Anormalidades em espermatozoides de carpa comum, Cyprinus carpio, frescos ou criopreservados em diluidor a base de água de coco em pó (ACP-104 )

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1 Anormalidades em espermatozoides de carpa comum, Cyprinus carpio, frescos ou criopreservados em diluidor a base de água de coco em pó (ACP-104 ) Abnormalities in Cyprinus carpio sperm, fresh or cryopreserved in extender based on coconut water powder (ACP-104 ) Francisco Renan Aragão Linhares 1, *; José Ferreira Nunes 1 ; Maria Audália Marques de Carvalho 1 ; Júlia Trugillio Lopes 1 ; Rômulo Roberto Ribeiro Pinheiro 1 ; Carminda Sandra Brito Salmito-Vanderley 1 1 Universidade Estadual do Ceará. * renan.aragao@hotmail.com ABSTRACT The aim of this study was to observe the occurrence of abnormalities in fresh sperm (n= 07, three years old) and cryopreserved semen (ACP-104 or CCSE2 extenders plus DMSO 10%) of Cyprinus carpio. So, three sperm pools were diluted in respective freezing media on a ratio of 1:1 (sperm:media) followed by packaging into the 0.25 ml straws and quickly frozen into a dry shipper vessel (-170 C). After 10 minutes, they were stored at -196 C. The fresh and frozen/thawed sperm abnormalities (head, tail sperm defects) were evaluated on Bromophenol blue dye. The percentage of abnormal spermatozoa increased from 4.72% (fresh sperm) to 18,82% in both extenders, the same way as tail abnormalities increased from 3.06% to 17,54±4,53%. So in conclusion, the cryopreservation has reduced the number of sperm viability. However, this cryopreservation protocol using ACP104 is favorable to carp sperm conservation. Key words: Fish, sperm, sperm morphology, sperm cryopreservation. Palavras-chave: Peixe; sêmen, morfologia espermática, congelação seminal. INTRODUÇÃO A carpa comum, Cyprinus carpio, apresenta grande valor comercial e ampla distribuição geográfica. Entretanto, no estado do Ceará pouco ou nenhum estudo foi realizado sobre a reprodução desta espécie, notadamente sobre as condições de saúde gonadal e espermática. Estudos sobre morfoanomalias espermáticas são importantes durante a criopreservação uma vez que os danos causados pelo frio reduzem a 671

2 sobrevivência dos espermatozoides, influenciando diretamente no sucesso da fertilização. Diversos estudos existem sobre a criopreservação do sêmen de carpa comum (Li et al., 2010) porém, nenhuma estudo existe sobre anormalidades espermáticas após congelação em diluidor a base de água de coco em pó (ACP ). Deste modo, este trabalho observou a ocorrência de anormalidades tanto nos espermatozoides de carpa frescos bem como após congelação utilizando o ACP104 como meio diluidor. MATERIAL E MÉTODOS Os sêmens de sete animais com três anos de idade coletado após 14 horas da indução hormonal (1 mg/kg de peso vivo, extrato hipofisário de carpa) formaram três pools que foram diluídos na proporção de 1:1 (sêmen:diluidor) nos diluidores: ACP- 104 e CCSE2 conforme Irawan et al., (2010) adicionados de 10% de DMSO, com ph ajustados para 7,7 e 320mOsmol.kg -1. O sêmen foi envasado em palhetas de 0,25mL e imediatamente congelado em Dry shipper. Após dez minutos a -170ºC as palhetas foram transferidas para um botijão de estocagem a -196 C. Para detecção das anormalidades o sêmen fresco foi diluído em solução citrato-formol a 4% na proporção de 1:2000 e o sêmen congelado/descongelado em banho Maria a 25 C/30s foi diluído na proporção de 1:250. De cada amostra três lâminas foram coradas pela deposição de 100 µl de sêmen fixado e 2 µl de azul de bromofenol. A leitura de 100 espermatozoides/lâmina ocorreu em microscópio óptico NIKON Eclipse E200, ocular 10x e objetiva de 40x. Os dados foram expressos como media±desvio padrão e analisados por meio de análise de variância seguido pelo teste de Tukey (p<0,05) para identificar diferenças significativas utilizando o programa estatístico ASSISTAT versão 7.6 beta (2012). RESULTADOS E DISCUSSÃO O percentual de espermatozoides normais observados no sêmen fresco deste estudo (Tabela 1) foram comparáveis aos 90-92% espermatozoides normais observados por Massar et al. (2011). Com relação ao sêmen criopreservado o congelamento em ACP104 inferiu um acréscimo de 17,12% de anormalidades quando comparado ao sêmen fresco, enquanto no meio CCS2 este aumento foi de apenas 11,09%. 672

3 Assim como nos experimentos de Gwo & Arnold (1992) e Massar et al. (2011) no presente trabalho observou-se um aumento no percentual de cauda enrolada em ambos os tratamentos após congelação/descongelação comparado ao sêmen fresco, sugerindo os efeitos do processo de criopreservação. Para espécies como a carpa este aumento no percentual de anormalidades no sêmen criopreservado poderá ter pouca influência sobre o sucesso da fertilização, porém testes de fertilização deverão ser realizados para estabelecimento de um mínimo aceitável para o sêmen criopreservado. Tabela 1. Anormalidades em espermatozoides de Cyprinus carpio, frescos ou criopreservados em ACP104 e CCS2 e ativados com NaCl 50mM. Criopreservados Defeitos Fresco ACP+DMSO CCSE2+DMSO Normais 95,28±2,31 a 78,16±12,94 b 83,66±3,40 ab Macrocefalia 0,14±0,25 a 0,16%±0,28 b 2,16±1,52 b Cabeça estourada 1,42±1,40 a 0,0±0,0 b 0,16±0,28 b Cauda enrolada 0,85±0,70 a 16,30±10,05 b 11,83±3,78 b Cauda dobrada 2,21±1,85 a 5,3%±3,21 b 1,66±1,15 b Total defeitos 4,72±0,71 21,84±4,67 15,81±1,68 Letras minúsculas distintas, na mesma linha, indicam diferença significativa (p<0,05) entre os tratamentos. CONCLUSÃO Muito embora a criopreservação tenha aumentado o percentual de anormalidades, o protocolo usando ACP104 é favorável à congelação dos espermatozoides de carpa comum. AGRADECIMENTOS FINEP REFERÊNCIAS BIBLIOGRAFICAS GWO, J-C.; ARNOLD, C.R. Cryopreservation of atlantic croaker spermatozoa: evaluation of morphological changes. The Journal of Experimental Zoology, v. 264, p ,

