Relatório do Ensaio de Proficiência em Microbiologia de Alimentos 6 a Rodada MIB 06/12. Ensaio de Proficiência em Microbiologia de Alimentos 6ª Rodada

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2 Ensaio de Proficiência em Microbiologia de Alimentos 6ª Rodada Pesquisa de Salmonella spp. em Matriz Queijo RELATÓRIO FINAL ORGANIZAÇÃO E COORDENAÇÃO Fundação Oswaldo Cruz - Fiocruz Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde - INCQS Avenida Brasil, Manguinhos Rio de Janeiro - RJ Brasil - Cx. Postal 96 - CEP: COMISSÃO ORGANIZADORA DA RODADA - COMISSÃO DO PROGRAMA DE ENSAIO DE PROFICIÊNCIA Armi Wanderley da Nóbrega Coordenador Geral Marcus Henrique Campino de la Cruz Coordenador Técnico Maria Helena Wohlers Morelli Cardoso Coordenadora da Qualidade - COMITÊ TÉCNICO Carla de Oliveira Rosas Juliana de Castro Beltrão da Costa Marcelo Luiz Lima Brandão Márcia Barbosa Warnken Rodrigo Rollin Pinheiro Silvia Maria Lopes Bricio Valéria de Mello Medeiros Autorizada a emissão Armi W. da Nóbrega (Coordenador Geral) 6/NOVEMBRO/01 Página 1 de 17

3 SUMÁRIO 1. Introdução Objetivos Produção dos Itens de Ensaio Escolha da Matriz Preparo do Item de Ensaio Homogeneidade e Estabilidade dos Itens de Ensaio Envio dos Itens de Ensaio Análise dos Resultados Resultados das Medições dos Laboratórios Valor Designado Análise Estatística Avaliação da Homogeneidade dos Itens de Ensaio Avaliação da Estabilidade dos Itens de Ensaio Avaliação do Desempenho dos Laboratórios Participantes Resultados da Avaliação da Homogeneidade e Estabilidade dos Itens de Ensaio Avaliação da Homogeneidade Avaliação da Estabilidade de Armazenamento e de Transporte Avaliação do Desempenho dos Laboratórios Participantes Laboratórios Participantes Resultados dos Laboratórios Participantes Avaliação dos Laboratórios Participantes Conclusões Confidencialidade Referências Bibliográficas Laboratórios Participantes Anexo A Homogeneidade Segundo o Protocolo Harmonizado Página de 17

4 1. Introdução Ensaio de proficiência (EP) é o uso de comparações interlaboratoriais com o objetivo de avaliar a habilidade de um laboratório em realizar um determinado ensaio ou medição de modo competente e demonstrar a confiabilidade dos resultados gerados. Em um contexto geral, o EP propicia aos laboratórios participantes: avaliação do desempenho e monitoração contínua; evidência de obtenção de resultados confiáveis; identificação de problemas relacionados com a sistemática de ensaios; possibilidade de tomada de ações corretivas e/ou preventivas; avaliação da eficiência de controles internos; determinação das características de desempenho e validação de métodos e tecnologias; padronização das atividades frente ao mercado e reconhecimento de resultados de ensaios, em nível nacional e internacional. Com a crescente demanda por provas regulares e independentes de competência pelos organismos reguladores e clientes, o EP é relevante para todos os laboratórios que testam a qualidade de produtos. Além do baixo número de provedores de EP na área de alimentos, os custos cobrados para a participação nestes ensaios principalmente de provedores internacionais, são normalmente muito elevados, o que inviabiliza, em muitos casos, a participação de um laboratório em um número maior de ensaios. Como forma da avaliação da qualidade técnica de laboratórios de microbiologia de alimentos, provedores de EP disponibilizam escopos de ensaios envolvendo micro-organismos de importância nesta área. Assim, a realização de programas de EP no Brasil é fundamental para o aumento da confiabilidade dos resultados das medições aqui realizadas, trazendo maior qualidade aos resultados emitidos, facilitando o comércio internacional e prevenindo barreiras técnicas. Dentre as bactérias associadas às doenças de origem alimentar, destaca-se o Salmonella spp. Bactérias do gênero Salmonella têm sido descritas como um dos principais patógenos responsáveis por Doenças de Origem Alimentar (DTA) em todo o mundo (Forsythe, 00). As salmonelas se encontram amplamente distribuídas na natureza sendo o trato intestinal do homem e dos animais o principal reservatório natural. Animais podem ser colonizados, não manifestar sintomas da doença e ao serem utilizados como matéria-prima propiciar a produção de alimentos contaminados (D Aoust; Mauer, 007). Surtos de salmonelose de origem alimentar são observados e reportados com frequência. As características que favorecem a alta ocorrência desta enfermidade são: a baixa dose infectante em humanos, a habilidade de se multiplicar em alimentos não processados e a sobrevivência no ambiente por longos períodos (Newell et al., 010). Visando a promoção da saúde e em apoio a maior competitividade da indústria nacional, o INCQS promoveu o Ensaio de Proficiência em Microbiologia de Alimentos 6ª Rodada Pesquisa de Salmonella spp. em Matriz Queijo, seguindo as diretrizes da ISO/IEC e ILAC G-13, apresentando neste relatório os resultados da avaliação de desempenho dos laboratórios participantes. Página 3 de 17

