Instituto de Ciências da Saúde Campus Dutra Curso: Nutrição Disciplina: Microbiologia de Alimentos Prof.: Fernanda Malagutti Tomé Aula prática: MORFOLOGIA E COLORAÇÃO DE BACTÉRIAS ROTEIRO DE AULA PRÁTICA 1. Usar uniforme (sapato fechado, jaleco, touca, máscara, sem adornos); 2. Os alunos devem realizar a higienização das mãos para adentrar ao laboratório, conforme rotina; 3. Separar os utensílios e ingredientes necessários à execução do experimento, reunindo todos em um só local; 4. Sempre transportar os materiais em bandejas; 5. Escolher utensílios com capacidade de acordo com o experimento a executar; 6. Anotar todos os resultados no roteiro da aula; Objetivos - Analisar as diferentes morfologias bacterianas expostas e classifica-las - Executar a coloração de Gram em bactérias da microbiota bucal - Classificar as bactérias segundo a coloração de Gram. Atividade I Técnica de coloração de Gram a) Preparação do material biológico - Usando uma espátula estéril, friccionar a superfície da mucosa oral. - Fazer um esfregaço circular na superfície da lâmina. - Deixar secar à temperatura ambiente - Fixar passando a lâmina de duas as três vezes na chama do bico de Bunsen. b) Técnica de coloração de Gram - Cobrir toda a lâmina com solução de cristal de violeta. - Aguardar um minuto e desprezar o corante na pia. - Cobrir a lâmina com lugol, aguardar 1 minuto e 30 segundos. Desprezar o corante. - Inclinar a lâmina e gotejar álcool-acetona até que não haja mais desprendimento do corante (aproximadamente 30 segundos). - Lavar a lâmina rapidamente em água corrente - Cobrir com fucsina de Gram e aguardar 30 segundos. - Lavar a lâmina e secar (sem esfregar) - Colocar a lamínula antes de visualizar no microscópio com a objetiva de imersão
- Esquematizar o visualizado no circulo abaixo. A coloração foi Gram + ou Gram -. Atividade II Análise da morfologia bacteriana - Visualizar as lâminas expostas na bancada e classificá-las conforme a morfologia observada. Escolher duas e esquematizar nos círculos abaixo.
Instituto de Ciências da Saúde Campus Dutra Curso: Nutrição Disciplina: Microbiologia de Alimentos Prof.: Fernanda Malagutti Tomé Aula prática: crescimento de microrganismos em alimentos INSTRUÇÕES 7. Usar uniforme (roupa branca, sapato fechado, jaleco, touca, máscara, sem adornos); 8. Os alunos devem realizar a higienização das mãos para adentrar ao laboratório, conforme rotina; 9. Separar os utensílios e ingredientes necessários à execução do experimento, reunindo todos em um só local; 10. Sempre transportar os alimentos e utensílios em bandejas; 11. Escolher utensílios com capacidade de acordo com o experimento a executar; 12. Usar o material adequado (tábua, faca, trinchante entre outros) para limpar, cortar os alimentos. 13. Anotar todos os resultados no roteiro da aula; 14. Proceder à higienização dos materiais utilizados durante a aula, secar e guardar nos devidos lugares. Objetivo: avaliar a qualidade do leite em função do número de microrganismos presentes. Materiais: leites tipo A, B e leite fermentado ou outro tipo composição do meio ágar trypticase soy (ou meio de cultura ágar Mueller Hinton): - peptona de caseína 15,0g - peptona de soja 5,0g - NaCl 5,0g - Ágar 15,0g - Água destilada 1.000mL - Corrigir o ph para 7,1-7,5 tubos de ensaio placas de Petri alça de platina
bico de Bunsen estufa lápis para vidro Procedimentos: Preparar diluições decimais em série até 10 5 dos leites utilizados no experimento. Inocular as placas em três repetições com 1 ml das diluições de 10³ a 10 5. Verter nas placas o meio ágar trypticase soy a ±50ºC. Homogeneizar, deixar solidificar, inverter e incubar por dois a três dias a 30ºC. Proceder à contagem das colônias. Calcular o número de bactérias (UFC)/mL = média do no. de colônias x diluição.
Instituto de Ciências da Saúde Campus Dutra Curso: Nutrição Disciplina: Microbiologia de Alimentos Prof.: Fernanda Malagutti Tomé Aula prática: deterioração microbiana de alimentos INSTRUÇÕES 1. Usar uniforme (roupa branca, sapato fechado, jaleco, touca, máscara, sem adornos); 2. Os alunos devem realizar a higienização das mãos para adentrar ao laboratório, conforme rotina; 3. Separar os utensílios e ingredientes necessários à execução do experimento, reunindo todos em um só local; 4. Sempre transportar os alimentos e utensílios em bandejas; 5. Escolher utensílios com capacidade de acordo com o experimento a executar; 6. Usar o material adequado (tábua, faca, trinchante entre outros) para limpar, cortar os alimentos. 7. Anotar todos os resultados no roteiro da aula; 8. Proceder à higienização dos materiais utilizados durante a aula, secar e guardar nos devidos lugares. Objetivo: discutir os mecanismos da conservação e deterioração dos alimentos. Materiais: açúcar amido de milho copos de água plásticos filme plástico leite óleo de cozinha vinagre caneta para plástico Procedimentos: Preparar o mingau. Para isso, coloque sob o fogo uma colher de sopa de açúcar, três colheres de sopa de amido de milho e um copo de leite.