4 IRAWAN, H.; VUTHIPHANDCHAI, V.; NIMRAT, S. The effect of extenders, cryoprotectants and cryopreservation methods on common carp (Cyprinus carpio) sperm. Animal Reproduction Science, v. 122, p , LI, P.; HULAK, M.; P. KOUBEK, P.; SULC, M. et al. Ice-age endurance: the effects of cryopreservation on proteins of sperm of common carp, Cyprinus carpio L. Theriogenology 74 (2010) MASSAR, B.; DEY, S.; DUTTA, K. An electron microscopic analysis on the ultra structural abnormalities in sperm of the common carp Cyprinus carpio L. inhabiting a polluted lake, Umiam (Meghalaya, India). Microscopy Research and Technique, v. 74, p ,

5 Áreas aptas para produção de alevinos de tilapia segundo fatores extremos no Estado do Maranhão: El Niño e La Niña. Suitable area for production tilapia fingerlings second extreme factors in the Maranhão State: El Niño and La Niña. Maria Jose Bouéres Damasceno Neta 1 ; Dayane de Jesus Valois Lima 1 ; Jorgelia de Jesus Pinto Castro 1 *; Erivânia Gomes Teixeira 1 ; Ronaldo Menezes Barroso 1 ; José Milton Barbosa 1. 1 Universidade Estadual do Maranhão. * jeisakm@hotmail.com ABSTRACT This study evaluated through thermal zoning, the minimum and maximum temperatures that occur in the Maranhão State and identify free areas of negative interferences of El Niño and La Niña in the tilápia production. We used orbital data from thirteen weather stations of Maranhão and a spreadsheet with the minimum and maximum temperatures was constructed. The temperature variation was obtained by thermal maps zoning with the application Surf program and the suitable regions for tilapia production according to the requirements of the specie. The results expressed as heat maps quarterly to suggest that El Niño and La Niña phenomenon, in the Maranhão State can directly influence the success of fry production of Nile Tilapia. Key-words: Pisciculture, Oreochomis niloticus, reproduction, mapping. Palavras-chave: Piscicultura, Oreochomis niloticus, reprodução, mapeamento. INTRODUÇÃO Os cenários climáticos atuais demonstram um aumento nas frequências e intensidades dos eventos extremos relativos a grandes variações de temperatura, ventos e chuvas que tem reforçado a importância de estudos de possíveis prejuízos tangíveis à pesca e aquicultura. Os eventos climáticos mundialmente conhecidos como El Niño e La Niña representam alterações do sistema oceano-atmosfera no Oceano Pacífico tropical, que tem conseqüências no tempo e no clima em todo o planeta (OLIVEIRA, 2001). No caso do Maranhão, quando em ano de El Niño, é afetado por grandes secas enquanto que em La Niña ocorre a redução da temperatura. Neste contexto, o objetivo 675

6 do presente trabalho foi avaliar, através de zoneamento térmico, as temperaturas mínimas e máximas que ocorrem no Estado do Maranhão e identificar áreas livres das interferências negativas dos fenômenos El Niño e La Niña na produção de tilápias do Nilo. MATERIAL E MÉTODOS Foi realizado um levantamento de campo e uso de dados orbitais de treze estações meteorológicas em todo o Estado e construída uma planinha do Microsoft Office Excel (versão 2007) com as temperaturas mínimas e máximas. Para a obtenção das variações de temperatura das respectivas áreas no período de trinta anos, foram confeccionados mapas de zoneamento térmico com a aplicação do programa Surfe. Este estipulou as regiões adequadas para a reprodução de tilápia do Nilo de acordo com a exigência da espécie. RESULTADOS E DISCUSSÃO Nos anos de El Niño, (Fig. 1), no primeiro trimestre somente a região centrooeste apresentou faixa média de temperatura de 25,7 C, ficando abaixo da recomendada para reprodução de tilápia que é de 26 a 28 C (FIGUEIREDO & VALENTES, 2008), enquanto a região sul apresentou maior média de temperatura (27,8 C) indicando portanto, uma possível influência positiva na reprodução da espécie. No segundo trimestre, as médias de temperatura da região sul e centro-oeste foram de aproximadamente de 29 e 25,8 C respectivamente, indicando interferência negativa no ciclo reprodutivo da tilápia. Neste mesmo período, a região sudeste com média de 27,8 C, sugeriu uma interferência positiva e nas regiões norte e nordeste as temperaturas ficaram na faixa ideal. No terceiro e quarto trimestre, caracterizados pelo período de estiagem no Maranhão, somente a regiaõ sul e pequena parte do centro oeste não apresentaram área adequada para reprodução com temperatura média superior a 30ºC. O segundo mapeamento indicou o período do fenômeno La Niña (Fig. 2), onde observou-se que no primeiro trimestre nas regiões norte, nordesde, sul e sudeste a média de temperatura variou de 25,9 a 26,8ºC, evidênciando influência positiva na reprodução de tilápia, enquanto numa pequena parte da região centro oeste a temperatura foi inferor a 25,6 C. O segundo trimestre somente parte das regiões sul e 676

7 sudeste, com temperaturas médias de 25,2 C, sugeriu leve influência negativa do fenômeno na reprodução da espécie. Nos dois últimos trimestres todo o estado apresentou média de temperatura na faixa média exigida para a reprodução da tilápia Latitude Latitude Latitude Latitude Longitude Longitude Longitude Longitude Fig.1.Mapeamento trimestral da temperatura durante o fenômeno El Niño no Maranhão Latitude Latitude -5 Latitude Latitude Longitude Longitude Longitude Longitude Fig. 2: Mapeamento trimestral da temperatura durante o fenômeno La Niña no Maranhão CONCLUSÃO Os resultados do zoneamento térmico nos anos dos fenômenos El Niño e La Niña sugerem que as regiões Sul, Sudeste e Centro-Oeste não possuem áreas aptas para produção de alevinos de tilápia do Nilo enquanto que as regiões Norte e Nordeste, por apresentarem faixa de temperaturas entre 26 e 28ºC são propícias para a atividade. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS FIGUEIREDO, J.A.C; VALENTES, J.S.A. Cultivo de Tilápias no Brasil: Origem e Cenário Atual. Sociedade Brasileira de Economia, Administração e Sociologia Rural

8 Rio Branco-Acre Disponível em:< acesso em 18 de abril OLIVEIRA, G.S. O El Niño e Você - o fenômeno climático. Ed. Transtec - São José dos Campos (SP), março de

