidites agudas, em que a amilase pode se apresentar elevada, os níveis séricos de lipase não se alteram, auxiliando no diagnóstico diferencial. A lipase é, portanto um marcador mais específico de doença pancreática aguda do que a amilase. Seus níveis estão aumentados em pacientes com pancreatite aguda e recorrente, abscesso ou pseudocisto pancreático, trauma, carcinoma de pâncreas, obstrução dos ductos pancreáticos e no uso de fármacos (opiáceos). Está também aumentada na maior parte das condições inflamatórias da cavidade abdominal, doenças do trato biliar, abscessos abdominais e insuficiência renal aguda e crônica (com menor freqüência do que a amilase). A lipase é filtrada pelos glomérulos, devido ao seu baixo peso molecular. Em condições usuais, é totalmente reabsorvida pelos túbulos proximais, estando ausente da urina de pacientes normais. Nos distúrbios renais que cursam com alteração da capacidade de reabsorção tubular, a lipase pode ser detectada na urina, numa relação inversa com o clearance da creatinina. Observações 1. A limpeza e secagem adequadas do material utilizado são fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obtenção de resultados corretos. 2. O laboratório clínico tem como objetivo fornecer resultados exatos e precisos. A utilização de água de qualidade inadequada é uma causa potencial de erros analíticos. A água deionizada ou destilada utilizada no laboratório deve ter a qualidade adequada a cada aplicação. Assim, para preparar reagentes, usar nas medições e para uso no enxágue final da vidraria, deve ter resistividade 1 megaohm.cm ou condutividade 1 microsiemens/cm e concentração de silicatos <0,1 mg/l. Quando a coluna deionizadora está com sua capacidade saturada ocorre produção de água alcalina com liberação de vários íons, silicatos e substâncias com grande poder de oxidação ou redução que deterioram os reagentes em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados de modo imprevisível. Assim, é fundamental estabelecer um programa de controle da qualidade da água. 3. Para uma revisão das fontes fisiopatológicas e medicamentosas de interferência nos resultados e na metodologia sugere-se consultar: Referências 1. Neumann U, Junius M, Maier B. A Sensitive Colorimetric Assay for the Kinetic Lipase Determination in Serum. Boehringer Mannheim GmbH, Biochemical Research Center, Prinzing U, Zielenski L, Schellong L, Klein G, Meier G, Hammer B. Kinetic colorimetric assay for pancreatic lipase (PL) based on a th chromogenic substrate. Poster No 122, 50 Annual Meeting of the American Association for Clinical Chemistry, Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología Molecular, Base de Datos de Variación Biológica. Disponível em: < (acesso em 04/2006). 4. Basques JC. Especificações da Qualidade Analítica. Labtest Diagnóstica Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T. Clin Chem 1981;27: Junge W, Abicht K, Goldman J, Luthe H, Niederau Ch, Parker J, Watanabe S, Prinzing U, Klein G. Evaluation of the Colorimetric Liquid Assay for Pancreatic Lipase on Hitachi Analyzers in 7 Clinical Centers in Europe, Japan and USA. Clin Chem Lab, 1999, 37 (Special Suppl): Abicht K, Heiduk M, Körn S, Klein G. Lipase, p-amylase, CRP-hs and creatinine: reference intervals from infancy to childhood. Poster presented at the 15th IFCC-FESCC EUROPEAN Congress of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine, Labtest: Dados de Arquivo. Apresentação Produto Referência Conteúdo Lipase Liquiform Lipase Liquiform Labmax 560/ / /26 Estão disponíveis aplicações para sistemas automáticos que permitem a utilização de metodologias bi-reagente. *O número de testes em aplicações automáticas depende dos parâmetros de programação. Informações ao consumidor [Termos e condições de garantia] X 10 ml 3 X 6 ml 2 X 17 ml 2 X 9 ml A Labtest Diagnóstica garante o desempenho deste produto dentro das especificações até a data de expiração indicada nos rótulos, desde que os cuidados de utilização e armazenamento indicados nos rótulos e nestas instruções sejam seguidos corretamente. 04 Português - Ref.: 107

5 Labtest Diagnóstica S.A. CNPJ: / Av. Paulo Ferreira da Costa, Vista Alegre - CEP Lagoa Santa. Minas Gerais Brasil - Serviço de Apoio ao Cliente (Ligação Gratuita) sac@labtest.com.br Revisão: Abril, 2014 Ref.: Copyright by Labtest Diagnóstica S.A. Reprodução sob prévia autorização 05 Português - Ref.: 107

6 Símbolos utilizados com produtos diagnósticos in vitro Símbolos usados con productos diagnósticos in vitro Symbols used with ivd devices Conteúdo suficiente para < n > testes Contenido suficiente para < n > tests Contains sufficient for < n > tests Risco biológico Riesgo biológico Biological risk Data limite de utilização (aaaa-mm-dd ou mm/aaaa) Estable hasta (aaaa-mm-dd o mm/aaaa) Use by (yyyy-mm-dd or mm/yyyy) Marca CE Marcado CE CE Mark Calibrator Material Tóxico Tóxico Poison Calibrator Material Reagente Reactivo Reagent Limite de temperatura (conservar a) Temperatura limite (conservar a) Temperature limitation (store at) Fabricado por Elaborado por Manufactured by Representante Autorizado na Comunidade Europeia Representante autorizado en la Comunidad Europea Authorized Representative in the European Community Número do lote Denominación de lote Batch code Consultar instruções de uso Consultar instrucciones de uso Consult instructions for use e Número do catálogo Número de catálogo Catalog Number e negativo negativo Negative control Adições ou alterações significativas Cambios o suplementos significativos Significant additions or changes e positivo positivo Positive control Produto diagnóstico in vitro Dispositivo de diagnóstico in vitro In vitro diagnostic device e Liofilizado Liofilizado Lyophilized Corrosivo Corrosivo Corrosive Período após abertura Período post-abertura Period after-opening Uso veterinário Uso veterinario Veterinary use Instalar até Instalar hasta Install before Ref.: Português - Ref.: 107