Dividir a quantidade de mingau feita em 15 copos plásticos. Três dos copos serão o controle, ou seja, eles ficarão a temperatura ambiente. Os outros serão submetemos a diferentes tratamentos: geladeira, com adição de óleo, com adição de vinagre e tampado com filme plástico. Utilizar três repetições por tratamento. A observação dos resultados deve ser feita durante, aproximadamente, 5 (cinco) dias. Espera-se que em todos os copos, com exceção do que foi guardado na geladeira, ocorra grande proliferação de microrganismos. Poderão ser observados, principalmente, os fungos. Observações: Sugere-se que o professor ressalte não só os problemas relacionados às perdas de alimentos, mas também o papel benéfico e fundamental do processo de decomposição realizado por fungos e bactérias nos ecossistemas. A utilização de repetições de um mesmo tratamento, bem como de um grupo controle garantem maior confiabilidade aos experimentos. Essa é uma boa oportunidade para discutir os métodos de investigação científica com os estudantes, inclusive seus aspectos éticos. Pode ser solicitado aos alunos outro experimento sobre o tema deterioração, que pode ser desenvolvido como trabalho complementar da disciplina. Os dados podem posteriormente ser apresentados a toda a turma.
Instituto de Ciências da Saúde Campus Dutra Curso: Nutrição Disciplina: Microbiologia de Alimentos Prof.: Fernanda Malagutti Tomé Aula prática: análise microbiológica de alimentos INSTRUÇÕES 1. Usar uniforme (roupa branca, sapato fechado, jaleco, touca, máscara, sem adornos); 2. Os alunos devem realizar a higienização das mãos para adentrar ao laboratório, conforme rotina; 3. Separar os utensílios e ingredientes necessários à execução do experimento, reunindo todos em um só local; 4. Sempre transportar os alimentos e utensílios em bandejas; 5. Escolher utensílios com capacidade de acordo com o experimento a executar; 6. Usar o material adequado (tábua, faca, trinchante entre outros) para limpar, cortar os alimentos. 7. Anotar todos os resultados no roteiro da aula; 8. Proceder à higienização dos materiais utilizados durante a aula, secar e guardar nos devidos lugares. Objetivo: proceder à análise de microrganismos em água e/ou em alimentos. SUGESTÃO 1: Análise Microbiológica da Água e Indicadores Amostragem: Para a análise microbiológica, as amostras devem ser tomadas do ponto representativo do sistema de distribuição ou do reservatório a ser examinado. TESTE PRESUNTIVO (COLIFORMES TOTAIS): Inocule uma série de três tubos contendo 10 ml (concentração dupla), 9 ml e 9,9 ml do meio Caldo Lauryl Triptose com, respectivamente 10 ml, 1 ml e 0,1 ml da amostra. Incube a 37 º C por 48 horas. A presença de gás no tubo de Duhran, indica teste presuntivo positivo. Anote o número de teste positivos para cada diluição. TESTE PARA O GRUPO DE COLIFORMES FECAIS: Transfira uma alçada de todos os tubos do teste presuntivo que deram resultado positivo para tubos contendo 5ml do meio EC. Incube os tubos em banho a 44,5 o C por 48 horas. A presença de gás no tubo de Duhran indica teste positivo. Anote os números de tubos positivos para cada diluição.
DIFERENCIAÇÃO DE BACTÉRIAS DO GRUPO COLIFORME: Inocule por esgotamento, a partir de um dos tubos positivos de meio EC, uma placa com meio EMB (ou meio de cultura ágar sangue). Incube as placas invertidas por 24 horas. Colônia típica: nucleada com ou sem brilho metálico Colônia atípica: anucleada, opaca, rosada e de consistência gomosa Colete uma colônia da placa e faça uma coloração de Gram Meio Caldo Lauryl Triptose Triptose...20g Lactose...5g Fosfato de potássio dibásico..2,75g Fosfato de potássio monobásico.2,75g Cloreto de sódio...5g Lauryl sulfato de sódio...0,1g Água destilada...1000ml PH final = 6.8 Meio EC Triptose...20g Lactose...5g Fosfato de potássio dibásico..4g Fosfato de potássio monobásico.1,5g Cloreto de sódio...5g Sais biliares...5g Água destilada...1000ml PH final = 6.9 EMB Agar peptona...10g Lactose...5g Sacarose...5g Fosfato de potássiodibásico..2g Eosina...13,5g Azul de metileno...0,065g Agar...2g Água destilada...1000ml PH final = 6.8
MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA Data: / / Tema: Grupo: 1. RA: 2. RA: 3. RA: 4. RA: 5. RA: 6. RA: 7. RA: 8. RA: Objetivos: Materiais e Equipamentos: Amostras: Procedimentos:
Resultados: Análise crítica dos resultados: