FILTRO DE LÃ DE VIDRO MELHORA PARÂMETROS QUALITATIVOS DA DOSE INSEMINANTE DO SÊMEN SUÍNO

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1 FILTRO DE LÃ DE VIDRO MELHORA PARÂMETROS QUALITATIVOS DA DOSE INSEMINANTE DO SÊMEN SUÍNO Autores: João Luis dos SANTOS¹, ², Rodrigo CHRESTANI², Lucas Dalle Laste DACAMPO², Bruna Kubiak DUARTE², Ariane Cláudia Alves da SILVA², Luana Camillo BASSEGGIO², Jean BALZAN², Lucio Pereira RAUBER³ Identificação autores: 1. Bolsista PIBITI/CNPq; 2. Acadêmico do curso de Medicina Veterinária IFC-Campus Concórdia ; 3. Orientador IFC-Campus Concórdia. Introdução Estudos apontam a redução progressiva da qualidade das doses inseminantes proporcionalmente ao aumento do tempo de armazenagem, havendo diminuição da motilidade, aumento da prevalência de espermatozoides aglutinados, defeitos de acrossoma e alteração no ph (Santos et al., 2015; Althouse et al., 2000; Bennemann et al., 2000). Um percentual de 11 a 51% de descartes dos reprodutores em centrais de colheita e processamento de sêmen por deficiências reprodutivas (Robinson e Buhr, 2005). Sendo os principais motivo de descarte ligados a qualidade espermática como aglutinação (70%), viabilidade espermática e baixa concentração (Oliveira et al., 2010). O sucesso na inseminação artificial é determinado em grande parte pela qualidade dos gametas. Como proposta para a melhoria da qualidade espermática, existem métodos de separação, com objetivo de selecionar espermatozoides funcionais a partir da população total do ejaculado e agregar vantagens qualitativas ao sêmen selecionado de reprodutores subférteis de interesse genético, apresentando maior motilidade, viabilidade e morfologia normal (Dorado et al., 2011; Morrell et al., 2013), dentre estes métodos está a separação espermática em coluna de lã de vidro. O objetivo deste projeto foi avaliar a filtragem do sêmen suíno em coluna de lã de vidro buscando a melhoria dos parâmetros qualitativos da dose inseminante. Material e Métodos As doses inseminantes utilizadas nos experimentos deste estudo foram produzidas em uma central comercial localizada no município de Xanxerê-SC e no laboratório de reprodução animal do Instituto Federal Catarinense Concórdia. Foram utilizadas 40 doses de 20 reprodutores suínos com fertilidade comprovada já treinados

2 nas rotinas semanais de coletas de sêmen. As colheitas foram realizadas pela técnica da mão enluvada. Após a colheita, o sêmen era acondicionado em banho-maria à 37ºC. Avaliou-se os parâmetros macroscópicos do ejaculado como volume, cor e odor. Os parâmetros microscópicos analisados foram a concentração espermática, vigor (0-3), aglutinação (0-3) e motilidade espermática (0-100%). As características qualitativas do sêmen exigidas para a confecção das doses respeitaram os parâmetros exigidos pelo Colégio Brasileiro de Reprodução Animal (CBRA, 2013). As doses foram diluídas em diluente comercial BTS com 3,0x10 9 espermatozoides móveis em 90mL. As mesmas eram mantidas em temperatura ambiente por 30 a 60 minutos e posteriormente acondicionadas à 17ºC. Foram montados filtros utilizando seringas descartáveis de 20mL, 600mg de lã de vidro (Merck -Alemanha) fragmentada em partículas de 1,0cm e compactada com auxílio do êmbolo até a altura de 0,4cm da seringa. No fundo da seringa era colocado um círculo de poliéster poroso para servir como barreira, afim de evitar que partículas de lã de vidro contaminassem o sêmen após a filtragem. A coluna era lavada com 20mL de diluente e autoclavada. Após 24 horas de armazenamento, as doses foram avaliadas quanto aos parâmetros qualitativos espermáticos de motilidade, vigor, concentração e aglutinação antes de serem submetidas à técnica de separação espermática em coluna de lã de vidro. Para a filtragem das doses a coluna era posicionada na vertical sobre um recipiente vazio com a mesma capacidade volumétrica da dose submetida a filtragem. A dose inseminante era despejada lentamente na parte superior da coluna e o sêmen passava por gravidade através da lã de vidro compactada no fundo da seringa, ficando armazenado no recipiente abaixo. Após isso, os mesmos parâmetros qualitativos espermáticos eram reavaliados. As médias foram comparadas pelo teste de Tukey e teste de correlação entre médias com nível significância de 5%. Os dados foram analisados com auxílio do programa Statistical Analysis System (SAS 2000). Este projeto está registrado no CEUA Campus Concórdia sob o número 15/2014. Resultados e discussão