5 . Objetivos Determinar o desempenho de laboratórios na realização do ensaio de pesquisa de Salmonella spp. em matriz queijo; Contribuir para o aumento da confiabilidade dos resultados das análises dos laboratórios; Propiciar subsídios aos laboratórios para a identificação e solução de problemas. 3. Produção dos Itens de Ensaio Os procedimentos de preparo dos itens de ensaio e as análises foram realizados no Setor de Alimentos do Departamento de Microbiologia (DM) do INCQS/FIOCRUZ. O referido Setor possui certificado de acreditação na metodologia analítica de contagem de Salmonella spp., pela Cgcre do Instituto Nacional de Metrologia, Normalização e Qualidade Industrial (Inmetro), segundo a norma ABNT ISO/IEC Escolha da Matriz O queijo tipo Minas Frescal é um produto tipicamente nacional, de tecnologia simples e de larga aceitação no país. Por ser um alimento de pronto consumo, e indicado para idosos, gestantes e convalescentes, inclusive em dietas hospitalares, a sua inocuidade é de suma importância para que estes produtos não venham a causar riscos à saúde do consumidor. 3.. Preparo do Item de Ensaio Foi utilizado como matriz queijo minas produzido pelo processo de ultrafiltração. Antes da utilização do alimento foi verificada a ausência de contaminação por Salmonella spp. Foram distribuídos assepticamente gramas de queijo em frascos de vidro estéreis. Para a cultura bacteriana foi utilizada a cepa de Salmonella spp. N 963 da coleção de pesquisa do Setor de Alimentos do Departamento de Microbiologia do INCQS. O lote obtido foi armazenado em ultrafreezer a -70ºC Homogeneidade e Estabilidade dos Itens de Ensaio Para a avaliação da homogeneidade foram separados aleatoriamente 4 (vinte e quatro) itens de ensaio preparados e, após a reconstituição e homogeneização do liófilo, foram preparadas diluições decimais. Foram realizados estudos de estabilidade de curta duração (transporte) e de longa duração (armazenamento e referência). Para os estudos de longa duração foi feito o controle de estoque a -70ºC (temperatura de referência) e a -0 C (temperatura de armazenamento durante o EP). Os testes da estabilidade a -70ºC e -0 C foram iniciado após o preparo do lote e finalizado após a data limite dada aos laboratórios participantes para a realização das análises do item de ensaio. Página 4 de 17

