Curso: Nutrição Disciplina: Microbiologia de Alimentos Prof.: Fernanda Malagutti Tomé Aula prática: MORFOLOGIA E COLORAÇÃO DE BACTÉRIAS

Transcrição

1 Instituto de Ciências da Saúde Campus Dutra Curso: Nutrição Disciplina: Microbiologia de Alimentos Prof.: Fernanda Malagutti Tomé Aula prática: MORFOLOGIA E COLORAÇÃO DE BACTÉRIAS ROTEIRO DE AULA PRÁTICA 1. Usar uniforme (sapato fechado, jaleco, touca, máscara, sem adornos); 2. Os alunos devem realizar a higienização das mãos para adentrar ao laboratório, conforme rotina; 3. Separar os utensílios e ingredientes necessários à execução do experimento, reunindo todos em um só local; 4. Sempre transportar os materiais em bandejas; 5. Escolher utensílios com capacidade de acordo com o experimento a executar; 6. Anotar todos os resultados no roteiro da aula; Objetivos - Analisar as diferentes morfologias bacterianas expostas e classifica-las - Executar a coloração de Gram em bactérias da microbiota bucal - Classificar as bactérias segundo a coloração de Gram. Atividade I Técnica de coloração de Gram a) Preparação do material biológico - Usando uma espátula estéril, friccionar a superfície da mucosa oral. - Fazer um esfregaço circular na superfície da lâmina. - Deixar secar à temperatura ambiente - Fixar passando a lâmina de duas as três vezes na chama do bico de Bunsen. b) Técnica de coloração de Gram - Cobrir toda a lâmina com solução de cristal de violeta. - Aguardar um minuto e desprezar o corante na pia. - Cobrir a lâmina com lugol, aguardar 1 minuto e 30 segundos. Desprezar o corante. - Inclinar a lâmina e gotejar álcool-acetona até que não haja mais desprendimento do corante (aproximadamente 30 segundos). - Lavar a lâmina rapidamente em água corrente - Cobrir com fucsina de Gram e aguardar 30 segundos. - Lavar a lâmina e secar (sem esfregar) - Colocar a lamínula antes de visualizar no microscópio com a objetiva de imersão

2 - Esquematizar o visualizado no circulo abaixo. A coloração foi Gram + ou Gram -. Atividade II Análise da morfologia bacteriana - Visualizar as lâminas expostas na bancada e classificá-las conforme a morfologia observada. Escolher duas e esquematizar nos círculos abaixo.

3 Instituto de Ciências da Saúde Campus Dutra Curso: Nutrição Disciplina: Microbiologia de Alimentos Prof.: Fernanda Malagutti Tomé Aula prática: crescimento de microrganismos em alimentos INSTRUÇÕES 7. Usar uniforme (roupa branca, sapato fechado, jaleco, touca, máscara, sem adornos); 8. Os alunos devem realizar a higienização das mãos para adentrar ao laboratório, conforme rotina; 9. Separar os utensílios e ingredientes necessários à execução do experimento, reunindo todos em um só local; 10. Sempre transportar os alimentos e utensílios em bandejas; 11. Escolher utensílios com capacidade de acordo com o experimento a executar; 12. Usar o material adequado (tábua, faca, trinchante entre outros) para limpar, cortar os alimentos. 13. Anotar todos os resultados no roteiro da aula; 14. Proceder à higienização dos materiais utilizados durante a aula, secar e guardar nos devidos lugares. Objetivo: avaliar a qualidade do leite em função do número de microrganismos presentes. Materiais: leites tipo A, B e leite fermentado ou outro tipo composição do meio ágar trypticase soy (ou meio de cultura ágar Mueller Hinton): - peptona de caseína 15,0g - peptona de soja 5,0g - NaCl 5,0g - Ágar 15,0g - Água destilada 1.000mL - Corrigir o ph para 7,1-7,5 tubos de ensaio placas de Petri alça de platina

4 bico de Bunsen estufa lápis para vidro Procedimentos: Preparar diluições decimais em série até 10 5 dos leites utilizados no experimento. Inocular as placas em três repetições com 1 ml das diluições de 10³ a Verter nas placas o meio ágar trypticase soy a ±50ºC. Homogeneizar, deixar solidificar, inverter e incubar por dois a três dias a 30ºC. Proceder à contagem das colônias. Calcular o número de bactérias (UFC)/mL = média do no. de colônias x diluição.

5 Instituto de Ciências da Saúde Campus Dutra Curso: Nutrição Disciplina: Microbiologia de Alimentos Prof.: Fernanda Malagutti Tomé Aula prática: deterioração microbiana de alimentos INSTRUÇÕES 1. Usar uniforme (roupa branca, sapato fechado, jaleco, touca, máscara, sem adornos); 2. Os alunos devem realizar a higienização das mãos para adentrar ao laboratório, conforme rotina; 3. Separar os utensílios e ingredientes necessários à execução do experimento, reunindo todos em um só local; 4. Sempre transportar os alimentos e utensílios em bandejas; 5. Escolher utensílios com capacidade de acordo com o experimento a executar; 6. Usar o material adequado (tábua, faca, trinchante entre outros) para limpar, cortar os alimentos. 7. Anotar todos os resultados no roteiro da aula; 8. Proceder à higienização dos materiais utilizados durante a aula, secar e guardar nos devidos lugares. Objetivo: discutir os mecanismos da conservação e deterioração dos alimentos. Materiais: açúcar amido de milho copos de água plásticos filme plástico leite óleo de cozinha vinagre caneta para plástico Procedimentos: Preparar o mingau. Para isso, coloque sob o fogo uma colher de sopa de açúcar, três colheres de sopa de amido de milho e um copo de leite.