3 Os parâmetros qualitativos espermáticos das doses inseminantes submetidas a filtração em coluna de lã de vidro e as doses convencionais estão demonstrados na Tabela 1 para comparação entre médias dos valores obtidos. Tabela 1 - Parâmetros qualitativos espermáticos de doses inseminantes submetidas ou não à separação espermática em coluna de lã de vidro após 24 horas de armazenamento. Valores aglutinações, motilidade e vigor obtidos através de estimativa visual DI Padrão DI filtradas Média CV P Aglutinação (0-3) 1,7 a 0,45 b 1,07 77,9 <.0001 Motilidade (%) ,8 7, Vigor (0-3) 1,85 b 2,72 a 2,28 26,8 <.0001 Concentração total (x10 9 ) 2,92 a 2,27 b 2,6 26, Móveis/dose (x10 9 ) 2,2 a 1,74 b 1,97 26, DI: Doses inseminantes; CV: Coeficiente de variação; * Letras diferentes na mesma linha indicam diferença estatisticamente significante (p<0,05). Com a análise dos parâmetros qualitativos espermáticos observamos que as doses inseminantes (DI) armazenadas por 24 horas apresentaram uma alta prevalência de espermatozoides aglutinados (p>0,0001), que pode ser explicado por uma capacitação espermática precoce e consequentemente redução da concentração de espermatozoides móveis por DI. Aglutinações em sêmen suíno são responsáveis por 70% dos descartes de reprodutores por motivo de qualidade seminal (Oliveira et al., 2010). A coluna de lã de vidro é altamente eficiente em diminuir a prevalência de espermatozoides aglutinados em doses suínas de baixa qualidade, com resultados superiores a outros produtos comerciais como coluna de Sephadex e a pérolas de vidro para estes parâmetros (Bussalleu et al., 2009). O percentual de espermatozoides móveis permaneceu inalterado quando as DI foram submetidas a separação espermática, demonstrando que esta técnica não altera a motilidade, que é um parâmetro espermático desejado. As doses filtradas apresentaram maior vigor em relação as não filtradas (p>0,0001). O vigor é a capacidade de progressão linear dos espermatozoides. Este aumento do vigor provavelmente foi causado pela capacitação espermática causada pelo processo mecânico de filtragem através da lã de vidro.

4 A concentração espermática sofreu um decréscimo significativo nas DI filtradas em relação as DI não filtradas da mesma forma que reduziu a concentração de espermatozoides móveis por dose. Essa redução pode ser explicada pela alta retenção de espermatozoides aglutinados, imóveis ou mortos. A concentração espermática mínima para a IA intra-uterina citada pela literatura é de 0,5 x10 9 sem prejuízos aos índices reprodutivos (Bennemann et al., 2007), portanto a redução da concentração causada pelo processo de filtragem não prejudicará as taxas de concepção. Os resultados destes experimentos foram semelhantes aos estudo preliminares de nosso grupo de pesquisa, que avaliou o efeito de diferentes quantidades de lã de vidro sobre a qualidade das DI de sêmen suíno (Santos et al., 2015), mostrando a eficiência desta técnica em reter espermatozoides aglutinados. A lã de vidro é eficiente como método de separação espermática, melhorando parâmetros qualitativos seminais importantes para o processo de fertilização e reduzindo defeitos seminais que podem acarretar no descarte de reprodutores. Entretanto, sua aplicação ainda depende de algumas adaptações para o uso na rotina das centrais de coleta ou granjas suinícolas. Conclusão A coluna de lã de vidro como método de separação espermática é eficaz em reter espermatozoides aglutinados bem como promover o aumento de características benéficas da dose inseminante. Referências ALTHOUSE, G.C; KUSTER, C.E.; CLARK, S.G.; WEISIGER, R.M. Field investigations of bacyerial contaminants and their effects on extended porcine semen. Theriogenology. v. 53, p BENNEMANN, P. E.; KOLLER, F. L.; BERNARDI, M. L. et al. Desempenho reprodutivo de fêmeas suínas submetidas à inseminação intra-uterina ou à tradicional. Ciência Rural, v.37, n.6, p , nov./dez BENNEMANN, P.E.; BORTOLOZZO, F.P.; WENTZ, I; CARDOSO, M.R.I. Motilidade espermática e integridade acrossomal em doses de sêmen suíno refrigerados e

5 inoculados com Escherichia coli e Staphylococcus aureus. Ciência Rural, v.30, n.2, p , BUSSALEU, E.; PINART, E.; RIVERA, MM.; BRIZ, M.; SANCHO, S.; YESTE, M.; CASAS,I.; FABREGA, A.; RIGAU, T.; RODRÍGUEZ-GIL, J.E.; BONET, S. Effects of matrix filtration of low quality boar semen doses on sperm quality. Reproduction in Domestic Animals, 44 (3): CBRA; Manual para exame andrológico e avaliação de sêmen animal. Colégio Brasileiro de Reprodução Animal. Organizado por Marc Henry, Jairo Pereira Neves e Maria Inês Marasquenhas Jobim 3. Ed. Belo Horizonte, DORADO, J.; ALCARÁZ, L.; DUARTE, N.; PORTERO, J. M.; ACHA, D.; HIDALGO, M. Changes in the structures of motile sperm subpopulations in dog spermatozoa after both cryopreservation and centrifugation on PureSperm gradiente. Animal Reproduction Science, v.125, p , MORREL, J. M.; WINBLAD, C.; GEORGAKAS, A.; STUHTMANN, G.; HUMBLOT, P.; JOHANNISSON, A. Reactive oxygen species in stallion semen can be affected by season and colloid centrifugation. ANIMAL Reproduction Science, v.140, p.62-69, OLIVEIRA, E. F.; MOREIRA, F.; GASTAL, G.; SÁVIO, D.; DANIELI, V. M.; LUCIA, T. J.; CORCINI, C. D. Causas de descartes de reprodutores suíno: estudo de caso. In: 9ª Mostra de produção universitária, Anais. UFPEL. Pelotas-RS ROBINSON, J.; BUHR, M. Impact of genetic selection on management of boar dead and live spermatozoa in bovine sêmen replacement. J. Dairy SciTheriogenology 63: :965, SANTOS, J.L.; RAUBER, L.P.; DUARTE, B.K.; DACAMPO, L.D.L.; BASSEGGIO, L. Efeito da coluna de lã de vidro sobre a qualidade das doses inseminantes do sêmen suíno. In: V MOSTRA DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA. Instituto Federal Catarinense Concórdia-SC