Banco Português de Germoplasma Animal e Tecnologias da Reprodução

Transcrição

1 Banco Português de Germoplasma Animal e Tecnologias da Reprodução AEM Horta Investigador Coordenador Unidade de Recursos Genéticos Reprodução e Melhoramento Animal Instituto Nacional de Recursos Biológicos IP, INIA Santarém Ministério da Agricultura, do Desenvolvimento Rural e das Pescas

2 Introdução Portugal possui um património genético animal extremamente rico e diversificado Raças autóctones reconhecidas Bovinos - 15 Ovinos - 15 Caprinos - 5 Suínos - 3 Equídeos - 4 Aves - 3 Maioria das raças estão consideradas em risco de extinção

3 BPGA - Objectivos Assegurar a preservação dos Recursos Genéticos Animais Bovinos, ovinos, caprinos e suínos Garantir a conservação de raças em risco de extinção Promover a manutenção da variabilidade genética intra-racial, contrariando a erosão genética que se tem verificado Divulgar o património genético autóctone.

4 BPGA - Organização Projecto AGRO 438 Recolha de sémen, embriões e DNA Parceiros do Projecto INRB ex-ezn: Vale de Santarém Direcção Geral de Veterinária DRAP Norte Merelim - Braga FERA S. Torcato DRAP Alentejo Hde Abóbada Universidade de Évora: Évora

5 BPGA Sémen bovino Raça Nº machos Nº doses Alentejana Algarvia Arouquesa Barrosã Cachena Garvonesa Jarmelista Maronesa Marinhoa - - Mertolenga Minhota Mirandesa Preta Ramo Grande Total

6 BPGA Sémen ovino e caprino Raça Nº machos Nº doses Ch Gal Mirand Saloia S Estrela Mer B Baixa Bord E D Minho Ch Campo 1 16 Mondegueira 1 18 Mer Preta Mer Branca Campaniça 1 33 Serpentina Bravia Serrana Charnequeira Montesinho Total

7 BPGA Embriões Raça Nº fêmeas Nº embriões Ch Gal Mirand 6 20 Churra Algarvia 7 41 Mer Preta Serpentina Bravia 2 10 Serrana 4 41

8 BPGA DNA Amostras de DNA de todos os animais com sémen ou embriões representados no BPGA Avaliação da diversidade genética intra- e inter-racial

9 BPGA Balanço Grande maioria das raças portuguesas têm actualmente sémen armazenado Necessidade de assegurar: Duplicações Continuidade Renovação

10 Limitações à inseminação artificial (IA) em Ovinos Anatomia e alterações bioquímicas do cérvix durante o estro Congelação do sémen

11 IA em Ovinos A IA global (vag+cerv) em ovinos apresenta taxas de fertilidade aceitáveis quando se utiliza sémen fresco ou refrigerado (30-60%). A IA global (vag+cerv) com sémen congelado raramente atinge os 20% de fertilidade. Tipo de Sémen Machos (n) Total IA (n) Fertilidade (%) Mínimo (%) Máximo (%) SR ,51 a 28,57 63,15 SC ,04 b 6,66 20,13 Total P<0,001 Resultados obtidos na raça saloia pela nossa equipa no efectivo de Pegões - DRAP LVT

12 IA em Ovinos Problema: O sémen congelado nesta espécie não consegue atingir taxas de fertilidade aceitáveis após IA por via transvaginal.

13 IA em Ovinos Dificuldades identificadas: A estrutura anatómica do cérvix só permite a inseminação intracervical em 41-56% dos animais, dependendo da raça. A deposição vaginal de sémen congelado na IA origina taxas de fertilidade muito baixas (0-5%).

