SÓDIO ENZIMÁTICO. 01 Português - Ref.: 124. Ref.:124 MS Instruções de Uso. Finalidade. Princípio. Precauções e cuidados especiais
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- Fábio Branco de Abreu
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1 SÓDIO ENZIMÁTICO Instruções de Uso Ref.:24 MS Finalidade. Sistema para determinação quantitativa do íon sódio em amostras de soro, por reação enzimática, em modo cinético. [Somente para uso diagnóstico in vitro.] Princípio. O íon sódio ativa a reação enzimática entre β-d-galactosidase dependente de sódio e seu substrato ONPG (O-nitrofenil-β-D-galactopiranose) convertendo-o a O- nitrofenil e galactose. A velocidade de formação do produto em 405 nm está relacionada à quantidade de sódio presente na amostra. ONPG Características do sistema. Metodologia. Reagentes CAL - 4. CAL 2 - Na+ β-d-galactosidase O-nitrofenil + galactose O método Sódio Enzimático - Labtest foi desenvolvido utilizando a especificidade da enzima β-d-galactosidase dependente de sódio, sendo uma alternativa prática às metodologias fotometria de chama e Eletrodo Íon Seletivo (ISE) que demandam o uso de sistemas específicos. Os componentes da reação se encontram distribuídos em 2 reagentes, prontos para uso, conferindo maior estabilidade à forma líquida. A grande especificidade analítica, de simples e fácil aplicação em analisadores automáticos, capazes de medir absorbâncias em 405 nm, permite a realização da medição do íon junto aos demais exames bioquímicos, conferindo rapidez e praticidade ao processo analítico. Enzimática. Reagente - Pronto para uso. Armazenar entre 2-8 ºC. Contém tampão <500 mm ph 8,5; cryptand >0,4mM; β-d- galactosidase <8U/mL, isotiazolona 0,02%. Reagente 2 - Pronto para uso. Armazenar entre 2-8 ºC. Contém tampão <500 mm ph 6,5; ONPG >0,5 mm; isotiazolona 0,02%. Calibrador - Pronto para uso. Armazenar entre 2-8 ºC. Ver a concentração no rótulo do frasco. Preparação líquida contendo íons sódio em solução tampão 50 mm ph 7,4 e azida sódica <0,095%. Calibrador 2 - Pronto para uso. Armazenar entre 2-8 ºC. Ver a concentração no rótulo do frasco. Preparação líquida contendo íons sódio em solução tampão 50 mm ph 7,4 e azida sódica <0,095%. Os reagentes não abertos, quando armazenados nas condições indicadas, são estáveis até a data de expiração impressa no rótulo. Durante o manuseio, os reagentes e os calibradores estão sujeitos a contaminações de natureza química e microbiana que podem provocar redução da estabilidade. Assegurar que os calibradores estejam em equilíbrio com a temperatura ambiente antes do uso. Os calibradores devem ser homogeneizados suavemente antes do uso. Assegurar que a determinação de sódio seja realizada antes da determinação de potássio sempre que ambos os analitos forem determinados numa mesma amostra. Sugere-se inserir, no protocolo dos instrumentos automáticos, a lavagem da sonda antes da realização do ensaio para determinação de sódio, a fim de reduzir a contaminação do reagente oriunda de arraste. A existência de bolhas nos reagentes e/ou nas amostras (calibradores, controles e amostras de pacientes) durante a execução do teste, é causa comum de erros na determinação do analito. Sugere-se não misturar reagentes de diferentes lotes. Os cuidados habituais de segurança devem ser aplicados na manipulação dos reagentes, os quais não devem ser pipetados com a boca. Deve-se tomar cuidado para evitar a ingestão e no caso de contato com os olhos, deve-se lavar imediatamente com grande quantidade de água