6 A estabilidade de curta duração, que verificou a influência da temperatura nas condições de transporte, foi estudada por 4 dias, em diferentes temperaturas: 4ºC, 30ºC e 35ºC, utilizandose o modelo Isócrono (Lamberty, Schimmel e Pauwels, 1997). Os testes estatísticos foram feitos segundo o Protocolo Harmonizado (Homogeneidade) e a ISO GUIDE 35 (Estabilidade); os resultados obtidos nos testes estão apresentados nos itens 5.1 e 5. deste relatório Envio dos Itens de Ensaio Para cada laboratório inscrito na 6ª Rodada do Ensaio de Proficiência em Microbiologia de Alimentos Pesquisa de Salmonella spp. em Matriz Queijo foram enviados dois itens de ensaio, contendo Salmonella spp. em aproximadamente g de queijo liofilizado, cada um, a uma concentração não declarada. Os itens de ensaio foram enviados aos laboratórios participantes, em frascos devidamente lacrados e rotulados com as seguintes informações: nome do programa, item a ser ensaiado, código da amostra e rodada em questão. Os frascos foram acondicionados em caixas para transporte de material biológico contendo gelo seco e enviadas por via aérea. 4. Análise dos Resultados 4.1. Resultados das Medições dos Laboratórios Os laboratórios receberam dois itens de ensaio contendo amostra queijo liofilizado e foram orientados a proceder como nas análises rotineiras realizadas no laboratório, a expressar os resultados analíticos como presença ou ausência de Salmonella spp. em g do queijo e informar a metodologia e os meios de cultura utilizados nas análises do EP no Formulário de Registro de Resultados. 4.. Valor Designado A composição de cada um dos dois frascos enviados aos participantes foi de conhecimento exclusivo da coordenação do EP Análise Estatística Neste tópico estão descritas as análises estatísticas utilizadas para a avaliação da homogeneidade, da estabilidade das amostras e para a avaliação do desempenho dos laboratórios participantes Avaliação da Homogeneidade dos Itens de Ensaio O Protocolo Harmonizado foi seguido na avaliação da homogeneidade dos itens de ensaio. Um resumo do procedimento estabelecido neste documento para avaliação da homogeneidade dos itens de ensaio é apresentado no Anexo A. Página 5 de 17

7 4.3.. Avaliação da Estabilidade dos Itens de Ensaio Esses testes foram empregados para se avaliar a estabilidade da concentração de Salmonella spp.na matriz em função do tempo (longa duração) e do tempo-temperatura (curta duração). Assim, foram estimadas as variâncias dos valores utilizados na regressão linear, observando-se se os valores de contagem apresentavam alguma tendência através da ferramenta estatística de análise de variância (ANOVA). A concentração de Salmonella spp. foi considerada estável quando a inclinação da reta (ou a não linearidade) não foi significativa e o gráfico da concentração em função do tempo não apresentou tendências Avaliação do Desempenho dos Laboratórios Participantes Os resultados relatados pelos laboratórios foram avaliados em relação a sua sensibilidade e exatidão como proposto por Greenhalgh (1997). O laboratório teve o seu resultado considerado satisfatório quando obteve o valor de exatidão de 100%. Este valor foi calculado em função das respostas relatadas pelos laboratórios aos itens de ensaio enviados. Foram adotados os seguintes critérios: 1. Onde os laboratórios indicaram a presença de Salmonella spp. corretamente o resultado foi considerado: Positivo ;. Onde os laboratórios indicaram a ausência de Salmonella spp. erroneamente o resultado foi considerado: Falso Negativo ; A Equação que descreve o percentual de exatidão está descrita a seguir: Exatidão Este critério avaliou a capacidade do laboratório em identificar corretamente a presença de Salmonella spp. A exatidão percentual do laboratório, quanto à presença de Salmonella spp. no queijo, foi avaliada pela seguinte Equação (1): Positivo Exatidão 100 Positivo Falso _ Negativo (1) 5. Resultados da Avaliação da Homogeneidade e Estabilidade dos Itens de Ensaio 5.1. Avaliação da Homogeneidade No teste de homogeneidade para cada um dos 4 itens de ensaio foram realizadas duas análises completas produzindo dois resultados (A e B), como mostrado na Tabela 1. Página 6 de 17

8 Tabela 1: Dados gerados no teste de homogeneidade. Amostra Contagem (UFC/g) Log 10 UFC/g A B A B ,87, ,94, ,83, ,91, ,79, ,86, ,86, ,88, ,81, ,61, ,88, ,74, ,79, ,87, ,84, ,89, ,86, ,86, ,86, ,66, ,78, ,83, ,70, ,79,89 A Tabela apresenta os resultados da análise estatística do estudo de homogeneidade. Tabela : Sumário das análises estatísticas, em log 10 UFC/g. Média p all s an s sam c Resultado Salmonella spp., ,5 0, ,0048 0, ,00983 Suficientemente homogêneo Desta forma, consideraram-se os itens de ensaio suficientemente homogêneos para a finalidade deste Ensaio de Proficiência. 5.. Avaliação da Estabilidade de Armazenamento e de Transporte No decorrer do EP, foram avaliadas as flutuações temporais na concentração de Salmonella spp. nas temperaturas de referência (-70 o C) e de armazenamento durante o EP (-0 C) (Tabelas 3 e 4). A influência da temperatura nas condições de transporte também foi estudada por 4 dias (Tabela 5). Estas avaliações foram realizadas utilizando-se a análise de resíduos da regressão linear. Página 7 de 17

9 Tabela 3: Teste de estabilidade na temperatura de referência (-70 o C), em Log 10 UFC/g. Resultados Dias Frasco 1 Frasco A B A B Log das Médias , , , , ,83 Tabela 4: Teste de estabilidade na temperatura de armazenamento (-0 C), em Log 10 UFC/g. Resultados Dias Frasco 1 Frasco A B A B Log das Médias , , , , , , ,76 Tabela 5: Análise de regressão para os diferentes estudos de estabilidade, em Log 10 UFC/g.dias -1. Salmonella spp. Coeficiente Angular Erro padrão Intervalo de confiança Inferior Superior Resultado Referência -0, , , ,00414 Estável Armazenamento -0, , , ,01554 Estável Transporte 4 o C -0, ,0017-0, ,06478 Estável Transporte 30 o C -0,0608 0, , ,00603 Não Estável Transporte 35 o C -0, , , , Os resultados obtidos no tratamento estatístico dos dados gerados nos estudos de estabilidade de armazenamento e de transporte à 4 0 C evidenciaram que o valor do intervalo de confiança para o coeficiente angular abrange o valor zero (0). Conclui-se, portanto, que os itens de ensaio mostraram-se suficientemente estáveis nestas condições. O resultado do estudo de estabilidade de transporte à 30 0 C indica que a estabilidade à temperatura de 35 0 C é inconclusiva. Página 8 de 17

10 6. Avaliação do Desempenho dos Laboratórios Participantes 6.1. Laboratórios Participantes Vinte e oito laboratórios se inscreveram no Ensaio de Proficiência em Microbiologia de Alimentos 6ª Rodada Pesquisa de Salmonella spp. em Matriz Queijo, e todos (100 %) enviaram os resultados. Dos laboratórios que enviaram resultados, dois (7,1 %) são acreditados na norma ISO/IEC 1705 no referido ensaio e oito (8,6 %) estão em processo de acreditação neste ensaio. 6.. Resultados dos Laboratórios Participantes Os dados reportados pelos laboratórios participantes do ensaio de proficiência foram tratados de acordo com os procedimentos descritos na ISO/IEC e na ILAC G-13. A Tabela 6 apresenta os resultados dos laboratórios para as análises dos dois itens de ensaio enviado e a metodologia empregada. Página 9 de 17

