EFEITO DA RELAÇÃO VOLUME DE SÊMEN/VOLUME DE ÁGUA SOBRE TEMPO DE ATIVAÇÃO ESPERMÁTICA EM PACU (Piaractus Mesopotamicus)

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1 ml HTU, UTH EFEITO DA RELAÇÃO VOLUME DE SÊMEN/VOLUME DE ÁGUA SOBRE TEMO DE ATIVAÇÃO ESERMÁTICA EM ACU (iaractus Mesopotamicus) 1 1 Eduardo Antônio Sanches, Diego Mendes Baggio, Robie Allan Bombardelli 3 4 Bruno Estevão de Souza Elexio Vidal 2, 1 Acadêmicos do Curso de Engenharia de esca da Universidade Estadual do Oeste do araná - UNIOESTE, Campus Toledo. Rua da Faculdade, 645, Jardim La Salle, CE , Toledo-R, eduanches@hotmail.com 2 rofessor Assistente do Curso de Engenharia de esca da Universidade Estadual do Oeste do araná. Rua da Faculdade, 645, Jardim La Salle, CE Engenheiro de esca, Rua da Faculdade, 645, Jardim La Salle, CE , Toledo-r 4 Responsável técnico do Centro de esquisa em Aqüicultura Ambiental CAA/IA, Linha Mandarina, Estrada da Usina, s/n. TALAVRAS-CHAVE:T Tcaracterísticas seminais, peixes, reprodução de peixes.t RESUMO O pacu (iaractus mesopotamicus) é uma espécie da família Characidae e subfamília Myleinae. Esta espécie apresenta grande importância para a pesca comercial em suas regiões de origem e de interesse para o cultivo em vários países da América do Sul, ao longo do rio araná. O objetivo do presente experimento foi avaliar o efeito de diferentes relações de volume de sêmen/volume de água sobre tempo de ativação dos espermatozóides de pacu (iaractus mesopotamicus). Utilizou-se três reprodutores com peso ± desvio padrão de 2.800,00 ± 400,00 g, induzidos hormonalmente com 2,5 mg de extrato pituitário de carpa.kg de reprodutor. Após a colheita, realizou-se a mistura do sêmen proveniente de todos os reprodutores, dando origem a um pool de sêmen, e então foram feitas análises do tempo de ativação espermática em diferentes diluições do sêmen. Os tratamentos utilizaram as -6 relações de volume de sêmen/volume de água de 5,0x10, 5,0x10 ; 5,0x10 e 5,0x10 de sêmen/ml de água. Após a diluição, a mensuração do tempo de ativação espermática foi realizada em microscópio de luz em objetiva de 40X, utilizando-se 5 μl da mistura, sendo avaliado o tempo em que aproximadamente 50 % dos espermatozóides mantiveram-se móveis. Os dados obtidos foram submetidos á analise de regressão, apresentando relação linear negativa ( < 0,05) entre o tempo de ativação espermática e a relação volume de sêmen/volume de água. Este resultado sugere que em altas diluições do sêmen os espermatozóides desta espécie apresentam-se ativos durante um maior período de tempo e esta relação pode ser expressa pela equação y = 20,5400 1,0863 (Log x).