e procurar auxílio médico. Os calibradores contêm azida sódica que é tóxica. Deve-se tomar cuidado para evitar a ingestão e, no caso de contato com os olhos, deve-se lavar imediatamente com grande quantidade de água e procurar auxílio médico. A azida pode formar compostos altamente explosivos com tubulações de chumbo e cobre. Utilizar grandes volumes de água para descartar reagentes e calibradores. Material necessário e não fornecido Precauções e cuidados especiais Analisador capaz de medir com exatidão absorbância em 405 nm. es da linha Qualitrol H - Labtest. Pipetas para medir amostras e reagentes. Cronômetro. Os reagentes devem permanecer fora da temperatura de armazenamento somente pelo tempo necessário para se obter o volume a ser utilizado. 0 Português - Ref.: 24
2 Usar somente soro. O analito é estável por 7 dias se armazenado entre 2 e 8 ºC, e por até 2 meses em temperatura igual ou inferior a 20 ºC negativos, se armazenado em recipiente apropriado para congelamento. Assegurar que as amostras estejam descongeladas e homogeneizadas antes da sua utilização. Não usar amostras com sinais de contaminação ou amostras congeladas e descongeladas repetidas vezes. Deve ser criado um Procedimento Operacional Padrão (POP) para colheita, preparação e armazenamento da amostra. Enfatizamos que os erros devidos à amostra podem ser muito maiores que os erros ocorridos durante o procedimento analítico. Como nenhum teste conhecido pode assegurar que amostras de sangue não transmitem infecções, todas elas devem ser consideradas como potencialmente infectantes. Portanto, ao manuseá-las devem-se seguir as normas estabelecidas para biossegurança. Para descartar os reagentes e o material biológico sugerimos aplicar as normas locais, estaduais ou federais de proteção ambiental. Concentrações de cloreto de potássio (KCl) até 0 mm, bilirrubina conjugada até 40 mg/dl, bilirrubina não conjugada até 40 mg/dl, ácido ascórbico até 0 mm, hemoglobina até 500 mg/dl e triglicérides até 000 mg/dl não produzem interferências significativas. Sistema Manual e Semi-automático.. Amostra Interferências Procedimento Identificar três tubos com as seguintes denominações: Calibrador, Calibrador 2 e Teste. Pipetar, conforme estabelecido na tabela abaixo: Os volumes de amostra e reagente podem ser modificados proporcionalmente, sem prejuízo para o desempenho do teste, mantendo-se inalterado o procedimento de cálculo. Em caso de redução dos volumes, é fundamental que se observe o volume mínimo necessário para a medição fotométrica. Volumes de amostra menores que 0,0 ml são críticos em aplicações manuais e devem ser usados com cautela porque aumentam a imprecisão da medição. Cálculos Sistema manual. Calcular a diferença entre a absorbância e a absorbância 2 para cada calibrador ( Abs): N 2 Calcular o fator conforme a equação descrita abaixo: [Cal. ] = concentração do Calibrador [Cal. 2] = concentração do Calibrador 2 [Cal. 2] - [Cal. ] 62,2-08, 54, Fator = = = = 25,5 Abs Cal. 2 - Abs Cal.,286 -,035 0,25 Fator = 25,5 Calibradores Concentração (mmol/l) 08, 62,2 Em seguida, calcular a interseção aplicando a seguinte equação: Interseção = Fator x Abs Cal. - [Cal. ] = 25,5 x,035-08, = 223,0-08, = 4,9 Interseção = 4,9 Absorbância Abs 0,677 0,847 Abs 2,72 2,33 Abs Abs - Abs 2,035,286 Reagente Amostra Calibrador 0,500 ml 0,020 ml Tubo Calibrador 2 Teste 0,500 ml 0,500 ml 0,020 ml 0,020 ml Para obter a concentração da amostra, calcular o delta da absorbância e aplicar na equação a seguir Concentração da amostra (mmol/l) = Abs amostra x fator - interseção Exemplo Homogeneizar. Ajustar o zero do fotômetro com água destilada ou deionizada e adicionar: Amostra Absorbância Abs Abs 2 0,8,98 Abs Abs - Abs 2,76 4. Homogeneizar e transferir imediatamente para uma cubeta termostatizada a 37 ºC ± 0,2 ºC. Disparar simultaneamente o cronômetro e, após 60 segundos, registrar a absorbância (A). 