Profa. Leila Larisa Medeiros Marques

Processo de fazer cópias exatas de um organismo ou de qualquer elemento.» Clonagem celular;» Clonagem molecular.

Clonagem celular Vitória em 2011:

Clonagem celular

» Surgiu a Dolly, que teve seu nascimento anunciado em 1997, tornando-se um marco na Era Biotecnológica.

» A ovelha Dolly só nasceu depois de 276 tentativas que fracassaram. A equipe retirou uma célula embrionária normal de uma ovelha e removeu seu núcleo. Depois, retiraram o núcleo de uma célula da glândula mamária de outra ovelha e usaram corrente elétrica para fundi-la com a célula enucleada. Além disso, dentre as 277 células da mãe de Dolly que foram inseridas em um óvulo sem núcleo, 90% não alcançaram nem o estágio de blastocisto. De todos os outros embriões que conseguiram se dividir e ser implantados, apenas Dolly nasceu.

Clonagem celular

celular A ovelha Dolly foi sacrificada no Instituto Roslin, na Escócia (14/02/2003), após ser diagnosticada com uma doença pulmonar progressiva comum em animais mais velhos. A hipótese que tem sido discutida é que essa doença, comum em animais mais velhos, poderia estar associada ao encurtamento dos telômeros (seqüências de DNA que ficam na ponta dos cromossomos).

» O maior feito dos cientistas, foi fazer com que uma célula adulta se tornasse totipotente (células-tronco) de novo. As células-tronco (ou totipotentes) possuem a capacidade de se diferenciarem em diferentes tipos de célula;» Estava aberto o caminho para a clonagem terapêutica e a terapia por células-tronco.

» Utilização da técnica de clonagem para obtenção de células tronco a fim de restaurar a função de um órgãos ou tecido;» A clonagem "terapêutica" teria a vantagem de não oferecer riscos de rejeição se o doador fosse a própria pessoa. (ex.: reconstituir a medula em alguém que se tornou paraplégico após acidente);» Ajudaria casais inférteis que não podem ter filhos, mesmo após anos de tratamento de infertilidade;» Melhoramento animal, resgate de material genético, maximização do potencial genético de uma raça.

» Conceito: É a técnica que fabrica embriões a partir da transferência do núcleo da célula já diferenciada, de um adulto ou embrião, para um óvulo sem núcleo;» Não há o implante em um útero, logo não pode reproduzir seres humanos.

» Vantagem: Possibilita a obtenção de célulastronco embrionárias pluripotentes, potencialmente capazes de produzir qualquer tecido em laboratório, o que poderá permitir o tratamento de doenças cardíacas, doenças degenerativas (Alzheimer, Parkinson), câncer, além da reconstituição de medula óssea, de tecidos queimados ou tecidos destruídos etc, sem o risco de rejeição, caso o doador seja o próprio beneficiado com a técnica.

» A clonagem humana no Brasil é proibida atualmente (Lei nº 11.105, de 24 de março de 2005) com pena de reclusão de dois a cinco anos e multa para quem realizá-la. Entretanto, segundo a mesma lei, é permitida, para fins de pesquisa e terapia, a utilização de célulastronco embrionárias obtidas de embriões humanos produzidos por fertilização in vitro e não utilizados no respectivo procedimento. Vale frisar que esses embriões devem estar inviáveis ou congelados há três anos ou mais.

Envolve a manipulação dos genes e criação de inúmeras combinações entre genes de organismos diferentes. - O melhoramento genético tradicional é imprevisível e demorado. - Através da engenharia genética consegue-se resultados mais previsíveis e em tempo bem menor.

resultado obtido a partir de pedaços de DNA de fontes diferentes ligados entre si. Para se conseguir DNA recombinante, é preciso cortar as moléculas de DNA que se quer recombinar e em seguida, "colar" um no outro. Para isso, os pesquisadores contam com ferramentas extremamente úteis chamadas ENZIMAS DE RESTRIÇÃO.

Ex. produção de um produto de interesse

» Expressar um gene significa produzir a proteína que ele codifica;» Para expressão de gene eucarioto em procarioto: cdna.

» Para começar precisamos aumentar a quantidade do gene de interesse: PCR (Polymerase Chain Reaction)» Precisamos saber: - Sua sequência de nucleotídeos; - Organismos que o contenham; - Em que tecidos é encontrado.

A PCR encontra sua principal aplicação em situações onde a quantidade de DNA disponível é reduzida. Uma das principais aplicações do PCR é na medicina forense, onde pequenas amostras de DNA retiradas da cena de um crime (pedaços de cabelo, gotas de sangue ou saliva, etc.) são amplificadas para serem analisadas. A PCR também é utilizada em procedimentos científicos de Biologia Molecular como amplificação para gerar mutagênese, detecção de mutações ou preparação de fragmentos de DNA para clonagem.

» Extrair o material genético da célula sem danificá-lo;» Adicionar uma mistura (também conhecida como prémix) que contém os dntps (desoxirribonucleotídeos trifosfatos), que são as bases nitrogenadas ligadas com um fosfato. Os primers também chamados de oligonucleotídeos (ou iniciadores) e a enzima taq polimerase em uma solução tampão;» Toda esta mistura é colocada na máquina de PCR, o termociclador, que faz ciclos de temperatura préestabelecidos com tempos exatos.

RT-PCR» Fase de desnaturação (94-96 o C): fase onde ocorre o desenrolamento da fita dupla de DNA através da quebra das pontes de H entre as bases, dando origem a duas fitas simples de DNA;» Fase de hibridização ou anelamento (50-54 o C): nesta fase os primers se ligam, especificamente, às suas sequências homólogas correspondentes no DNA;» Fase de extensão do DNA (72-76 o C): fase onde ocorre a síntese de uma nova fita antiparalela sobre a fita anteriormente desnaturada, reação esta catalisada pela taq-polimerase.» Após 30 ciclos: 1 fragmento de DNA 1.000.000.000 de cópias Rotina da PCR no lab

Estudo dirigido (duplas)- preencher e entregar.

» O resultado da PCR é analisado através de uma eletroforese em gel de agarose ou de poliacrilamida

Separação de moléculas pelo tamanho e carga elétrica quando submetidas a um campo elétrico; Gel de suporte para migração: agarose ou acrilamida; Existem também suporte de papel (papel de filtro e acetato de celulose). OBS.: a fricção com o suporte que as macromoléculas experimentam é pequena, o que faz com que o tamanho da molécula não influencie profundamente a sua velocidade de migração. Sendo assim, as moléculas são preferencialmente separadas com base em suas cargas não separa bem o DNA

Dinâmica: 2 grupos

BORÉM, A.; SANTOS, F. R. Entendendo a biotecnologia. Viçosa: UFV, 2008. Capítulo 6. Clonagem celular. SERAFINI, L. A.; BARROS, N. M.; AZEVEDO, J. L. Biotecnologia: avanços na agricultura e na agroindústria. Caxias do Sul: EDUCS, 2002. Capítulo 1. LIMA, N.; MOTA, M. Biotecnologia- Fundamentos e aplicações. Lisboa: Lidel, 2003. Capítulo VII. BORZANI, W. et al. Biotecnologia Industrial. V. 1. Fundamentos. São Paulo: Blucher, 2001. Capítulo 4. Links: PCR: https://www.youtube.com/watch?v=vicywjzbzgs Rotina da PCR: https://www.youtube.com/watch?v=rn40r5w5fkw eletroforese: Clone bovino: https://www.embrapa.br/cerrados/busca-de-noticias/- /noticia/1491024/bezerra-brasilia-e-o-novo-clone-da-embrapa