MOTILIDADE Câmara de Makler

Transcrição

1 A Motilidade e a Motilidade Espermática Progressiva são realizadas por meio de vídeos neste programa. Não há item de ensaio. Para MOTILIDADE trata-se de dois casos retratados em dois vídeos, um obtido em câmara de Makler (ESP MA) e outro em câmara de Neubauer (ESP NE). Cada vídeo corresponde a um campo de visão do microscópio de contraste de fase. Analise o vídeo correspondente a câmara utilizada no seu laboratório. Se não utilizar Makler ou Neubauer, opte pelo vídeo obtido com câmara de Makler, conforme orientações abaixo. Fique atento, o caso filmado em Câmara de Makler é diferente do filmado em câmara de Neubauer e pode apresentar resultado diferente. É permitido reportar resultado para leitura nas duas câmaras desde que ambas sejam utilizadas na rotina. Para Motilidade Espermática Progressiva trata-se de um caso retratado em um único vídeo obtido em um único campo de visão do microscópio de contraste de fase, entre lâmina e lamínula, correspondendo a uma amostra de paciente. Os vídeos estão disponíveis no Sistema Online, e podem ser acessados na área de reporte de resultados (formulário de resposta). Assista ao vídeo quantas vezes achar necessário e avalie esta nova forma de controle. MOTILIDADE Câmara de Makler Caso/Vídeo: ESP-MA 01-A A câmara de Makler possui uma profundidade de 0.01 mm e uma marcação graduada de 100 quadrados (área total de 1 mm 2 e volume de 0,01 mm 3 = 0,01 µl). Assim, o volume compreendido na área de 10 quadrados após a colocação da lamínula é de mm 3 ou 0,001 µl. 1. O vídeo disponibilizado corresponde a um campo do microscópio com 10 quadrados, filmados durante 30 segundos com ampliação de 200 vezes. Algumas observações são importantes para esta contagem: 1.1 Não devem ser contados os espermatozóides que penetram no campo. 1.2 Devem ser contados apenas os espermatozoídes intactos, ou seja, aqueles que possuem cabeça e cauda. 1.3 Não devem ser contados espermatozoídes móveis decaptados (sem cabeça). 2. Deve-se realizar a contagem de espermatozóides presentes, independente da progressão nos 10 quadrados do campo. 3. A contagem será realizada nos 10 quadrados, o que corresponde a um volume de 0,001 µl. Portanto, o número de espermatozóides contados por campo do microscópio deverá ser multiplicado por um milhão ( ) para que o resultado corresponda a milhões/ml: Concentração de espermatozóides (milhões/ml) = número de espermatozóides contados no campo do microscópio x Observação: Os termos concentração de espermatozóides e número total de espermatozóides não são sinônimos. O número total de espermatozóides é o número total de espermatozóides ejaculados enquanto a concentração de espermatozóides é o número de espermatozóides por uma unidade de volume de sêmen. 4. Nestes mesmos quadrados deve ser realizada a contagem de espermatozóides móveis. O resultado da motilidade espermática é expresso em percentual: Página 1/5 Fev/2012