5. Reagente 2 0,250 ml 0,250 ml 0, 250 ml Aguardar registrar a absorbância (A2) decorridos 80 segundos. O procedimento sugerido é adequado para fotômetros cujo volume mínimo de solução necessário para medição é menor ou igual a 0,8 ml. Deve ser feita uma verificação da necessidade de ajuste do volume para o fotômetro utilizado. Concentração da amostra (mmol/l) = Abs amostra x fator - interseção. Concentração da amostra (mmol/l) =,76 x 25,5 4,9 Concentração da amostra (mmol/l) = 38,5 Calibração. Assegurar que os calibradores estejam em equilíbrio com a temperatura ambiente antes do uso. Homogeneizar suavemente os calibradores antes do uso. Sugere-se que os pontos da curva de calibração sejam obtidos a partir de duplicata de cada calibrador. 02 Português - Ref.: 24
3 Sistema Manual e Semi- automático Calibração de 2 pontos Pontos e 2: Calibrador e 2 Sistema Automático. Realizar, diariamente, o branco de reagente com água deionizada. Calibração de 3 pontos Ponto 0: Água deionizada. Pontos e 2: Calibrador e 2. Intervalo de calibrações Quando o controle interno da qualidade indicar. Quando utilizar novo lote de reagente. Quando utilizar novos frascos de reagente de um mesmo lote, caso uma nova calibração tenha sido realizada durante a utilização do frasco anterior. Parâmetros para analisadores automáticos Parâmetros Tipo de Reação Direção da Reação λ de Onda primário λ de Onda secundário Temperatura Calibração Modelo da Calibração Volume de Amostra* Volume de R* Volume de R2 Leitura (Absorbância ) Leitura 2 (Absorbância 2) *Os volumes de amostra e reagentes podem ser modificados proporcionalmente sem prejuízo para o desempenho do teste. Em caso de redução dos volumes é fundamental que se observe o volume mínimo necessário para a medição fotométrica. Intervalo operacional. 80 a 80 mmol/l. e interno da qualidade. Aplicação Cinética Crescente 405 nm 660 nm 37 ºC 3 pontos Ponto 0: Branco (Água deionizada) Ponto : Calibrador Ponto 2: Calibrador 2 Multi Ponto Linear 8 µ L 200 µ L 00 µ L Após 60 segundos de incubação a 37 ºC de R + amostra + R2 Após 80 segundos de incubação a 37 ºC de R + amostra + R2 O intervalo operacional de medição é de O laboratório deve manter um programa de controle interno da qualidade que defina claramente os regulamentos aplicáveis, objetivos, procedimentos, critérios para especificações da qualidade e limites de tolerância, ações corretivas e registro das atividades. Materiais de controle devem ser utilizados para monitorar a imprecisão da medição e desvios da calibração. Recomendase utilizar os produtos da linha Qualitrol H - Labtest para controle interno da qualidade em ensaios de química clínica. 