2 sendo INTRODUÇÃO O pacu (iractus mesopotamicus) é uma espécie da família Characidae e subfamília Myleinae (NAKATANI et al., 2001). Esta é uma espécie de grande importância para a pesca comercial em suas regiões de origem e de interesse para o cultivo em vários países da América do Sul, ao longo do rio araná (URBINATI & GONÇALVES, 2005). Devido a sua importância para a aqüicultura brasileira, esta espécie tem recebido atenção especial pelos pesquisadores devido no intuito de melhorar as técnicas empregadas em seu cultivo. No entanto algumas destas técnicas já estão praticamente dominadas, como é o caso das técnicas reprodutivas (URBINATI & GONÇALVES, 2005). Contudo alguns estudos relacionados com o método de fertilização artificial, a qualidade dos gametas e suas relações com o sucesso na fertilização artificial ainda devem ser realizados. Dentre alguns dos fatores limitantes, pode-se considerar a qualidade dos espermatozóides e as relações volume de sêmen/volume de água empregadas durante a ativação espermática, pois tais processos influenciam diretamente no processo de fertilização artificial (CHEREGUINI et al., 1999). Diante disso o objetivo do presente experimento foi avaliar o efeito de diferentes relações de volume de sêmen/volume de água sobre tempo de ativação dos espermatozóides de pacu (iaractus mesopotamicus). MATERIAL E MÉTODOS O experimento foi conduzido no Laboratório de Tecnologia da Reprodução dos Animais Aquáticos Cultiváveis/UNIOESTE, instalado no Centro de esquisas em Aqüicultura Ambiental - CAA/IA - Toledo. Foram selecionados três reprodutores de pacu (iaractus mesopotamicus), que liberavam esperma sob leve pressão abdominal, com peso médio ± desvio padrão de 2800,00 ± 400,00 g. Os animais selecionados foram transferidos para o laboratório, pesados, marcados e separados em caixas circulares, com renovação de água. osteriormente realizou-se a indução hormonal, através de duas aplicações de extrato pituitário de carpa (EC), onde os animais receberam um total de 2,5 mg de EC. kg de reprodutor a primeira dose correspondendo 10 % do total e a segunda 12 horas antes desta. As aplicações foram realizadas de forma intraperitonial, na região da nadadeira peitoral. Após as aplicações a temperatura foi monitorada freqüentemente. As coletas dos gametas foram realizadas após um período de 240 horas - grau ou unidades térmicas acumuladas (UTA), sendo estas contadas a partir da segunda aplicação hormonal. ara as coletas de sêmen, os animais foram contidos e secos com pano e papel toalha. Com a garantia da papila genital estar seca, foi aplicada individualmente massagem na região abdominal do animal sempre no sentido encéfalo-caudal. A primeira gota de sêmen foi desprezada para evitar possível contaminação com urina e o restante do sêmen foi coletado até ocorrer à redução na liberação evitando qualquer sinal de sangramento a fim de evitar possíveis influencias/interferências na avaliação da qualidade seminal. A coleta de sêmen foi realizada individualmente em um tubo Falcon, com graduação de 0,1mL. Após a mensuração do volume total de sêmen liberado, o material coletado foi posteriormente colocado em pequenos recipientes dentro de caixas

3 e ml e de isopor contendo gelo a uma temperatura média de 13ºC. Em seguida, realizou-se a mistura do sêmen proveniente de todos os reprodutores, dando origem a um pool de sêmen, e então foram feitas análises de concentração espermática, índice de sobrevivência espermática e o tempo de ativação espermática nas diferentes relações de diluição do sêmen. Utilizou-se como solução ativadora dos espermatozóides água de poço artesiano, proveniente da própria estação, a uma temperatura de 29,5ºC. Este ensaio foi composto por um delineamento experimental inteiramente casualizado, composto por sete tratamentos e três repetições. Os tratamentos foram constituídos pelas - relações de diluição do sêmen ou volume de sêmen/volume de água de 5,0x ; 5,0x10 ; 5,0x10 ; 5,0x10 ; 5,0x10 ; 5,0x10 1mL de sêmen/ml de água. Após a mistura do sêmen com a solução ativadora, utilizou-se 5μL da mistura para a avaliação do tempo de ativação espermática em um microscópio de luz em objetiva de 40X, sendo avaliado o tempo em que aproximadamente 50% do espermatozóides mantiveram-se móveis. ara a realização das análises estatísticas foram utilizados apenas os resultados de tempo de ativação espermática proveniente dos tratamentos referentes às relações de diluição do -6 sêmen de 5,0x10 ; 5,0x10 ; 5,0x10 ; 5,0x10 de sêmen/ml de água. Este procedimento foi realizado devido ao fato da elevada concentração espermática verificada no pool de sêmen, impossibilitar a adequada mensuração do tempo de ativação espermática em maiores relações de diluição. Os resultados obtidos, foram submetidos análise de regressão linear à um nível de 5% de significância. O software utilizado para a realização das análises estatísticas foi o SAEG (Sistema de Análises Estatísticas e Genéticas). RESULTADOS E DISCUSSÃO A produção espermática média ± desvio padrão dos reprodutores de pacu (iaractus mesopotamicus) foi de 12,03 ± 1,62 ml. O pool do sêmen 10 apresentou concentração espermática de 5,2975x10 espermatozóide.ml 98,77 % de espermatozóides vivos. Os resultados médios das relações de volume de sêmen/volume de água utilizadas e dos tempos de ativação espermática do sêmen do pacu (iaractus mesopotamicus) estão expressos na Tabela 01. Os dados de tempo de ativação apresentaram relação linear negativa ( < 0,05) entre o tempo de ativação espermática (s) e o aumento das relações de diluição do sêmen ou relação volumes de sêmen:volume de água (Figura 01). De acordo com MARQUES, (2001) a relação volume de sêmen/volume de água é um fator limitante na caracterização da motilidade espermática, sendo a concentração espermática no meio inseminante e o volume do diluente os principais desencadeadores da ativação espermática. ara que aproximadamente 100 % dos espermatozóides mantenham-se móveis e o tempo da ativação espermática dure o maior período de tempo, é necessário haver uma alta relação de volume de sêmen/volume de água ( 1/1000), sendo o contrário previsto para as baixas relações (BILLARD et al., 1995). O resultado do presente experimento sugere que a relação de diluição seminal ou volume de sêmen/volume de água deve receber atenção especial, pois tais diluições apresentam duas importantes implicações: a) uso de pouca água pode causar reduzida taxa de diluição do meio e conseqüentemente uma ineficiente redução de sua osmorregularidade, comprometendo a ativação dos

