Técnicas Microbiológicas

Transcrição

1 IX Semana de Biologia da UFPB Técnicas Microbiológicas e Rotina Laboratorial Laboratório de Genética de Microrganismos - DBM Conjunto de procedimentos, ações, técnicas, metodologias, equipamentos e dispositivos capazes de eliminar ou minimizar riscos inerentes às atividades de pesquisa, produção, desenvolvimento, tecnológico, ensino e prestação de serviços, que podem comprometer a saúde do homem, dos animais, do meio ambiente ou a qualidade dos trabalhos desenvolvidos Meyer e Eddie 74 casos de brucelose associados a laboratórios Conclusão: A manipulação de culturas, espécies ou inalação de poeira contendo a bactéria Brucella é eminentemente perigosa para os trabalhadores de um laboratório Sulkin e Pike Pesquisa sobre infecções associadas a laboratórios 222 infecções, sendo 21 fatais 12% por acidentes relatados Sulkin e Pike Nova pesquisa 1342 casos de infecções, sendo 72% das infecções por brucelose, tuberculose, tifo e infecção estreptocócica

2 1974 Classificação de Risco dos Agentes Etiológicos 1999 Fundação da Associação Nacional de (ANBio) 1980 Precauções universais na manipulação de fluídos corpóreos 1999 Primeiro Congresso Brasileiro de 1984 Primeiro Workshop Brasileiro de - Fiocruz 2000 como discíplina científica universitária 1995 Lei Brasileira de Lei 897/ Indução de ações em biossegurança pelo CNPq -Provocados por algum tipo de energia; - A caracterização depende do equipamento; -Principais: * Equipamentos que geram calor ou chamas; * Equipamentos de baixa temperatura; * Material radioativo -Conhecimento das substâncias químicas; - Cuidados adequados para o manuseio. - Decorrentes da exposição à produtos de animais, vegetais e microrganismos; - Agentes microbiológicos: * Grau de patogenicidade * Poder de invasão * Resistência a esterilização * Virulência * Capacidade mutagênica - Vias de contaminação.

3 Classificação dos Microorganismos - Fatores que gerem situações de risco para a integridade física e moral; - Fatores que possam interferir nas características psicofisiológicas. Classe 2: Risco individual moderado e baixo risco para a comunidade. Nível de Segurança 2 Uso de Barreiras Equipamentos de Proteção Individual (EPI): Proteção contra o contato com agentes infecciosos, tóxicos ou corrosivos, calor excessivo, fogo dentre outros. Uso de Barreiras Equipamentos de Proteção Coletiva: Manuseio de produtos biológicos envolve: Proteção dos pesquisadores, do ambiente e da pesquisa desenvolvida. Limpeza Desinfecção Descontaminação Anti-sepsia Assepsia

4 Processos : Processos : - úmido(vapor sob pressão) Autoclave, maior poder de penetração e redução do número de microrganismos. - seco -Incineração, flambagem ar quente (estufa) AUTOCLAVE - Dispositivo selado que permite a entrada de vapor sob pressão. ESTUFA - seco Ação: desnaturação das proteínas microbiana Processos : Processos : -Flambagem de alças e agulhas. - eletromagnética Exemplos: microondas radiação ultravioleta raios X raios γ elétrons

5 ultravioleta Capela de Fluxo Laminar Processos : -Remoção dos microrganismos de líquidos e gases sensíveis ao calor: * Glicose * Antibióticos * Reagentes químicos Tipos de filtros: A) B) C) : A) Filtro de profundidade B) Membrana filtrante C) Filtro de trilhas de nuleação Filtro de trilhas de nucleação - microscopia eletrônica de varredura Produtos Desinfetantes e Esterilizantes

6 Técnicas Microbiológicas Atividades no laboratório: Planejamento das tarefas Condições adequadas Material necessário Maior segurança Menor desperdício Rotina Laboratorial Cultivo e Manutenção Meios de Cultura: Mistura de nutrientes requeridos para a sobrevivência e crescimento dos microorganismos em um sistema artificial. Podem ser em caldo (líquido) ou ágar (sólido). Meios líquidos - úteis para a obtenção de grande biomassa de microrganismos Cultivo e Manutenção Meios quimicamente definidos: (Meios com finalidades especiais) Meios seletivos Meios diferenciais Meios de enriquecimento Meios para anaeróbios Meios para o cultivo de bactérias (Geral-BHI) Métodos de Cultivo Inoculação: Técnica de esgotamento por estrias Técnica da semeadura em superfície Inundação Diluição por extinção (Obtenção de cultura pura, originada à partir de uma única célula (UFC) A suspensão original da amostra é diluída seriadamente e semeiam-se amostras de cada diluição) Medida do Crescimento Método Quantitativo: Avaliação do número de células - UFC/mL Unidades Formadoras de Colônias por ml ex.: Contagem celular microscópica ou eletrônica, contagem em placa ou através de membrana filtrante. Método Qualitativo: Avaliação do peso celular ou estimativa de unidades de absorbância da massa de células em caldo ou suspensões (turbidez).

7 Identificação dos Microorganismos Estocagem Características Culturais Morfologia Colonial Características Morfológicas Coloração simples Coloração diferencial Coloração de Gram Microscopia Óptica Características Metabólicas Características Fisiológicas Características Antigênicas Características patogênicas Características genéticas Conservação de Culturas Puras: Conservação por um curto período (dias a meses): Armazenagem à temperatura de refrigeradores (4 C a 10 C) - Repiques freqüentes Conservação por longos períodos: Nitrogênio líquido a -196 C Freezers a -70 C/ -120 C Liofilização congelamento a seco - viabilidade das culturas por muitos anos - coleção de microrganismos como referência. Material: Tubos de Cultura e Placas de Petri Material Instrumentos para Transferência de Culturas Obrigada!!!!!