2 Intervalo de referência. Estes valores devem ser utilizados apenas como orientação. Recomenda-se que cada laboratório estabeleça, na população atendida, sua própria faixa de valores de referência. Soro mmol/l. Conversão. Unidades SI (mmol/l) x = Unidade Convencional (meq/l) Características do desempenho Estudos de recuperação. Em uma amostra com concentração de sódio igual a 20,7 mmol/l foi adicionada quantidades diferentes do analito, sendo obtidos os seguintes resultados: Inicial 20,7 20,7 O erro sistemático proporcional estimado nos níveis de decisão de 35 e 50 mmol/l são,55 mmol/l e,72 mmol/l, respectivamente. Estudos de comparação de métodos. O método proposto foi comparado com método Eletrodo Íon Seletivo (ISE), sendo obtidos os seguintes resultados: Número de amostras Intervalo de concentração (mmol/l) Equação da regressão Concentração (mmol/l) Adicionada 34,5 5,7 Coeficiente de correlação Utilizando a equação da regressão, o erro sistemático (bias) foi igual,44% e 2,8% na concentração de 35 e 50 mmol/l, respectivamente Estudos de precisão. Esperada 55,2 72,5 Os estudos de precisão foram realizados utilizando amostras com concentrações iguais a 28,9 mmol/l e 55,8 mmol/l. 3 Método Comparativo Encontrada 57 Percentual de recuperação Inicial 52,4 98,2 7,7 99,5 Método Labtest Método Labtest =,088x Comparativo - 9,9478 0,983 Repetitividade - Imprecisão intra-ensaio Amostra Amostra 2 N Média DP CV (%) 40 28,9,66, ,8,72, Reprodutibilidade - Imprecisão total Amostra Amostra 2 N Média DP CV (%) 40 28,9 2,0, ,8 2,56,65 03 Português - Ref.: 24
4 O erro total (erro aleatório + erro sistemático) estimado nos níveis de decisão iguais a 35 mmol/l e 60 mmol/l é igual a 4,02% e 4,9%, respectivamente. Sensibilidade metodológica. Limite de detecção: 4,98 mmol/l. Equivale a 3 desvios padrão (DP) obtido a partir de 40 medições de uma amostra com concentração de sódio igual a 28,9 mmol/l. Efeitos da diluição de matriz. Amostra com concentração igual a 72,5 mmol/l foi utilizada para avaliar a resposta do sistema na diluição da matriz com água deionizada. Usando fatores de diluição entre, e,43 foi encontrada recuperação média de 98,5%. Significado clínico. O sódio tem sido utilizado para o diagnóstico e avaliação do tratamento de pacientes com problemas metabólicos e cardiovasculares e é considerado pela American Association of Clinical Chemistry (AACC), um risco potencial a saúde caso não esteja controlado. Portanto, a dosagem da concentração sérica do sódio é importante em exames de rotina e em emergências. Em um individuo saudável, a concentração de sódio no líquido extracelular é mantida entre mmol/l. Pequenas variações que extrapolam os níveis normais podem provocar graves danos à saúde. Doenças como aldosteronismo, diabetes insipidus, hipertensão adrenal, doença de Addison, desidratação, variações na secreção do hormônio antidiurético e outras doenças que interfiram no balanço eletrolítico, podem causar variação na concentração do sódio no individuo. Observações. A limpeza e secagem adequadas do material utilizado são fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obtenção de resultados corretos. 2. O laboratório clínico tem como objetivo fornecer resultados exatos e precisos. A utilização de água de qualidade inadequada é uma causa potencial de erros analíticos.a água utilizada no laboratório deve ter a qualidade adequada a cada aplicação. Assim, para preparar reagentes, usar nas medições e para uso no enxágüe final da vidraria, a água deve ter resistividade megaohm.cm ou condutividade microsiemens/cm e concentração de silicatos <0, mg/l. Quando a coluna deionizadora está com sua capacidade saturada ocorre liberação de vários íons, silicatos e substâncias com grande poder de oxidação ou redução que deterioram os reagentes em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados de modo imprevisível. Assim, é fundamental estabelecer um programa de controle da qualidade da água. Apresentação Produto Sódio Enzimático O número de testes