RESUMO: Varias camadas celulares, morfologicamente distintas, formam a mucosa

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1 Compara.;ao da Citologia Vaginal de Cabras Ciclicas e Gestantes da Ra.;a Saanen Ramon da Silva Raposol; Lucia Daniel Machado da Silva 2 ; Raimundo Nonato Braga Lobo 3 ;Vicente Jose de Figueiredo Freitas 2 ; Francisca Elda Ferreira Dias l RESUMO: Varias camadas celulares, morfologicamente distintas, formam a mucosa vaginal. Essas camadas variam em espessura ao longo do ciclo estral, durante a gesta9ao, anestro e lacta9ao de acordo com 0 estimulo hormonal a qual sao submetidas. 0 objetivo do presente trabalho foi comparar 0 perfil citologico vaginal de cabras da ra9a Saanen c1clicas e gestantes. Foram utilizadas dez cabras Saanen, adultas, criadas em sistema intensivo e pertencentes ao plantel do setor de ovinocaprinocultura da Faculdade de Veterinaria da Universidade Estadual do Ceara. As dez femeas foram divididas em dois grupos, em partes iguais, formados por (05) nao gestantes - grupo A ou controle e (05) gestantes - grupo B. Forarn confeccionados, a partir do primeiro diado ciclo estral (estro), esfrega90s vaginais de ambos os grupos em dias previamente selecionados. Os resultados foram expressos na forma de media atraves dos quadrados minimos. Obteve-se como resultado a presen9a, de forma significativa, das celulas intermediarias em todas as fases do ciclo estral e na gesta9ao. Logo, nao foi considerado possivel determinar um diagnostico de gesta9ao devido a semelhan9a citologica entre 0 diestro e 0 periodo de gesta9ao. Palavras-chave: cabras, ciclo estral, citologia vaginal, epitelio vaginal, gesta9ao, Saanen ABSTRACT: Many cdls layers, morphologycal distints, form the vaginal mucous membrane. The layers differ in espessure during the estrous cycle, pregnancy, anestrus, lactation in concordance with hormonal stimulus. The aim of the present work was to compare the vaginal cytological profile of ciclic and pregnant Saanen goats. Ten mature Saanen goats were used in this experiment. They belong to the Small Ruminants Sector of Veterinary School (FAVET/UECE) and were created in intensive system. The ten goats were divided in two equal groups. The first group named group A or control was formed by ciclic goats and the second group, named group B, was formed by pregnant goats. Since their first day of estrous cycle detected by a vasectomised male, vaginal smears were performed in scratch days. The results were expressed in mean by least square. It was obtained a significant percentage of the intermediate cells during estrous cycle and gestation. So, that pregnancy can not be determined through cytological examination of a vaginal smear because the pregnancy and diestrus period are similar. Key Words: vaginal cytology, vaginal ephitelium, estrous cycle, gestation, goats, Saanen IMestrando - Produ9ao e Reprodu9ao de Pequenos Ruminantes /UECE "Prof. do Dept Q de Medicina Veterinaria da UECE 3Prof. do Dept Q de Zootecnia da UFC

2 A reproduc;ao animal, dia a dia, vem ganhando espac;o no mundo cientifico como area viabilizadora da qualidade genetica e proliferativa dos animais domesticos, com enfase as especies responsaveis pel a produc;ao de carne e leite, dando condic;oes de perspectivas positivas no contexto alimentar da humanidade. Os avanc;os da biotecnologia da reproduc;ao de ovinos e caprinos tem propiciado resultados fabulosos no que diz respeito it rapida propagac;ao de genes superiores e no aumento do desempenho reprodutivo (AMOAH & GELAYE, 1997). Com isso, torna-se relevante e quase imprescindivel um acurado