9 Avaliação da motilidade espermática de Piaractus brachypomus utilizando diferentes ativadores Assessment of sperm motility Piaractus brachypomus using different activators Priscila Silva de Almeida* 1, Júlia Trugilio Lopes 1, Larissa Teixeira Nunes 1, Marcelo José Da Ascensão Feitosa Vieira 2, Aldeney Andrade Soares Filho 1, Carminda Sandra Brito Salmito-Vanderley 1. 1 Universidade Estadual do Ceará; 2 Departamento Nacional de Obras Contra as Secas; * priscilla_vs@hotmail.com ABSTRACT Piaractus brachypomus (pirapitinga) is a fish of great commercial importance for pisciculture. This study evaluates the effects of activators distilled water, 100mOsm NaCl, 100 mosm NaHCO 3 and184 mosm NaHCO 3 on the rate and duration of motility of pirapitinga sperm. In this study, 100 mosm NaCl and NaHCO3 100mOsm was the best activators of this species sperm. Key-words: fish, spermatozoa, motility duration Palavra chave: peixe, espermatozóide, duração da motilidade INTRODUÇÃO A Pirapitinga, Piaractus brachypomus (Cuvier, 1818), é um peixe originário das Bacias dos rios Amazonas e Orinoco e de grande importância comercial para a piscicultura (Fresneda et al., 2004). A conservação gamética em peixes tem sido bastante estudada para um grande número de espécies através da criopreservação. Um dos parâmetros mais avaliados na técnica de conservação seminal é a taxa de motilidade espermática, pois estabelece uma correlação entre a qualidade do sêmen e a fertilidade (Godinho, 2000). Desta forma, a determinação da solução adequada à ativação da motilidade espermática, sem comprometer a qualidade seminal, torna-se uma questão importante em trabalhos de criopreservação em peixes (Bedore, 1999). Portanto, o objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito de diferentes ativadores sobre a taxa e tempo de motilidade dos espermatozóides de pirapitinga. 679

10 MATERIAL E MÉTODOS O trabalho foi realizado no Centro de Pesquisas em Aquicultura do Departamento Nacional de Obras Contra as Secas, em Pentecoste CE e no Núcleo Integrado de Biotecnologia na Universidade Estadual do Ceará. Foram utilizados 16 machos adultos da espécie pirapitinga. O sêmen foi coletado através de massagem abdominal para formação de quatro pools. Cada pool foi diluído com diferentes soluções ativadoras (água destilada, NaCl 100mOsm, NaHCO 3 100mOsm e NaHCO 3 184mOsm) na proporção de 1:50 (sêmen:ativador). Imediatamente após a adição da solução ativadora foram verificados a taxa de motilidade espermática (%), através do Sperm Class Analise, e o tempo de motilidade (min). Os dados foram expressos em média ± desvio padrão. A porcentagem de espermatozóides móveis e o tempo de motilidade foram analisados utilizando ANOVA e seguido por teste de Tukey. Os dados foram significativos em P 0,05. RESULTADOS E DISCUSSÃO Os valores médios de espermatozóides móveis e o tempo de motilidade espermática estão expressos na tabela 1. Uma boa solução ativadora é aquela que induz a ativação de espermatozoides sem expô-los a condições osmóticas extremas e promove o prolongamento da motilidade (Marques, 2001). A determinação da solução adequada à ativação da motilidade espermática, sem comprometer a qualidade seminal, torna-se uma questão importante em trabalhos de criopreservação em peixes (Bedore, 1999). Entre as soluções ativadoras da motilidade espermática, merecem destaque a água destilada, soluções salinas de NaHCO 3, NaCl e KCl em diferentes osmolaridades, dependendo da espécie (Ravinderet al., 1997). Foi observado que a taxa de motilidade não variou entre os ativadores. Entretanto, o tempo de motilidade variou, sendo que água destilada e NaCl 100 mosm apresentaram menor e maior tempo, respectivamente. O tempo de motilidade não é interferido apenas pela osmolaridade, mas também pela composição do ativador. A concentração de cloreto no sêmen influencia o potencial de membrana do espermatozóide e a motilidade em associação com cátions. Assim, pode-se inferir que a presença de cloro no NaCl, proporciona maior tempo de motilidade (Catunda et al, 2009). 680

11 Tabela 1. Efeitos de diferentes ativadores na porcentagem de espermatozóides móveis e no tempo de motilidade do sêmen de pirapitinga (Piaractusbrachypomus) Ativadores Espermatozóides Móveis (%) Tempo de Motilidade (min) Água Destilada 91,6 ± 4 a 1,18 ± 0,15 c NaCl 100mOsm 93,8 ± 2 a 66,03 ± 11,41 a NaHCO₃ 100mOsm 93,7 ± 2 a 27,33 ± 4,74 b NaHCO₃ 184mOsm 90,8 ± 6 a 33,32 ± 15,26 b a-c Médias seguidas por letras diferentes sobrescrito na mesma coluna, diferem entre si, pelo teste de Tukey (P 0,05). CONCLUSÃO Diante dos resultados pôde-se concluir que a solução de NaCl 100mOsm é a mais adequada para ativação de sêmen de pirapitinga (P. brachypomus). AGRADECIMENTOS FINEP REFERÊNCIAS BIBLIOGRAFICAS BEDORE, A.G. Características criopreservação do sêmen de pacu-caranha (Piaractus mesopotamicus) e de piracanjuba (Bryconorbignyanus) p. Dissertação (Mestrado Biologia Celular) - Universidade Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte. CATUNDA, A.G.V; CAMPOS, A.C.N.; PERREIRA, J.F.; LIMA, I.C.S.; ARAÚJO, A.A.; MATINS, G.A. Variação mensal nas concentrações de macroelementos no plasma seminal de caprinos criados em clima tropical úmido. Ciência Animal Brasileira, v.10, n FRESNEDA, A.; LENIS, G. AGUDELO E.; ANGEL, M. O. Espermiacióninducida y crioconservación de semen de Cachama Blanca (Piaractus brachypomus). RevColCienc Pec., v. 17,p , Suplemento. GODINHO, H.P. Criopreservação de sêmen de peixes. Informe Agropecuário, v.21, n.203, p.6-20, 2000 MARQUES, S. Preservação a curto prazo do sêmen de teleósteos neotropicais de agua doce.dissertação (Mestrado Zoologia de Vertebrados) Pontífica. Universidade Católica de Minasgerais, Belo Horizonte. 83 p.,

12 RAVINDER, K.; NASARUNDDIN, K.; MAJUMDAR, K.C.; SHIVAJI, S. Computerized analysis of motility, motility patterns and motility parameters of spermatozoa of carp following short-term storage of semen. Journalof Fish Biology, London, v. 50, n. 6, p , June