11 Tabela 6: Resultados por análise e Metodologia Empregada Código dos Laboratórios Item Resultado Item Resultado Metodologia (1) MIB 06/ PRESENÇA 090 PRESENÇA BAM/FDA MIB 06/ PRESENÇA 3 PRESENÇA APHA, 001 MIB 06/06 00 PRESENÇA 1 PRESENÇA Não informado MIB 06/ PRESENÇA 06 PRESENÇA APHA MIB 06/ PRESENÇA 00 PRESENÇA BAM/FDA MIB 06/ PRESENÇA 7 PRESENÇA MMAMA, 1997 MIB 06/ PRESENÇA 19 PRESENÇA BAM/FDA, 8 th Ed. MIB 06/ PRESENÇA 03 PRESENÇA BAM/FDA, 007 MIB 06/ PRESENÇA 145 PRESENÇA BAM/FDA, 8 th Ed. MIB 06/ PRESENÇA 15 PRESENÇA Outros MIB 06/ PRESENÇA 037 PRESENÇA Não informado MIB 06/ PRESENÇA PRESENÇA APHA, 4 th Ed. MIB 06/ PRESENÇA 183 PRESENÇA APHA MIB 06/ PRESENÇA 13 PRESENÇA BAM, 001 e Easy Salmonella MIB 06/ PRESENÇA 081 PRESENÇA MMAMAA, 4 th Ed. MIB 06/ PRESENÇA 10 PRESENÇA APHA, 001 MIB 06/ PRESENÇA 174 PRESENÇA APHA, 3 rd Ed. MIB 06/ PRESENÇA 077 PRESENÇA APHA, 4 th Ed., 001 MIB 06/ PRESENÇA 065 PRESENÇA APHA, 001 MIB 06/ PRESENÇA 190 PRESENÇA MMAMA, 4 th Ed., 010 e Manual EMBRAPA 1995 MIB 06/ PRESENÇA 198 PRESENÇA ISO 6579:00 MIB 06/3 163 PRESENÇA 1 PRESENÇA APHA, 001 MIB 06/ PRESENÇA 181 PRESENÇA Não informado MIB 06/59 00 PRESENÇA 176 PRESENÇA APHA, 001 MIB 06/ PRESENÇA 040 PRESENÇA BAM/FDA e ISO MIB 06/ PRESENÇA 9 AUSÊNCIA APHA, 5 th Ed. MIB 06/ PRESENÇA 19 PRESENÇA Outros MIB 06/ PRESENÇA 05 PRESENÇA AOAC 006 e APHA (1) BAM/FDA Bacteriological Analytical Manual-FDA MMAMAA da silva, N.; Junqueira, V. C. A.; Silveira, N. F.A.; Manual de Métodos de Análise Microbiológica de Alimentos e Água APHA AMERICAM PUBLIC HEALTH ASSOCIATION - Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods () Outros: ABNT MLG 4.05 Página 10 de 17

12 A Tabela 7 apresenta os resultados dos laboratórios para a análise de cada item de ensaio recebido, bem como os resultados relatados e o resultado final. Tabela 7: Resultados relatados pelos laboratórios, resultados esperados e resultado final Laboratório Item de Ensaio Resultado Relatado Resultado Esperado Resultado Final MIB 06/011 MIB 06/04 MIB 06/06 MIB 06/038 MIB 06/039 MIB 06/061 MIB 06/087 MIB 06/094 MIB 06/117 MIB 06/15 MIB 06/18 MIB 06/130 MIB 06/133 MIB 06/135 MIB 06/137 MIB 06/140 MIB 06/18 MIB 06/189 MIB 06/193 MIB 06/197 MIB 06/11 MIB 06/3 MIB 06/ PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 090 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 171 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 3 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 00 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 1 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 03 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 06 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 147 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 00 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 169 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 7 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 049 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 19 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 007 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 03 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 061 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 145 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 019 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 15 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 001 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 037 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 161 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 164 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 183 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 108 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 13 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 050 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 081 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 078 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 10 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 070 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 174 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 045 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 077 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 05 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 065 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 048 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 190 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 041 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 198 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 163 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 1 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 069 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 181 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO Página 11 de 17