6 Dividir a quantidade de mingau feita em 15 copos plásticos. Três dos copos serão o controle, ou seja, eles ficarão a temperatura ambiente. Os outros serão submetemos a diferentes tratamentos: geladeira, com adição de óleo, com adição de vinagre e tampado com filme plástico. Utilizar três repetições por tratamento. A observação dos resultados deve ser feita durante, aproximadamente, 5 (cinco) dias. Espera-se que em todos os copos, com exceção do que foi guardado na geladeira, ocorra grande proliferação de microrganismos. Poderão ser observados, principalmente, os fungos. Observações: Sugere-se que o professor ressalte não só os problemas relacionados às perdas de alimentos, mas também o papel benéfico e fundamental do processo de decomposição realizado por fungos e bactérias nos ecossistemas. A utilização de repetições de um mesmo tratamento, bem como de um grupo controle garantem maior confiabilidade aos experimentos. Essa é uma boa oportunidade para discutir os métodos de investigação científica com os estudantes, inclusive seus aspectos éticos. Pode ser solicitado aos alunos outro experimento sobre o tema deterioração, que pode ser desenvolvido como trabalho complementar da disciplina. Os dados podem posteriormente ser apresentados a toda a turma.

7 Instituto de Ciências da Saúde Campus Dutra Curso: Nutrição Disciplina: Microbiologia de Alimentos Prof.: Fernanda Malagutti Tomé Aula prática: análise microbiológica de alimentos INSTRUÇÕES 1. Usar uniforme (roupa branca, sapato fechado, jaleco, touca, máscara, sem adornos); 2. Os alunos devem realizar a higienização das mãos para adentrar ao laboratório, conforme rotina; 3. Separar os utensílios e ingredientes necessários à execução do experimento, reunindo todos em um só local; 4. Sempre transportar os alimentos e utensílios em bandejas; 5. Escolher utensílios com capacidade de acordo com o experimento a executar; 6. Usar o material adequado (tábua, faca, trinchante entre outros) para limpar, cortar os alimentos. 7. Anotar todos os resultados no roteiro da aula; 8. Proceder à higienização dos materiais utilizados durante a aula, secar e guardar nos devidos lugares. Objetivo: proceder à análise de microrganismos em água e/ou em alimentos. SUGESTÃO 1: Análise Microbiológica da Água e Indicadores Amostragem: Para a análise microbiológica, as amostras devem ser tomadas do ponto representativo do sistema de distribuição ou do reservatório a ser examinado. TESTE PRESUNTIVO (COLIFORMES TOTAIS): Inocule uma série de três tubos contendo 10 ml (concentração dupla), 9 ml e 9,9 ml do meio Caldo Lauryl Triptose com, respectivamente 10 ml, 1 ml e 0,1 ml da amostra. Incube a 37 º C por 48 horas. A presença de gás no tubo de Duhran, indica teste presuntivo positivo. Anote o número de teste positivos para cada diluição. TESTE PARA O GRUPO DE COLIFORMES FECAIS: Transfira uma alçada de todos os tubos do teste presuntivo que deram resultado positivo para tubos contendo 5ml do meio EC. Incube os tubos em banho a 44,5 o C por 48 horas. A presença de gás no tubo de Duhran indica teste positivo. Anote os números de tubos positivos para cada diluição.

8 DIFERENCIAÇÃO DE BACTÉRIAS DO GRUPO COLIFORME: Inocule por esgotamento, a partir de um dos tubos positivos de meio EC, uma placa com meio EMB (ou meio de cultura ágar sangue). Incube as placas invertidas por 24 horas. Colônia típica: nucleada com ou sem brilho metálico Colônia atípica: anucleada, opaca, rosada e de consistência gomosa Colete uma colônia da placa e faça uma coloração de Gram Meio Caldo Lauryl Triptose Triptose...20g Lactose...5g Fosfato de potássio dibásico..2,75g Fosfato de potássio monobásico.2,75g Cloreto de sódio...5g Lauryl sulfato de sódio...0,1g Água destilada ml PH final = 6.8 Meio EC Triptose...20g Lactose...5g Fosfato de potássio dibásico..4g Fosfato de potássio monobásico.1,5g Cloreto de sódio...5g Sais biliares...5g Água destilada ml PH final = 6.9 EMB Agar peptona...10g Lactose...5g Sacarose...5g Fosfato de potássiodibásico..2g Eosina...13,5g Azul de metileno...0,065g Agar...2g Água destilada ml PH final = 6.8

9 MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA Data: / / Tema: Grupo: 1. RA: 2. RA: 3. RA: 4. RA: 5. RA: 6. RA: 7. RA: 8. RA: Objetivos: Materiais e Equipamentos: Amostras: Procedimentos:

10 Resultados: Análise crítica dos resultados:

11