13 Avaliação de três corantes para a observação da morfologia espermática em sêmen criopreservado de Cyprinus carpio Evaluation of three dyes for observation of sperm morphology on cryopreserved semen of Cyprinus carpio Thais Maia Torres¹*; Francisco José Lopes Cajado¹; Rômulo Roberto Ribeiro Pinheiro¹; Cristiane Clemente De Mello Salgueiro¹; Maria Eduarda Magalhães De Souza¹; Carminda Sandra Brito Salmito-Vanderley¹ ¹ Universidade Estadual do Ceará; * thaismaiat@hotmail.com ABSTRACT The aim of this study was to evaluate the effect of three different dyes on the morphology of Cyprinus carpio sperm after cryopreservation process. The analyses of spermatozoa morphology were obtained by staining used three dyeing: Rose Bengal, Bromophenol Blue and Panopticon. The spermatozoa were classified as normal and deformation tail. The results were evaluated by Tukey test (P<5%). No difference was observed in the percentage of spermatozoa with these characteristics in comparison of the three dyes, so the three can be used efficiently. Key words: dyes, sperm pathology, Carp, fish. Palavras-chave: corantes, patologia espermática, Carpa, peixe. INTRODUÇÃO Carpa (Cyprinus carpio), espécie originária da Europa Oriental e da Ásia Ocidental, foi uma das primeiras espécies a serem cultivadas em aqüicultura mundial. (Querol et al., 2005). A criopreservação seminal por ser uma metodologia bastante aplicável na piscicultura, ela vem sendo alvo de diversos estudos. Essa biotecnologia beneficia programas de melhoramento genético e pode auxiliar a reprodução artificial entre produtores (Piironen, 1993), porém, essa técnica muitas vezes promove baixa taxa de fertilização. A avaliação das morfopatologias espermáticas é considerada uma análise importante para a qualidade do sêmen (Hafez & Hafez, 2000), pois é um parâmetro que poderá explicar a baixa capacidade de fertilização em um reprodutor ou em um sêmen criopreservado. Para análises morfológicas dos espermatozoides de peixes são 683

14 utilizadas várias metodologias de coloração para a confecção de lâminas. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de três diferentes corantes sobre a morfologia espermáticas de carpa pós-processo de criopreservação. MATERIAL E MÉTODOS Quinze machos pertencentes ao plantel do Centro de Pesquisa em Aquicultura (CPAq), do Departamento Nacional de Obras Contra as Secas (DNOCS), foram submetidos a tratamento com extrato bruto de hipófise de carpa para induzir a espermiação. Do sêmen extrusado e coletado foram confeccionados três pools. Cada pool foi criopreservado segundo metodologia de Irawan et al. (2010). Após o descongelamento, cada pool foi fixado em solução formol-citrato a 4% na proporção de 1:250 (sêmen:fixador). Posteriormente, os pools foram corados para análise da morfologia utilizando três corantes: Rosa Bengala, Azul de Bromofenol ou Panótico de Hemograma. Para realizar a coloração com Azul de bromofenol e com o corante Rosa bengala, as amostras do sêmen descongelado e fixado foram diluídas no corante na proporção de 1:1 e 2:1 (sêmen:corante), respectivamente, em seguida, foram realizados os esfregaços de cada coloração. Para a visualização espermática, utilizando o Panótico de hemograma, foi realizado o esfregaço de 4µL do sêmen fixado, posteriormente a lâmina foi imersa durante um minuto em cada uma das três diferentes soluções do Kit Panótico, obedecendo a intervalos de um minuto entre cada solução. Para a análise morfológica, foram observados 200 espermatozoides por meio de microscopia ótica na objetiva de 40X. Os espermatozoides foram classificados como: normal e defeitos na cauda. Os dados foram expressos como média±desvio padrão e analisados por meio de análise de variância, seguido pelo teste de Tukey, para a morfologia espermática em um mesmo corante (p<0,001) e para os diferentes tipos de corantes utilizados (p<0,05), utilizando o programa estatístico ASSISTAT versão 7.6 beta (2012). RESULTADOS E DISCUSSÃO Todos os corantes utilizados apresentaram uma maior porcentagem de espermatozoides normais do que de espermatozóides com patologias e permitiram uma boa visualização de cabeça e flagelo (Tabela 1). 684

15 Tuset et al. (2008) comparando três técnicas de coloração para o estudo morfométricos em truta arco-íris observou que o corante Diff-Quik foi o melhor para a digitalização enquanto que o Spermac era o melhor para a visualização do flagelo. Streit Jr.et al. (2004) comparou três corantes e observou que o Rosa Bengala mostrou-se melhor na definição da cor e agregou menos sujidade quando comparado com o Vermelho Congo e Williams-modificado em sêmen de Pacu. Neste trabalho não foi observado diferença significativa em relação à visualização ou presença de patologias entre os diferentes corantes utilizados. Tabela 1 - Médias ± desvio padrão com os dados encontrados em porcentagem. Corantes Normais Cauda Dobrada Cauda Enrolada Rosa Bengala 94,5±1,9 aa 3,33±0,8 ba 2,25±0,7 ba Panótico de Hemograma 92,8±2,0 aa 3,5±1,5 ba 3,17±0,6 ba Azul de Bromofenol 91,7±4,4 aa 3,60±1,7 ba 2,50±0,5 ba Letras minúsculas distintas, na mesma linha, indicam diferença significativa (p<0,001) e letras maiúsculas distintas, na mesma coluna, indicam diferença significativa (p<0,05). CONCLUSÃO Todos os corantes testados neste trabalho podem ser utilizados com eficiência para a análise da morfologia espermática de Carpa. AGRADECIMENTOS FINEP REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS IRAWAN, H., Vuthiphandchai, V., Nimrat, S. The effect of extenders, cryoprotectants and cryopreservation methods on common carp (Cyprinus carpio) sperm. Animal Reproduction Science, v.122, p , 2010 HAFEZ, E.S.E; HAFEZ, B. (ed). Reproduction in farm animals. 7. ed. Philadelphia: Lippicott Williams and Wickins, p. PIIRONEN, J. Cryopreservation of sperm from brown trout (Salmo trutta m. lacustris L.) and arctic charr (Salvelinus alpinus L.). Aquaculture, v.116, p ,

16 QUEROL; M.V.M.; QUEROL; E.; PESSANO, E.F.C & AZEVEDO, C.L. Ocorrência da carpa húngara, Cyprinus carpio (LINNAEUS, 1758) e disseminação parasitária, no arroio felizardo, Bacia do Médio Rio Uruguai, Uruguaiana, RS, Brasil. Biodiversidade Pampeana, v.3, n.1, p , 2005 TUSET, V.M.; DIETRICH, G.J.; WOJTCZAK, M.; SLOWINSKA, M.; MONSSERRAT, J.; CIERESKO, A. Comparison of three staining techniques for the morphometric study of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) spermatozoa. Theriogenology, v.69, p , STREIT-JR, D.P.; MORAES, G.V.; RIBEIRO, R.P.; POVH, J.A.; SOUZA, E.D.; OLIVEIRA, C.A.L. Avaliação de diferentes técnicas para coloração de sêmen de peixes. Arquivos de ciências veterinárias e zoologia. UNIPAR, v.7, p ,