controle do estro, para um bom aproveitamento e, consequente desencadeamento da gestac;ao que, quando precocemente diagnosticada, viabilizara todo o programa de reproduc;ao. Dentro deste contexto, a citologia vaginal apresenta-se como um meio de se identificar 0 estagio reprodutivo das varias especies animais. Introduzido por PAPANICOLAOU (1942), a citologia esfoliativa e utilizada como meio diagnostico das modificac;oes sofridas pelo epit61io vaginal em func;ao da atividade ovariana, em di versas especies animais (SANGER et al.,1958; JAROSZ et ai., 1971; GHANNAM et ai., 1972; PRETORIUS, 1977; SILVA et a!., 1986; MIROUD & NOAKES, 1990; GABRIEL et ai., 1997). Varias camadas celulares, morfologicamente distintas, formam a mucosa vaginal. Essas camadas variam em espessura ao longo do ciclo estral, durante a gestac;ao, anestro e lactac;ao (GHANNAM et ai., 1972) de acordo com 0 estimulo hormonal a qual sao submetidas (MICHELUZZI & OSTROWSKY, 1976). Sob ac;ao estrogenica, as camadas do epitelio estratificado da vagina, principalmente as mais superficiais, sofrem proliferac;ao, resultando na esfoliac;ao de celulas queratinizadas. No entanto, quando ha predominio da ac;ao progesteronica e, consequente ati vidade estrogenica baixa, ocorre a proliferac;ao e maturac;ao das celulas epiteliais presentes nas camadas mais profundas (SCHUTTE, 1967b). Durante a gestac;ao, 0 epitelio vaginal ovino sofre alterac;oes semelhantes as ocorridas durante a fase luteal. No entanto, no decorrer do periodo gestacional ha uma tendencia it diminuic;ao progressiva das c61ulassuperficiais e ao aumento das celulas intermediarias e parabasais, com predominio das celulas parabasais (GHANNAM et ai., 1972). o objetivo do presente trabalho foi comparar 0 perfil citologico vaginal de cabras da rac;a Saanen ciclicas e gestantes. o experimento foi desenvolvido nas dependencias da Universidade Estadual do Ceara (UECE), localizada em Fortaleza, cidade litoranea a '47" de latitude SuI e '37" de longitude Oeste, no periodo de fevereiro ajunho de Foram utilizadas dez cabras adultas da rac;a Saanen criadas em sistema intensivo e pertencentes ao plantel do setor de ovinocaprinocultura da Faculdade de Veterinaria da Universidade Estadual do Ceara. As femeas foram divididas em dois grupos, em partes iguais, formados por nao cobertas (grupo A au controle) e gestantes (grupo B). Para detecc;ao do estro, utilizou-se um macho vasectomizado. Foi coletado, atraves de swab vaginal, material dos dois grupos a partir do primeiro dia do cicio estral (estro). Foram confeccionados esfregac;os vaginais, um de cada cabra, em laminas de vidro, de tres em tres dias ate 0 decimo terceiro dia. Do decimo terceiro dia ate 0 vigesimo oitavo dia, os

3 esfregac;os vaginais foram confeccionados diariamente. No vigesimo oitavo dia encerraram-se as coletas para 0 grupo A, enquanto que, para 0 grupo B, os esfregac;os vaginais passaram a ser confeccionados a cada sete dias ate dia. Os esfregac;os foram fixados em alcool a 95 % por dez minutos, apos serem secados a temperatura ambiente. Os dois grupos foram considerados fisiologicamente iguais nos periodos de estro e metaestro. Com 0 termino do metaestro, os animais nao cobertos foram classificados na fase de diestro, enquanto que os cobertos foram classificados como gestantes. Com 0 retorno ao estro, a fase anterior dos animais nao cobertos foram classificados como proestro. As diversas fases do ciclo estral e 0 periodo de gestac;ao (intervalo do dia 7 ao dia 56) foram divididos da seguinte forma: estro - dias 1 (grupos A e B), 22, 23 (grupo A) e ; metaestro - dia 4 (grupos A e