14 IA em Ovinos A proporção de IA intra-cervicais depende das raças e raramente ultrapassa 50% do total das IA ,6 55,6 % ,4 41,4 Serra 30 Saloia Vaginal Cervical

15 IA em Ovinos Na cobrição natural o sémen é depositado na vagina mas o número de espermatozóides é cerca de 10 vezes superior ao que se utiliza na IA. Como existe um número significativo de spz expulsos para o exterior após deposição vaginal, a fertilidade das IA vaginais fica seriamente comprometida: IA vaginal com sémen refrigerado: 30% (fert) IA vaginal com sémen congelado: 0% (fert)

16 IA em Ovinos Estratégias da investigação: A. Aumentar a proporção de IA cervicais através de tratamentos de amolecimento e dilatação cervical, que permitam a penetração do dispositivo de inseminação. B. Impedir a expulsão dos espermatozóides da vagina após a IA (ex.: aumento da adesividade dos spz à mucosa vaginal).

17 IA em Ovinos Tratamentos: I. O sulfato de terbutalina é um b2-agonista com propriedades miorelaxantes (da musculatura lisa da vagina e do cérvix) II. A prostaglandina E1 (PGE1) promove o amolecimento e dilatação cervical, além de modificações na composição das secreções cervicais durante o estro (+ ácido hialurónico, Leethongdee et al., 2007). A membrana dos espermatozóides contêm uma proteína de ligação ao ácido hialurónico (HABP1) que promove a sua adesividade às mucosas genitais (Ranganathan et al., 1994).

18 IA em Ovinos O tratamento PGE1+Terbutalina induz a abertura do cérvix durante o estro, que atinge o máximo cerca de 1 hora após a sua administração (Barbas et al., 2001). Quando o tratamento PGE1+Terbutalina é administrado no momento da IA (sémen refrigerado), não existe aumento da taxa de fertilidade (assincronia das alterações estruturais do cérvix e suas secreções com a IA) (Barbas et al., 2003). Quando o tratamento é administrado 6 horas antes da IA (sémen refrigerado) existe um aumento significativo da taxa de fertilidade global de 43% para 64% (Horta et al., 2010).

19 IA em Ovinos Sémen refrigerado (Horta et al, RDA) Site of insemination Row Overall fertility Treatments Vagina Cervix P level (treatments) n Fert (%) n Fert (%) n Fert (%) Control a a a Treated b a b Column P level Overall fertility (site of insemination) Sémen congelado (resultados preliminares, 2010) Site of insemination Row Overall fertility Treatments Vagina Cervix P level (treatments) n Fert (%) n Fert (%) n Fert (%) Control Treated Column P level Overall fertility (site of insemination) ,

20 2009 by American Society for Biochemistry and Molecular Biology Model of hyaluronan binding by HABP1. Yadav G et al. J. Biol. Chem. 2009;284:

21 Hipótese Misoprostol Sémen fresco / refrigerado ácido hialurónico vaginal + HABP1 (nos spz) + adesividade espermática ao epitélio vaginal + reserva de espermatozóides + fertilidade das IA vaginais Sémen congelado Misoprostol ácido hialurónico vaginal HABP1 (nos spz) - adesividade dos spz ao epitélio vaginal - reserva de spz - fertilidade das IA vaginais ligeiro aumento da fertilidade das IA cervicais

22 Hipótese vs. resultados Testemunha 70 57, Fertilidade / tipo de sémen HABP ,4 33,3 20 HABP1 Ac. Hialurónico 10 0 Fresco 0 Congelado Tratado Epitélio vaginal ,7 70,6 Congelação diminui a HABP1 no spz? 50 45, Ac. Hialurónico ,8 Epitélio vaginal 0 Fresco Congelado Vaginal Cervical

23 Estratégia de investigação 1. Investigar se existem alterações no conteúdo e função da HABP1 nos spz provocadas pelos métodos de congelação actuais 2. Caso se confirmem aquelas alterações, investigar procedimentos de congelação ou descongelação seminal que as minimizem. 3. Continuar a investigar métodos que promovam o aumento da proporção de inseminações intracervicais.

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