4 espermatozóides, ou não proporcionar um meio adequado para o encontro dos gametas e, b) o excessivo volume de água, pode diluir excessivamente o meio, impedindo o espermatozóide de alcançar a micrópila, durante o curto período de tempo de ativação que os mesmos adquirem (CHEREGUINI et al., 1999). Sendo assim, novo estudos relacionados à relação volume de sêmen/volume de água, devem ser realizados, pois estes poderão contribuir e/ou subsidiar novos estudos relacionados à tecnologia da reprodução artificial do pacu (iaractus mesopotamicus). Tabela 01: Tempo de ativação espermática médio em sêmen de pacu (iaractus mesopotamicus) submetido a diferentes relações de diluição ou de volume de sêmen/volume de água. Relações (volume de sêmen/volume de água) Tempo de Ativação (s) Desvio adrão (s) 0, ,337 0,806 0, ,447 1,230 0, ,543 2,127 0,005 23,350 2, Tempo de Ativaçao (s) 25 y = 20,54-1,0863x 23 R 2 = 0,435 21,5,5,5-2,5-2 Relação de volume de sêmen/volume de água (Log) Figura 01: Relação entre o tempo de ativação espermática (s) e as diferentes relações de diluição ou volume de sêmen/volume de água utilizadas na ativação do sêmen de pacu (iaractus mesopotamicus). CONCLUSÕES Conclui-se que quanto mais diluído for a mistura entre o sêmen proveniente de reprodutores de pacu (iaractus mesopotamicus) e a solução ativadora, maior será o tempo de ativação espermática (s). REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS BILLARD, R.; COSSON, J.; CRIM, L. W. et al. Sperm physiology and quality. In: BROMAGE, N. R.; ROBERTS, R. J. (Ed). Broodstock management and egg and larval quality. London: Blackwell Science, p.252.

5 CHEREGUINI, O.; DE LA BANDA, I. G.; RASINES, I. et al. Artificial fertilization in turbot, Scopothalmus maximus, (L.): different methods and determination of the optimal sperm-egg ratio. Aquaculture Research, v.30, p , MARQUES, S. reservação a curto prazo do sêmen de teleósteos neotropicais de água doce. Belo Horizonte: ontifícia Universidade Católica de Minas Gerais, f. Dissertação (Mestrado em Zoologia de Vertebrados). ontifícia Universidade Católica de Minas Gerais, NAKATANI, K.; AGOSTINHO, A.A.; BAUMGARTNER, G. et al. Ovos e Larvas de eixes de Água Doce. Maringá: EDUEM, p. URBINATI, E. C.; GONÇALVES, F. D. acu (iaractus mesopotamicus) In: BALDISSEROTTO, B.; GOMES L. C. (Ed.) Espécies nativas para a piscicultura no Brasil. Santa Maria: editoraufsm, 2005, p