B), 24, 25, 26 (grupo A) diestro - dias 7,10,13 a 18,27,28 (grupo A); proestro - dias 19 a 21 (grupo A) e gestac;aodias 7, 10, 13 a 28, 35, 42, 49, 56 (grupob). Todos os esfregac;os foram corados atraves do metodo de Papanicolaou (MICHALANY, 1980). Para confirmar a gestac;ao das cabras cobertas (grupo B), foram realizados exames de ultra-sonografia no 60 2 dia pos cobertura. As laminas foram observadas ao microscopio optico com aumentos de 100x e 400x para a caracterizac;ao morfologica das c61ulas do epit61io vaginal. Foram contadas cem celulas por lamina e feita a distribuic;ao percentual dos diferentes tipos de celulas do epitelio vaginal, segundo SCHUTTE (1967a). Os dados foram analisados por meio do modelo matematico seguinte: Y k = Il+periodo+tipo IJ' 1 celular.+periodo*tipo.1 celular+e iik Y ijk =c61ula wmedia geral periodotefeito fixo do i periodo (proestro, estro, metaestro, diestro, gestante) tipo celular.=efeito fixo do j tipo celular J (paraba.sal, intermediaria, superficial nucleada, superficial anucleada) e..k=erro aleatorio lj Foram estimadas medias por meio dos quadrados minimos, sendo realizadas comparac;oes entre essas medias, considerandose estatisticamente significativas quando P<0,05. Os resultados relativos ao percentual medio dosdiferentes tipos de celulas epiteliais nas divers as fases do ciclo estral e no periodo de gestac;ao estao apresentados na Tabela 1. Durante todas as fases (proestro, estro, metaestro e diestro), inclusive durante a gestac;ao (grupo B), as celulas intermediarias foram significativamente superiores em relac;ao aos outros tipos celulares. Esses achados discordam com os encontrados por VOJTIC (1997), que estudando 0 epitelio vaginal ovino, durante 0 periodo de gestac;ao compreendido entre e 90 2 dia, observou que as celulas superficiais nucleadas sao predominantes, enquanto que as nao gestantes apresentam urn maior mimero de c61ulas parabasais, mas sem apresentar diferenc;a estatistica significativa em relac;ao aos demais tipos celulares. No entanto, esses achados concordam com os estudos feitos em cabras por VERMA et al. (1990), em que se constatou um grande numero de celulas intermediarias e parabasais por volta do 30 2 dia de gestac;ao. As celulas superficiais nucleadas nao apresentaram variac;ao significativa entre as diversas fases do cicio estral e 0 periodo gestacional estudado. As celulas superficiais anucleadas foram significativamente superiores durante 0 estro em relac;ao ao metaestro, diestro e gestac;ao. Esses achados concordam com os

4 encontrados por PRETORIUS (1977) que observou, em cabras Angora, um alto nivel de descama<;ao do epitelio vaginal durante a fase fmal do estro, ocasionando 0 aparecimento de celulas superficiais nos esfrega<;os vaginais. Comparando a fase de diestro dos animais do grupo A com 0 periodo de gesta<;ao do grupo B foi encontrado diferen<;aestatistica somente para as c61ulas parabasais. As c61ulas parabasais foram significativamente superiores na fase de diestro em rela<;ao ao periodo gestacional. Possivelmente, esse resultado em que se encontrou uma menor percentagem de c61ulas parabasais durante a gesta<;ao, devese ao fato de que cabras gestantes nao sofrem influencia estrogenica, nao havendo assim estimulo hormonal para a prolifera<;ao do epitelio vaginal, resultando num epitelio pouco estratificado e conseqiientemente, num menor numero absoluto de c61ulas, haja visto que as altera<;oes ocorridas na estrutura celular do epitelio vaginal sao primariamente um reflexo da atividade hormonal, e devido as mudan<;as nos niveis hormonais que ocorrem no animal gestante. Esses