17 Avaliação de três diferentes corantes na detecção de anormalidades de cauda em espermatozoides de tambaqui (Colossoma macropomum) Evaluation of three different dyes in the detection of abnormalities in sperm tail tambaqui (Colossoma macropomum) Maria Eduarda Magalhães de Souza* 1, Fátima De Cássia Evangelista de Oliveira¹, Mayara Setúbal Oliveira¹, João Paulo Silva Pinheiro¹, Jordana Sampaio Leite¹, Carminda Sandra Brito Salmito-Vanderley¹. 1 Universidade Estadual do Ceará * eduardadesouza@hotmail.com ABSTRACT This present study aimed at comparing the performance of different dies in the sperm morphological analysis of tambaqui. Twelve animals were selected and induced to release semen. Of semen samples collected, four pools were prepared. A sample of each pool was fixed in formalin saline solution and stained with Rose Bengal, or Panoptic Bromophenol Blue, and then the, slides were observed under an optical microscope (400x). The three dyes tested are effective in the subjective analysis of tambaqui sperm morphology. Key words: sperm, dye, morphology, fish Palavras-chave: sêmen, corantes, morfologia, peixes INTRODUÇÃO O tambaqui é o peixe nativo mais produzido atualmente no Brasil (IBAMA, 2007), e que se tem bom conhecimento para seu manejo em estoques naturais e para sua criação em cativeiro (Araujo-Lima & Goulding,1997). Para o melhoramento genético em piscicultura, a avaliação seminal é um dos métodos utilizados. Sabe-se que a presença de algumas morfoanomalias pode afetar significativamente a fertilidade. Para análises morfopatológicas confeccionam-se lâminas com espermatozoides corados, porém nenhum corante foi bem estabelecido ainda para espermatozoides de tambaqui. Objetivou-se neste trabalho avaliar a eficiência de corantes no estudo da morfologia espermática em tambaqui. 687

18 MATERIAL E MÉTODOS Doze tambaquis adultos, provenientes do plantel do Departamento Nacional de Obras Contra as Secas, Pentecoste-CE, tiveram a reprodução induzida por aplicação de extrato hipofisário de carpa, em dosagem única de 1,5mg/kg de peso vivo. A coleta do sêmen deu-se 14h após a indução (massagem abdominal), em tubos graduados de 2mL e foram preparados quatro pools (três animais por pool). De cada pool foi retirada uma alíquota de 2µL para fixação em 200µL de solução formol salina-citrato 4%. Os espermatozoides fixados foram corados com Azul de Bromofenol, Rosa Bengala e Panótico de Hemograma. No corante Azul de Bromofenol, foi utilizada amostra com 1µL de sêmen fixado para 10µL do corante. Corou-se as amostras com Rosa Bengala a uma proporção de 3:20 (corante:sêmen). Com 4µL de espermatozoides corados fez-se os esfregaços com o Rosa Bengala e o Azul de Bromofenol. Para o Panótico a metodologia foi: primeiro, realizou-se esfregaço com 4µL da solução de espermatozoides fixados, em seguida, a lâmina foi imersa por 1min em cada solução que compunha o kit Panótico, com intervalo de 1min entre cada solução. Foram analisados defeitos de cauda (dobrada ou enrolada). De cada lâmina confeccionada com cada corante foram analisados 200 espermatozoides em microscópio ótico, aumento de 400x. Os dados foram expressos como media±desvio padrão e analisados por meio de análise de variância, seguido pelo teste de Tukey (5%), utilizando o programa ASSISTAT versão 7.6 beta (2012). RESULTADOS E DISCUSSÃO Em todas as lâminas analisadas, independente do corante utilizado, a porcentagem de espermatozoides normais foi superior a 90% (Tabela 1) e permitiram a visualização de cabeça e flagelo, sendo que o Azul de Bromofenol permitiu, ainda, a visualização da peça intermediária. Não foram encontradas diferenças entre os corantes em relação a detecção de caudas dobradas ou enroladas. Streit-Jr et al., 2008, utilizando o corante Rosa Bengala, observaram 56,74% ± 2,79 de espermatozoides normais em Salminus maxillosus, enquanto que Medina et al, 2008, observando o sêmen de Piaractus brachypomus in natura encontraram 69% de espermatozoides normais utilizando o corante Azul de Bromofenol. Segundo Herman et al., 1994, a presença de anormalidades espermáticas podem estar relacionada com a deficiência nutricional, idade dos reprodutores, variações ambientais e genéticas 688

19 (Miliorini, 2006) como por falhas durante a espermatogênese. Essas anormalidades observadas no sêmen fresco também podem ser devido à manipulação do sêmen através da fixação com solução formolizada, técnica de esfregaço ou influência do corante. Tabela 1: Percentagem de espermatozoides normais, com cauda dobrada e cauda enrolada (médias ± desvio padrão) no sêmen in natura corado com Rosa Bengala, Panótico de Hemograma ou Azul de Bromofenol. Corantes Normais Cauda Dobrada Cauda Enrolada Rosa Bengala 97,62 ± 0,89 A 0,87 ± 0,54 B 1,5 ± 0,61 B Panótico de Hemograma 92,62 ± 3,00 A 4,62 ± 1,88 B 2,75 ± 1,44 B Azul de Bromofenol 95,75 ± 1,03 A 1,87 ± 0,85 B 2,37 ± 0,48 B Letras distintas na mesma coluna indicam diferença significativa (p<0,05). CONCLUSÃO Os três corantes testados são eficazes na análise subjetiva de anormalidades em cauda de espermatozoides de tambaqui. AGRADECIMENTOS FINEP REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ARAÚJO-LIMA, C.R.M.; GOULDING, M.; So fruitful fish: ecology, conservation, and aquaculture of the Amazon s tambaqui. New York: Columbia University Press, p. HERMAN, H.A.; MITCHELL, J.R.; DOAK, G.A. Evaluation of semen morphology. In: HERMAN, H.A., MITCHELL, J.R.; DOAK, G.A. The artificial insemination and embryo transfer of dairy and beef cattle.8. ed. Dauville: Interstate Publishers, Inc., p , IBAMA Recursos Pesqueiros: Estatística da pesca, Brasília. Disponível em: < MILIORINI, A.B. Ativadores e concentrações de metanol e dimetilsufoxido na qualidade do sêmen criopreservado de curimba (Prochilodus lineatus)

20 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Veterinárias) Universidade Federal de Lavras, Lavras, MEDINA, S.P.V. Criopreservação do sêmen de pirapitinga Piaractus brachypomus (PISCES, CHARACIDAE), Dissertação de mestrado, Fortaleza, STREIT-JR, D.P.; MORAES, G.V.; RIBEIRO, R.P.; POVH, J.A.; SOUZA, E.D.; OLIVEIRA, C.A.L. Evaluación de técnicas para colorear sémen de peces. Arq. ciên. vet. zool. UNIPAR, 7(2): p ,