13 Tabela 7: Resultados relatados pelos laboratórios, resultados esperados e resultado final (Continuação) Laboratório Item de Ensaio Resultado Relatado Resultado Esperado Resultado Final MIB 06/59 MIB 06/61 MIB 06/65 MIB 06/83 MIB 06/99 00 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 176 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 003 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 040 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 148 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 9 AUSÊNCIA PRESENÇA FALSO NEGATIVO 177 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 19 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 154 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 05 PRESENÇA PRESENÇA POSITIVO 6.3. Avaliação dos Laboratórios Participantes A avaliação de desempenho dos laboratórios participantes, expressa através da exatidão, está apresentada na Tabela 8. Tabela 8: Valores de exatidão (%) e resultado do laboratório. Cód. do Laboratório Exatidão Resultado MIB 06/ Satisfatório MIB 06/ Satisfatório MIB 06/ Satisfatório MIB 06/ Satisfatório MIB 06/ Satisfatório MIB 06/ Satisfatório MIB 06/ Satisfatório MIB 06/ Satisfatório MIB 06/ Satisfatório MIB 06/ Satisfatório MIB 06/ Satisfatório MIB 06/ Satisfatório MIB 06/ Satisfatório MIB 06/ Satisfatório MIB 06/ Satisfatório MIB 06/ Satisfatório MIB 06/ Satisfatório MIB 06/ Satisfatório MIB 06/ Satisfatório MIB 06/ Satisfatório MIB 06/ Satisfatório MIB 06/3 100 Satisfatório MIB 06/ Satisfatório MIB 06/ Satisfatório MIB 06/ Satisfatório MIB 06/65 50 Insatisfatório MIB 06/ Satisfatório MIB 06/ Satisfatório Página 1 de 17

14 Assim, de acordo com os resultados obtidos, vinte e sete dos vinte e oito laboratórios participantes obtiveram resultados satisfatórios (96,4%) e somente um laboratório apresentou resultado insatisfatórios (3,6%). Apenas o laboratório MIB 06/193 informou que mesmo após o tempo de homogeinização mecânica as amostras ainda apresentaram alguns grumos. A metodologia mais utilizada foi a da Americam Public Health Association, utilizada por onze laboratórios. Lembramos que o Ensaio de Proficiência é apenas um indicativo do desempenho do laboratório, cabendo a cada laboratório participante fazer a sua interpretação e implementar as ações corretivas, caso necessário. 7. Conclusões A análise criteriosa dos dados gerados neste EP sugere: Desempenho dos laboratórios: pode-se considerar excelente, visto que apenas um laboratório apresentou resultado Falso Negativo; Preenchimento do formulário: Quase todos os laboratórios preencheram o formulário conforme estabelecido; Ações corretivas: Para os laboratórios que obtiveram resultados insatisfatórios, ações corretivas devem ser adotadas para o aprimoramento das suas medições, particularmente quando resultados insatisfatórios foram também obtidos em rodada anterior desse EP. Uma avaliação detalhada, desde o recebimento do material e seu armazenamento, até o preenchimento do Formulário para Registro dos Resultados, e a avaliação de todos os passos da metodologia de análise, serão importantes para a identificação dos pontos críticos. Finalmente, é importante ressaltar que o estabelecimento de ações corretivas e a contínua participação em ensaios de proficiência desta natureza são ferramentas de grande contribuição para o aprimoramento das medições realizadas pelos laboratórios. 8. Confidencialidade Os resultados deste Ensaio de Proficiência são confidenciais, isto é, cada laboratório é identificado por código individual que é conhecido apenas por ele e pela Coordenação deste Ensaio de Proficiência. Os resultados poderão ser utilizados em trabalhos e publicações pelo INCQS respeitando-se a confidencialidade dos laboratórios Página 13 de 17