achados concordam com as afirma<;oes de MITCHELL (1972). Tabela 1 - Percentagem media (± d.p.) de ce\ulas do epit61io vaginal observadas nas fases de proestro, estro, metaestro, diestro e gesta<;ao de dez cabras Saanen Table 1- Media percentage (± s ) of the vaginal epithelial cells in the proestrus, estrous, metestrus, diestrus and gestation periods in ten Saanen goats Periodo Period Tipo celular Proestro Estro Metaestro Diestro Gesta<;ao Cell type Proestrus Estrous Metestrus Diestrus Gestation Parabasal Parabasal 9,90±1,93 Ij 6,1O±1,98ghij 10,52±1,88 f 22,84±1,22 d 17,48±O,82 e Intermecliaria 77,75±1,93 ab 76,85±1,93 abc 80,70±1,93 a 72,98±1,22 c 74,15±O,8i- xo Intermediate Super[. Nucleada 3,90±1,93 hijk 5,55± 1,93ghijk ijk, -, 2,12±1,2~ 'k 1,82±O,82 k Superf With nucleus Superf. Anucleada 8,25±1,93 fgh 11,85±1,93 f 5,25±1,93ghijk 3,62±1,2i jk ghi 6,25±O,82 Superf without nucleus Pelo menos uma letra igual significa que nao ha diferen<;a estatistica (P>O,05) At least one equal letter - no statistic difference (P>O.05) Com base nos resultados obtidos, foi concluido que nao e possivel determinar urn diagnostico de gesta<;ao atraves do exame citologico vaginal devido a semelhan<;a citologica entre 0 diestro dos animais ciclicos com 0 periodo de gesta<;ao estudado. Apesar de nao se apresentar viavel para 0 diagnostico de gesta<;ao, a citologia vaginal e uma tecnica viabilizadora do controle reprodutivo, insemina<;ao artificial e caracteriza<;ao de patologias reprodutivas como neoplasias e disturbios hormonais.

5 AMOAH, E. A. & GELAYE, S. Biotechnological advances in goat reprodction. J. Anim. Sci. 75: , GABRIEL, A. M. A., D' ANGELIS, F. H. F., PINHEIRO, N. L., SANTOS, M. A. J. & SALES, A. Compara<yao de tecnicas de colora<yaousadas em esfrega<yosvaginais de rattus norvegicus. R Bras. Med. Vet. 19:24-27, GHANNAM, S. A. M., BOSC, M. J., BUISSON, F. M. Examination of vaginal epithelium of the sheep and its use in pregnangy diagnosis. Am. J. Vet. Res., 33: , JAROSZ, S. J., DEANS, R. J. & DUKELOW, W., R. The reproductive of the african pygmy and toggenburg goat. J. Reprod. Fert.,24: , MICHALANY, J. Tecnica Histol6gica em Anatomia Patol6gica, 1Qed., Ed. Pedag6gica e Universitaria, 277p; MICHELUZZI, A. A. & OSTROWSKY, J. E. B. Vaginal cytology in canine ginecological practice. Rev. Mil. Vet. 22: , MIROUD, K. & NOAKES, D. E. Exfoliative vaginal cytology during the oestrous cycle of the cow, after ovariectomy, and after exogenous progesterone and oestradiol-17 beta. Br. Vet. J. 5: , MITCHELL, D. Vaginal biopsy as a method for diagnosing pregnancy in the ewe. Vet. Rec. 91: , PAPANICOLAOU, G. N. A new procedure for staining vaginal smears. Science, 95: , PRETORIUS, P. S. Vaginal cytological changes in the cycling and anoestrus angora goat doe. J. South African ~t. Assoc., 48: ,1977. SANGER, V. L., ENGLE, P. H. & BELL, D. S. The vaginal cytology of the ewe during the estrous cycle. J. Vet. Res., 19: , SHUTTE, A. P. Canine vaginal cytology I - Technique and cytological morphology. J. small Anim. Pract., 8: , 1967a. SHUTTE, A. P. Canine vaginal cytology II - Cyclic changes. J. small Anim. Pract., 8: , 1967b. SILVA, L. A. F., FERREIRA, H. I., DEL CARLO, R. J. & TONIOLLO, G. H. Colpocitologia do ciclo estral de cadelas em anestro com estro induzido. Rev. Bras. Reprod. Anim. 3: , VERMA, A.K., PANDIT, R. K. & CHAUHAN, R. A. S. Exfoliative vaginal cytology by Papanicolaou's techinique during follicular and luteal phase in goats. Indian J. of Anim. Sci. 60: , VOJTIC, I. Cytological features of vaginal epithelium during pregnancy in the ewe. Vet. Arhiv. 67:71-76, 1997.