21 Características do sêmen de ariacó (Lutjanus synagris) Lane snapper (Lutjanus synagris) semen characteristics Vettorazzi, M.B. 1 *, M.A.A., Furtado Neto¹, Maggioni, R.¹, Oliveira, F.C.E 2., Salmito- Vanderley, C.S.B. 2 1 Universidade Federal do Ceará. 2 Universidade Estadual do Ceará. * mayra.vettorazzi@hotmail.com ABSTRACT The fish sperm motility is induced and influenced by many physical-chemicals characteristics, such as osmolality, ph and temperature. Along with these features and adding the sperm concentration and the ejaculated volume one can characterize a fish species semen. The aim of this study was to obtain the physical-chemical features of Lutjanus synagris semen. Concentration was assessed with Neubauer chamber, the volume was obtained by graduate syringes, the osmolality and ph measured by a digital osmometer and ph meter, respectively. The results were 4.88 ± 2.9 x 10 9 spz/ml, 0.47 ± 0.26 ml, ± mosm/kg and 7.9 ± 0.17 for sperm concentration, ejaculated volume, osmolality and ph respectively. The specimes of L. synagris used in assisted reproduction should be selected based on their individual sperm features. Key words: Lutjanus synagris; Sperm osmolality; Marine teleosts semen. Palavras-chave: Lutjanus synagris; osmolaridade seminal; Sêmen de teleósteos marinhos. INTRODUÇÃO Na maioria das espécies de peixes os espermatozoides são imóveis no plasma seminal, dentro do testículo (BILLARD, 1986). Por isso, a motilidade é induzida logo após a liberação do sêmen no meio aquoso. Existem relações entre as composições do flúido seminal e as do meio aquoso em que a reprodução deve proceder. A motilidade é afetada por muitos fatores, sendo os principais a concentração de componentes osmoticamente ativos (osmolaridade), pressão osmótica, ph e temperatura. A concentração dos espermatozoides no sêmen é frequentemente usada para caracterizar o sêmen e, juntamente com o volume de sêmen ejaculado (V), é utilizada para estimar a produção total de espermatozoides durante um evento reprodutivo (TRIPPEL, 2003). O 691

22 objetivo deste trabalho foi avaliar as características espermáticas do sêmen de ariacó (Lutjanus synagris). MATERIAL E MÉTODOS O sêmen foi coletado em seringas plásticas descartáveis de 3mL e o volume aferido com precisão de 0,1mL. O sêmen foi extrusado até a exaustão. Este parâmetro foi determinado individualmente (n=7). A concentração (n=7) foi obtida através da câmara de Neubauer a partir do sêmen fixado em solução de formol salino (0,1%) na proporção de 1:4000 (sêmen:formol salino). Os valores médios encontrados nas contagens da câmara de Neubauer (n) foram multiplicados pelo fator de diluição: n x 200,05 x A produção total de espermatozoides (PT) (n=7) foi calculada pelo produto da concentração espermática (Ce) pelo volume ejaculado (V): PT = Ce x V A osmolaridade do sêmen fresco (n=7) foi obtida com o auxílio de osmômetro eletrônico Roebling. O ph de sêmen fresco (n=9) foi medido por peagâmetro digital com microeletrodo Hanna Instruments. RESULTADO E DISCUSSÃO Os resultados obtidos nas análises de sêmen de L. synagris encontram-se na tabela 1. A concentração espermática encontrada por Sanches e Cerqueira (2010) para a mesma espécie foi similar, 2,2 ± 0,2 x 10 9 spz/ml. Tabela 1 - Valores médios ± desvio padrão e coeficiente de variação das características seminais de L. synagris. Características Seminais Coeficiente de Média ± D.P. Variação (%) Concentração espermática (x 10 9 spz/ml) 4,88 ± 2,9 59,43 Volume ejaculado (ml) 0,47 ± 0,26 55,32 Produção Total de Espermatozoides (x 10 9 spz) 1,93 ± 1,57 81,35 Osmolaridade (mosm/kg) 366,14 ± 22,78 6,22 ph 7,9 ± 0,17 2,15 Sanches e Cerqueira (2010) reportaram que o volume de sêmen ejaculado de L. synagris foi de 0,61 ± 0,35 ml, sendo, portanto, um volume superior ao obtido nas presentes análises. De acordo com Viveiros e Godinho (2009), o volume de sêmen é 692

23 bastante variável em teleósteos, o que explica o alto coeficiente de variação (C.V.). encontrado na presente análise. A produção total média de espermatozóides foi de 1,20 ± 0,73 x 10 9 spz por indivíduo. No caso de espécies que produzem pequenos volumes de sêmen, a produção total média de espermatozóides parece ser mais indicada para avaliar e definir a proporção de machos e fêmeas utilizada na hora da formação de casais quando da reprodução em cativeiro. Mesmo assim, são raros os relatos de produção total de espermatozoides na literatura, e parece ter sido este o primeiro para teleósteos marinhos brasileiros. O alto coeficiente de variação demonstra que este índice varia bastante e que existe a necessidade da pré-seleção dos machos para a formação de casais. Não há relatos de estudos com L. synagris sobre osmolaridade, porém os valores médios de osmolaridade encontrados por Riley et al. (2008) para L. griseus e L. campechanus foram 428 ± 15 e 411 ± 5 mosm/kg, respectivamente, sendo maiores que os valores encontrados para L. synagris no presente trabalho que foi de 378,5 ± 65,1 mosm/kg. Vettorazzi et al. (2010), utilizando fitas graduadas, encontraram ph, 8,0 para o sêmen de L. synagris, valor semelhante ao encontrado no presente trabalho. CONCLUSÃO As características espermáticas de L. synagris apresentam elevado desvio padrão refletindo numa alta variabilidade individual o que sugere uma necessidade de préseleção dos machos a serem utilizados em programas de reprodução assistida. AGRADECIMENTOS Á Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, ao Núcleo Integrado de Biotecnologia/ UECE, ao Centro de Estudos Ambientais Costeiros /UFC e a FINEP. REFERÊNCIAS BIBLIOGRAFICAS BILLARD, R., Spermatogenesis and spermatology of some teleost fish species, Reproductive Nutritional Developement, v.26, p , MORISAWA, M., Initiation mechanism of sperm motility at spawning in teleosts. Zoological Science 2, ,

24 RILEY et al., Field Collection, Handling, and Refrigerated Storage of Sperm of Red Snapper and Gray Snapper, North American Journal of Aquaculture, v.70, p , SANCHES, E.G., CERQUEIRA, V.R., Refrigeração do sêmen de ariacó, Lutjanus synagris, Boletim do Instituto de Pesca, são Paulo, v.36, n.4, p , TRIPPEL, E.A., Estimation of male reproductive success of marine fishes, Journal Northwest Atlantic Fishes Science, v.33, p , VETTORAZZI, M.B., GOMES, E.T., SOUZA, R.L.M., CÉSAR, J.R.O e FURTADO NETO,M.A.A., Motilidade espermática do sêmen de ariacó, Lutjanus synagris, Arquivo de ciências do Mar, Fortaleza, v.43(2), p.21-26, VIVEIROS, A. T. M.; GODINHO, H. P., Sperm quality and cryopreservation of Brazilian freshwater fish species: a review. Fish Physiology Biochemistry., v.35, p ,