15 9. Referências Bibliográficas ABNT ISO/IEC Requisitos Gerais para a Competência de Laboratórios de Ensaio e Calibração, 005. Andrews, W. H.; Jacobson, A.; Hammack, T. S. Salmonella. In: Bacteriological analytical manual online, Charper 5. [S.l]; FDA Chui, Q. S. H.; Bispo, J. M. de A.; Iamashita, C. O.; O papel dos programas interlaboratoriais para a qualidade dos resultados analíticos. Química Nova, Vol. 7 (06), , 004. D Aoust, J. Y.; Mauer, J. Salmonella spp. In: Doyle, M.P.; Beuchat, L. R. Food Microbiology Fundamentals and Frontiers. 3 rd ed. ASM Press, 007. Forsythe, S J. Microbiologia da Segurança Alimentar. Porto Alegre: Artemed Editora, 00. Instituto Nacional de Metrologia, Normalização e Qualidade Industrial. Vocabulário Internacional de Metrologia: Conceitos Fundamentais e Gerais e Termos Associados (VIM 008). Rio de Janeiro, 008. International Laboratory Accreditation Cooperation- ILAC G13.Guidelines for the requirements for the competence of providers of proficiency testing schemes, 007 International Organization for Standardization ISO/IEC Conformity assessment General requirement for proficiency testing. Geneva, 010. International Organization for Standardization ISO GUIDE 35 - Reference materials General and statistical principles for certification. Geneva, 006 International Organization for Standardization ISO Statistical methods for use in proficiency testing by interlaboratory comparisons Lamberty, A.; Schimmel, H.; Pauwels, J. The study of the stability of reference materials by isochronous measurements. Fresenius Journal Analytical Chemistry, Vol.360, , Newll, D. G.; Koopmans, M.; Verhoef, L.; Duizer, E.; Aidara-Kane, A.; Sprong, H.; Opsteegh, M.; Langelaar, M.; Threfall, J.; Scheutz, F.; Giessen, J.; Kruse, H. Food-borne diseases The challenges of 0 years ago still persist while new ones continue to emerge. Int J of Food Micriobiol. 139: S13-S Rosas, C. O.; Brandão, M. R. L.; Bricio, S. M. L.; Medeiros, V. M.; Bernardo, S. P. C.; de la Cruz, M. H. C.; Cardarelli-Leite, P. Desenvolvimento de Material de Referência em Microbiologia de Alimentos. Rev. Inst. Adolfo Lutz. Vol.69, 151, 010. The International Harmonized Protocol for the Proficiency Testing of Analytical Chemistry Laboratories.Pure Appl. Chem., Vol. 78, N o. 1, pp , 006. Página 14 de 17