2 Motilidade espermática (%) = Quantidade de espermatozóides móveis por campo x 100 por campo Exemplo: Suponha que a análise do vídeo tenha apresentado o resultado ilustrado abaixo: Espermatozóides móveis Espermatozóides imóveis Qtd. de Espermatozóides Móveis: 11 Qtd. Total de Espermatozóides: 16 Concentração de espermatozóides = 16 x = 16 milhões/ml No formulário online deverão ser reportados apenas os dados brutos da motilidade espermática, ou seja, a quantidade de espermatozóides móveis (no exemplo, 11) e a quantidade total de espermatozóides (no exemplo, 16). O cálculo da motilidade espermática em percentual será feito automaticamente pelo sistema. No exemplo acima, o % de motilidade corresponderia a: Motilidade = (11,0 / 16,0) x 100 = 68,75 % MOTILIDADE Câmara de Neubauer Caso/Vídeos: ESP- NE 02- A A área da câmara dentro do círculo é de 1,0 mm 2 e contém 25 quadrados grandes com 16 quadrados menores em cada um. A câmara de Neubauer possui a espessura de 0,1 mm e volume (dos 25 quadrados grandes) de 0,1 mm 3 = 0,1 µl. A contagem de um quadrado grande multiplicado por 25 corresponde a 0,1µL, que ao ser multiplicado por resulta em milhões/ml. 1. O vídeo disponibilizado corresponde a um campo do microscópio com um quadrado grande, filmado durante 30 segundos com ampliação de 400 vezes. Algumas observações são importantes para esta contagem: 1.1 Não devem ser contados os espermatozóides que penetram no campo (constituído pelos 16 quadrados menores). 1.2 Devem ser contados apenas os espermatozóides intactos, ou seja, aqueles que possuem cabeça e cauda. 1.3 Não devem ser contados espermatozóides móveis decaptados (sem cabeça). 1.4 Critério de Seleção dos Espermatozóides a serem Contados: Segundo a Organização Mundial de Saúde, para determinar se um espermatozóide deve ou não ser contado deve ser verificada a posição de sua cabeça,uma vez que a orientação de sua cauda não possui relevância. Um quadrado grande é limitado pela linha central das três que o demarca, conforme destacado em negrito na figura Um espermatozóide deverá ser contado quando: - Encontrar-se no interior do quadrado grande, - Se a maioria de sua cabeça encontrar-se entre as duas linhas internas que o delimitam, conforme exemplificado através dos círculos brancos da figura 1. - Caso a maioria de sua cabeça esteja em uma linha central, este só deve ser contado se estiver sobre o L formado entre o lado esquerdo e o lado inferior do quadrado grande, conforme exemplificado através dos círculos brancos da figura 2. Página 2/5 Fev/2012

3 1.4.2 Um espermatozóide não deverá ser contado quando encontrar-se entre as duas linhas exteriores que delimitam o quadrado. Caso esteja sobre a linha central, para que este seja desconsiderado na contagem deve estar fora da região L descrita anteriormente, conforme exemplificado pelos círculos pretos das figuras 1 e 3. Figura 1 Figura 2 Figura 3 2. Deve-se realizar a contagem de espermatozóides presentes no campo, independente da progressão. Concentração de espermatozóides (milhões/ml) = número de espermatozóides contados no campo do microscópio x x fator diluição Obs. O fator de diluição deve ser considerado na fórmula acima apenas quando diluições forem realizadas no momento da análise do material. Como no programa são enviadas imagens digitalizadas, salvo quando informado o fator de diluição nos Dados da Rodada, o laboratório não deverá considerar o fator de diluição para o cálculo da Concentração de espermatozóides. 3. Neste mesmo campo deve ser realizada a contagem de espermatozóides móveis. 4. O resultado da motilidade espermática deve ser expresso em percentual: Motilidade espermática (%) = Quantidade de espermatozóides móveis por campo x 100 por campo Exemplo: Suponha que a análise do vídeo tenha apresentado o resultado ilustrado abaixo, a partir de uma diluição 1:20 (5,0 µl do esperma líquido em 95 µl do diluente): Espermatozóides móveis Espermatozóides imóveis Qtd. de Espermatozóides Móveis: 3 Qtd. Total de Espermatozóides: 9 Concentração de espermatozóides = 9 x x 20 = 45 milhões/ml No formulário online deverão ser reportados apenas os dados brutos da motilidade espermática, ou seja, a quantidade de espermatozóides móveis (no exemplo, 3) e a quantidade total de espermatozóides (no exemplo, 9,0) O cálculo da motilidade espermática em percentual será feito automaticamente pelo sistema. No exemplo acima, o % de motilidade corresponderia a: Motilidade = (3,0 / 9,0) x 100 = 33,3 % Página 3/5 Fev/2012