25 Características do sêmen fresco de Carpa comum (Cyprinus carpio) em latitude equatorial. Characteristics of fresh sperm of common carp (Cyprinus carpio) in equatorial latitude. Rômulo Roberto Ribeiro Pinheiro* 1 ; Juliana Carollyne Moreira Jorge 1 ; Maria Eduarda Magalhães de Souza 1 ; Maria Audália Marques De Carvalho 1 ; Francisco Renan Aragão Linhares 1 ; Carminda Sandra Brito Salmito-Vanderley 1. 1 Universidade Estadual do Ceará; * romuloroberto_bio@hotmail.com ABSTRACT The objective of this study was to assess the sperm characteristics of common carp in equatorial latitudes. We used 06 animals, belonging to the roster of the National Department of Works Against Drought (DNOCS), Ceará, Brazil. The animals received a single dose of carp pituitary extract (EHC, 1 mg / kg body weight). Semen was collected 14 hours after induction. Sperm volume was observed through graduated tubes (ml), osmolality was evaluated through digital osmometer (mosm / kg), ph through a measuring paper, motility was estimated by microscopic analysis subjective. The sperm concentration was determined using a Neubauer chamber. Data were expressed as mean ± standard deviation. Found average sperm volume, ph, motility, osmolarity and concentration of ml; 8.30; %; mosm and x 10 9 sptz.ml -1, respectively. The sperm characteristics had standard values for fresh water fish. Palavras-chave: sêmen, peixe, motilidade, concentração espermática. Key words: sperm, fish, motility, sperm concentration INTRODUÇÃO A carpa comum, Cyprinus carpio, considerada uma das espécies domesticadas com grande tolerância e resistência a uma ampla variedade de habitats aquáticos, foi introduzida no Nordeste do Brasil pelo Departamento Nacional de Obras Contras as Secas (DNOCS) no ano de A carpa comum é uma espécie de alto valor comercial, forte apelo culinário e esportivo e uma das mais cultivadas em todo o mundo. O objetivo desse trabalho foi avaliar as características seminais de carpa comum (Cyprinus carpio) em latitude equatorial. 695

26 MATERIAIS E MÉTODOS Foram utilizados 06 animais, com idade média de três anos, pertencentes ao plantel do Centro de Pesquisas em Aquicultura (CPAq), do DNOCS, Ceará, Brasil. Os animais receberam uma dose única de extrato hipófisário de carpa (EHC; 1 mg/kg de peso vivo, intra-celomático). O sêmen foi coletado 14 horas após a indução hormonal. Características individuais como o volume (ml) foi aferido por meio de tubos graduados, osmolaridade (mosm/kg) por meio de osmômetro digital, ph através de fitas de ph e motilidade estimada através de análise microscópica subjetiva. A concentração de espermatozoides foi estimada em câmara de Neubauer numa diluição prévia de 1:2000 (sêmen: formol citrato). Os dados foram expressos como média ± desvio padrão. Os parâmetros de concentração espermática foram analisados por meio de análise de variância, seguido pelo teste de Tukey, para comparação entre os aspectos seminais (p<0,05), utilizando o programa estatístico ASSISTAT versão 7.6 beta (2012). RESULTADOS E DISCUSSÃO O volume encontrado foi de 20,41 ± 10,52 ml durante o mês de janeiro em latitude equatorial. Christ et al., (1996) encontrou na carpa comum um volume de sêmen de 2,88 ml em março e 6,50 ml em maio em clima temperado. O ph encontrado foi de 8,30± 0,26 conforme o esperado para espécies de água doce que, segundo Tabares et al., (2005) varia entre 6,5 a 8,5. Os espermatozoides ativados com água do tanque tiveram motilidade média subjetiva de 94,80 ± 2,92. Foi observada uma homogeneidade na qualidade do sêmen antes da adição de solução ativadora (sem ativação espontânea). Segundo Chambeyron & Zohar (1990), este parâmetro é tão confiável quanto à análise objetiva. A osmolaridade encontrada foi de 290,30 ± 73,00 mosm/kg, estando dentro dos valores encontrados em ciprinídeos (Alavi & Cosson, 2006). A concentração de espermatozoides encontrada neste trabalho foi de 20,90 x 10 9 ± 2,16. No que diz respeito ao aspecto seminal, três amostras apresentaram aspecto branco cremoso obtendo uma média de concentração espermática de 21,36 x 10 9 ± 2,25 sptz.ml -1, e três amostras apresentaram aspecto branco leitoso obtendo média de concentração espermática de 20,40 x 10 9 ± 2,42 sptz.ml -1 (Tabela 1) (p>0,05). Porém, a concentração espermática pode variar em relação à sazonalidade (Christ et al., 1996). O 696

27 conhecimento deste parâmetro é importante para se otimizar procedimentos de fertilização artificial através da definição da melhor dose inseminante. Tabela 1. Parâmetros de concentração espermática de Ciprinus carpio em relação ao aspecto seminal. Concentração espermática Branco cremoso 21,36 x 10 9 ± 2,25 a Branco leitoso 20,40 x 10 9 ± 2,42 a Letras minúsculas sobrescritas distintas, na mesma coluna, indicam diferença significativa (p<0,05). CONSIDERAÇÕES FINAIS As características seminais de carpa comum em latitude equatorial são semelhantes àquelas da época reprodutiva em regiões de clima temperado. Aparentemente o aspecto do sêmen não influencia a concentração espermática. AGRADECIMENTOS FINEP REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ALAVI, S.M.H; COSSON, J. Sperm motility in fishes. (II) Effects of ions and osmolality: A review. Cell Biology International, v. 30, p.1-14, CHAMBEYRON, F.; ZOHAR, Y. A diluent for sperm cryopreservation of gilthead seabream, Sparus aurata. Aquaculture, v. 90, p , CHRIST, S. A.; TOTH, G. P.; MCCARTHY, H. W.; TORSELLA, J. A.; SMITH, M. K. Monthly variation in sperm motility in common carp assessed using computer-assisted sperm analysis (CASA) Journal of Fish Biology, v. 48, p , TABARES, J.; TARAZONA, A.; OLIVEIRA, M. Fisiología de la activación del espermatozoide en peces de agua dulce. Revista Colombiana de Ciencias Pecuarias, v. 18, p