em aplicações automáticas depende dos parâmetros de programação. Informações ao consumidor [Termos e Condições de Garantia] A Labtest Diagnóstica garante o desempenho deste produto, dentro das especificações, até a data de expiração indicada nos rótulos, desde que os cuidados de utilização e armazenamento indicados nos rótulos e nestas instruções sejam seguidos corretamente. Labtest Diagnóstica S.A. CNPJ: / Av. Paulo Ferreira da Costa, Vista Alegre - CEP Lagoa Santa. Minas Gerais Brasil - Serviço de Apoio ao Cliente (Ligação Gratuita) sac@labtest.com.br Edição: Outubro, 20 Ref.: 30 Equipamento Referência Labmax /38 Linha CS 24-/ /58 CAL CAL 2 CAL CAL 2 CAL CAL 2 Conteúdo X 24 ml 2 X 4 ml X 38 ml 2 X 20 ml 2 X 38 ml 2 2 X 20 ml Copyright by Labtest Diagnóstica S.A. Reprodução sob prévia autorização Referências. M.N. Berry, et al., (988) Clin. Chem. 34, C.A. Burtis, E.R. Ashwood, D. E. Bruns - Tietz Text book of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics, 4 ed. 3. Labtest: Dados de Arquivo. 04 Português - Ref.: 24
5 PROTOCOLO DE AUTOMAÇÃO PARA O LABMAX Sódio Enzimático Ref. 24 Item Name DATA INFORMATION UNITS DECIMALS ANALYSIS TYPE # mmol/l 0 RATE Na24 CALIBRATION TYPE Linear STANDARD #4 #5 #3 #6 Main W.Length Sub W.length 2 METHOD Enzimático CORR. SLOPE INTER Y = X + 0 NORMAL RANGE Serum Urine Plasma CSF Dialysis Other LOW MALE HIGH LOW FEMALE HIGH # Posição de a 77 no painel de a concentração do analito para o material calibrador (Ref. 24.3) e calibrador 2 (Ref. 24.4) Item Name ASPIRATION KIND SAMPLE REAGENT VOL REAGENT2 VOL MONITOR Single # Double VOLUME Third Mix. OFF ON 3 µl R Blank Water Blank R-Blank 0 LEVEL POINT SPAN Na24 DATA PROCESS READ MAIN SUB FACTOR Blank correction PROZONE CHECK FIRST SECOND THIRD ABSORBANCE LIMIT START END LOW HIGH ENDPOINT LIMIT LINEAR CHECK(%) START END LIMIT(%) Low Low 0 99 High High 2 Item Name AUTO RERUN SW # Na24 AUTO RERUN CONDITION (ABSORBANCE) 3 ON OFF Absorbance Range AUTO RERUN RANGE (RESULTS) Serum Urine Plasma CSF Dialysis Other Lower Higher Lower Higher Prozone Range 05 Português - Ref.: 24
6 Símbolos utilizados com produtos diagnósticos in vitro Símbolos usados con productos diagnósticos in vitro Symbols used with ivd devices Conteúdo suficiente para < n > testes Contenido suficiente para < n > tests Contains sufficient for < n > tests Risco biológico Riesgo biológico Biological risk Data limite de utilização (aaaa-mm-dd ou mm/aaaa) Estable hasta (aaaa-mm-dd o mm/aaaa) Use by (yyyy-mm-dd or mm/yyyy) Marca CE Marcado CE CE Mark Calibrator Material Tóxico Tóxico Poison Calibrator Material Reagente Reactivo Reagent Limite de temperatura (conservar a) Temperatura limite (conservar a) Temperature limitation (store at) Fabricado por Elaborado por Manufactured by Representante Autorizado na Comunidade Europeia Representante autorizado en la Comunidad Europea Authorized Representative in the European Community Número do lote Denominación de lote Batch code Consultar instruções de uso Consultar instrucciones de uso Consult instructions for use e Número do catálogo Número de catálogo Catalog Number e negativo negativo Negative control Adições ou alterações significativas Cambios o suplementos significativos Significant additions or changes e positivo positivo Positive control Produto diagnóstico in vitro Dispositivo de diagnóstico in vitro In vitro diagnostic device e Liofilizado Liofilizado Lyophilized Corrosivo Corrosivo Corrosive Ref.: Português - Ref.: 24
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