4 MOTILIDADE ESPERMÁTICA PROGRESSIVA Caso/Vídeos: MEP A O vídeo disponibilizado corresponde a um campo do microscópio de contraste de fase, filmado durante 30 segundos com ampliação de 200 vezes, entre lâmina e lamínula. 2. Deve-se realizar a contagem de espermatozóides progressivos (PR), não progressivos (NPR) e imóveis (IM), conforme o sistema para classificação de motilidade recomendado pela Organização Mundial de Saúde (WHO Laboratory Manual for the Examination and processing of human semen Fifth Edition), que distingue os espermatozóides com motilidade progressiva ou não progressiva daqueles que são imóveis. Algumas observações são importantes para esta contagem: 2.1 Não devem ser contados os espermatozóides que penetram no campo 2.2 O campo do microscópio que está no vídeo apresenta formato retangular e não circular. 2.3 Devem ser contados apenas os espermatozóides intactos, ou seja, aqueles que possuem cabeça e cauda. 2.4 Não devem ser contados espermatozóides móveis decaptados (sem cabeça). Abaixo a classificação: Motilidade progressiva (PR) : espermatozóides móveis ativamente, em direção linear ou em grandes círculos, independentemente da velocidade. Motilidade não progressiva (NPR): todos os outros padrões de motilidade com ausência de progressão, como por exemplo, quando os espermatozóides nadam em pequenos círculos, quando a força do flagelo quase desloca a cabeça, ou quando apenas uma batida flagelar pode ser observada. Imóvel (IM): espermatozóides com ausência de qualquer movimento. 3. Ao final, deve-se somar os valores obtidos de PR, NPR e IM para obter o total no campo. 4. O cálculo da motilidade espermática progressiva é expresso em % para cada uma das classificações: % de Espermatozóides com Motilidade Progressiva (PR) = Quantidade de espermatozóides móveis PR x 100 % de Espermatozóides com Motilidade Não Progressiva (NPR) = Quantidade de espermatozóides móveis NPR x 100 % de Espermatozóides Imóveis (IM) = Quantidade de espermatozóides IM x 100 Exemplo: Suponha que a análise do vídeo tenha apresentado os resultados ilustrados abaixo: Contagem Campo Analisado PR NPR IM Total Vídeo MEP No formulário online deverão ser reportados apenas os dados brutos da motilidade espermática progressiva, ou seja, a quantidade de espermatozóides móveis (PR e NPR) e IM (no exemplo,10, 6 e 8, respectivamente) e a quantidade total de espermatozóides (no exemplo, 24). O cálculo da motilidade espermática progressiva em percentual será feito automaticamente pelo sistema. No exemplo acima, o % de motilidade para cada modalidade corresponderia a: Página 4/5 Fev/2012

5 Resultados em Percentual Campo Analisado PR NPR IM Vídeo MEP 42 % 25 % 33 % Motilidade Progressiva = (10,0 / 24,0) x 100 = 42,0 % Motilidade Não Progressiva = (6,0 / 24,0) x 100 = 25,0% Imóveis = (8,0 / 24,0) x 100 = 33 % Requisitos Mínimos Para Visualização dos Vídeos Plug-in do Macromedia Flash Player 7.0 ou superior (Versão ou superior. recomendada) Firefox 3.0 ou superior, Internet Explorer 6.0 ou superior ou Safari 1.0 ou superior. Conexão de banda larga de 500 Kbps ou superior. Referências Bibliográficas Laboratory Manual for the Examination and processing of Human Semen World Ministry of Healthy, WHO. 5ª Edição, PEREIRA, O. S. & JANINI J.B.M. Atlas de Morfologia Espermática, Editora Atheneu, PIVA, S. Espermograma. Laboratório São Camilo, GALBA E.S.MORAES. Espermocitologia Espermograma em Critério Estrito, 2ª edição, Editora Educs, ALBUQUERQUE, C., MENDES, M.E. Gestão da Fase Analítica do Laboratório: como assegurar a qualidade na prática. ControlLab, Vol 1., ALBUQUERQUE, C., MENDES, M.E. Gestão da Fase Analítica do Laboratório: como assegurar a qualidade na prática. ControlLab, Vol 2., Página 5/5 Fev/2012