28 Characterization of lane snapper (Lutjanus synagris) semen using the Computer Assisted Semen Analysis Caracterização do sêmen de ariacó (Lutjanus synagris) utilizando o sistema de Análise de Sêmen Assistido por Computador Vettorazzi, M.B. 1 *, Maggioni, R., 1, Furtado Neto, M.A.A.¹, Lopes, J.T. 2, Salmito- Vanderley, C.S.B. 2 1 Universidade Federal do Ceará. 2 Universidade Estadual do Ceará. * mayra.vettorazzi@hotmail.com ABSTRACT Computer Assisted Semen Analysis systems are great to produce high quality information about semen motility and morphometry. The aim of this work was to characterize the Lutjanus synagris semen using Sperm Class Analyzer (SCA). Fresh semen was accessed for its motility and for morphology it was necessary to fix it in saline formaldehyde and stain it with Panoptic CBC. The total progression, straightness and wobble were 70.97, and 67%, respectively. VCL and VAP were and 26.3 µm/s, respectively. ALH and BCF were 2.96 µm and 4.6 Hz, respectively. Key words: Lutjanus synagris; Computer Assisted Semen Analysis; Marine fish semen. Palavras-chave: Lutjanus synagris; Analise de Sêmen Assistida por Computador; Sêmen de peixes marinhos. INTRODUCTION The softwares which analyze sperm features (CASA) figure as a great methodology to the quick and complex access to sperm quality, either concerning motility or morphology, and it has been employed to determine individual variations in many different species, playing an essential role in aquaculture (LAHNSTEINER e PATZNER, 1998). The aim of this work was to qualitatively characterize the Lutjanus synagris semen, concerning its motility and morphometry using the Computer Assisted Sperm Analysis (CASA), from SCA (Sperm Class Analyzer, SCA 2005, Microptics S.L., Spain). 698

29 MATERIAL AND METHODS To access the sperm motility, a semen aliquot of 2µL was activated and homogenized with sea water (1120mlOsm). The images were analyzed immediately under the ph1 filter and objective of 10x. It was considered, at least, the motility of 2000 spermatozoa per semen samples. To sperm head morphometry analyses it was necessary the preparation of a fixed solution of semen and saline formaldehyde (0.1%), at 1:10 proportion (fresh semen: fixative). The smear was subjected to stain technique with the kit for Panoptic CBC (Instant-Prov) and taken to SCA software analyses. It was considered 200 spermatozoa from each semen sample. RESULTS AND DISCUSSION The obtained results related to the motility parameters are placed in table 1. Vettorazzi et al. (2010) subjectively analyzing the initial motility of L. synagris fresh semen found value of 82.5 ±12.5%, slightly higher than the one found in the present work, nevertheless the technique used in our studies was much more rigorous, as it is performed by computer. Tuset, et al. (2008), analyzing Gadus mohrua semen found mean values of straightness and wobble of 85.43% e 85%, respectively, higher than the ones obtained in the present work. Using the SCA software, Tuset et al. (2008) demonstrated that the G. mohrua s spermatozoa VCL ranges between µm/s, greatly large than L. synagris s spermatozoa VCL. Regarding VAP, our result was lower than the ones reported for Boops boops, Diplodus sargus, Mullus barbatus e Trachurus mediterraneus (LAHNSTEINER e PATZNER, 1998), which were 70.2 µm/s, 76.6 µm/s, 92.2 µm/s e 69.5 µm/s respectively. It is interesting to point out that works using CASA systems to evaluate marine teleosts semen are rare, especially to the ones occurring in the Brazilian coast. The morphology analyzes results of L. synagris semen are shown in table 2. The L. synagris spermatozoa head presented a subtle elliptic shape. Tuset et al. (2008), in G. mohrua morphology study found two different groups as for the shape of the head: being 85.5% of elongated head (mean ellipticity of 1.72), and 14.5% of round head. Marco-Jiménez et al. (2008) using SCA software to evaluate the spermatozoa morphometry of Sparus aurata and Diplodus puntazzo found mean values of lenth of 1.97 ± 0.01 and = 2.57 ± 0.01µm; width, 1.80 ± 0.01 e 2.22 ± 0.02 µm; area, 3.16 ± 0.03 e 4.44 ± 0.02 µm e perimeter 6.52 ± 0.04 e 7.70 ± 0.02 µm, respectively for the two 699

30 species. The data leads to the conclusion that L. syangris spermatozoa are around 40% and 24% bigger than the ones of S. aurata e D. puntazzo, respectively. Spermatozoa morphology is quite peculiar and varies considerably within the same species. CONCLUSIONS Accordingly to the results obtained, the L. synagris sperm presents low velocities when compared to other marine teleosts. The spermatozoa head shape is subtly elliptic and it is slightly bigger than the ones of other marine teleosts. ACKNOWLEDGEMENTS We acknowledge the Personnel Improvement Coordination of Postgraduate Education (CAPES), the Biotechnology Integrated Nucleus (NIB - UECE), the Coastal Environmental Studies Center (CEAC - UFC) and the FINEP. Table 1 L. synagris sperm motility parameters expressed in mean values ± standard VCL Curvilinear velocity; VSL Velocity in a straight line; VAP Average path velocity; ALH Lateral head displacement; BCF Beat cross frequency. Progression (%) Velocity (%) Velocity (µm/s) Amplitude Fast/ Slows Mediums ALH BCF Total Estatics (<20 Sraightness Wobble VCL VSL VAP (20 to 42 (µm) (Hz) µm/s) µm/s) Table 2 Mean values ± standard deviation and coefficient of variation of L. synagris spermatozoa size and shape. Characteristic Mean ± D.P. C.V. (%) Lenth (µm) 3.3 ± Width (µm) 2.95 ± Area (µm 2 ) 8.73 ± Perimeter (µm) ± Ellipticity 1.12 ± Elongation 0.06 ± Roughness 1.00 ± Regularity 0.87 ±

31 REFERENCES LAHNSTEINER, F.; PATZNER, R., Sperm motility in the marine teleosts Boops boops, Diplodus sargus, Mullus barbutus and Trachurus mediterraneus. Journal of Fish Biology., v.52, p , MARCO-JIMÉNEZ ET AL., Morphometric characterization of sharpsnout sea bream (Diplodus puntazzo) and gilthead sea bream (Sparus aurata) spermatozoa using computer-assisted spermatozoa analysis (ASMA), Journal of Applied Ichthyology, n24, p , TUSET, V. M.; TRIPPEL, E. A.; DE MONSERRAT, J., Sperm morphology and its influence on swimming speed in Atlantic cod, Journal of Applied Ichthyology, v.24, p , VETTORAZZI, M.B., GOMES, E.T., SOUZA, R.L.M., CÉSAR, J.R.O e FURTADO NETO,M.A.A., Motilidade espermática do sêmen de ariacó, Lutjanus synagris, Arquivo de Ciências do Mar, Fortaleza, v.43(2), p.21-26,