16 10. Laboratórios Participantes A lista dos laboratórios que enviaram os resultados à coordenação do Programa é apresentada na Tabela 9. Tabela 9: Laboratórios participantes do Ensaio de Proficiência em Microbiologia de Alimentos 6ª Rodada Pesquisa de Salmonella spp. em Matriz Queijo. Instituição Centro de Laboratório Regional - IAL Campinas Instituto Adolfo Lutz Centro de Laboratório Regional - Instituto Adolfo Lutz - Santo André VIII - Instituto Adolfo Lutz LACEN - SP Gerência de Análise e Controle de Produtos - LACEN TO Gerência de Produtos / LACEN / AM Laboratório Central do Amazonas Grupo Mattos e Mattos Laboratório de Alimentos e Asses. M. Mattos Ltda Laboratório Central de Saúde Pública de Alagoas - LACEN AL - Laboratório Central de Saúde Pública de Alagoas LACEN- AL AL/Secretaria de Estado da Saúde de Alagoas Laboratório Central de Saúde Pública Drª Telma Lobo - LACEN /PB Secretaria Estadual de Saúde da Paraíba Laboratório de Controle de Produtos Superintendência de Vigilância e Fiscalização Sanitária em Zoonoses Laboratório de Controle de Qualidade em Saúde Prefeitura do Município de São Paulo Secretaria Municipal Saúde Coordenação de Vigilância em Saúde (COVISA) Laboratório de Microbiologia Alimentar Instituto Adolfo Lutz Centro de Laboratório Regional de Santos Laboratório de Microbiologia de Alimentos - Laboratório Central de Saúde Pública do DF Laboratório de Microbiologia de Alimentos - Laboratório Central de Saúde Pública de Rondônia - LACEN RO Laboratório de Microbiologia de Alimentos Laboratório Central de Saúde Pública Estadual - LACEN MS Laboratório de Microbiologia de Alimentos Laboratório Central de Saúde Pública Prof. Gonçalo Moniz LACEN BA Laboratório de Microbiologia de Alimentos LACEN - RR Laboratório de Microbiologia de Produtos - Divisão de Produtos - LACEN /AC - LACEN AC Laboratório de Microbiologia de Produtos / Serviço de Microbiologia /DIVISA/IOM/FUNED Fundação Ezequiel Dias Laboratório de Microbiologia de Produtos e Ambiente Laboratório Central Dr. Almino Fernandes - LACEN RN Laboratório de Saúde Pública Dr. Jefferson Ignácio de Araújo - PREFEITURA MUNICIPAL DE GUARULHOS Laboratório de Saúde Pública Dr.Giovanni Cysneiros Secretaria de Estado da Saúde/GO Laboratório Nacional Agropecuário Lanagro MG Microbiologia de Água e Alimentos - LACEN CE Microbiologia de Alimentos - Laboratório Central do Estado do Paraná Microbiologia de Alimentos da Gerência de Controle Sanitário e Ambiental Laboratório Central Noel Nutels Núcleo de Ciências Químicas e Bromatológicas - Laboratório de Microbiologia de Alimentos Centro de Laboratório Regional Instituto Adolfo Lutz de Ribeirão Preto VI Núcleo de Microbiologia - Instituto Adolfo Lutz Seção de Microbiologia de Águas e Alimentos Laboratório Central do Estado do RS/IPB - LACEN - FEPPS Setor de Microbiologia de Alimentos Laboratório Central do Estado do Pará Total de participantes: 8 laboratórios O código de cada participante não está associado à ordem da lista de participantes. Página 15 de 17

17 Anexo A Homogeneidade Segundo o Protocolo Harmonizado Foram retirados aleatoriamente vinte e quatro itens de ensaio; após a reconstituição e homogeneização do liófilo, duas alíquotas foram transferidas para placas de Petri estéreis. As placas foram analisadas em ordem aleatória e sob condições de repetitividade através de um método apropriado. Para verificar a ocorrência de problemas estatísticos, os dados foram dispostos num gráfico simples de resultados x número de amostra e analisados visualmente em busca de características usuais em diagnóstico, tais como: (a) tendências ou descontinuidades; (b) distribuição não-aleatória de diferenças entre o primeiro e segundo resultado de ensaio; (c) arredondamento excessivo; e (d) resultados dispersos intra-amostras. Como não foi verificado nenhum problema estatístico, os dados foram usados para estimar as variâncias analíticas e amostral conforme descrito abaixo: Valores Dispersos Primeiramente foi aplicado o teste de Cochran aos resultados, com o propósito de eliminar possíveis valores dispersos. Assim, calculou-se a soma, S i, e a diferença, D i, de cada par de resultados, para i = 1 até 10. Calculou-se a soma dos quadrados S DD das m diferenças a partir da Equação 1: S DD D i A estatística do teste de Cochran (Equação ) é a razão entre quadrado, e a soma dos quadrados das diferenças: (1) D max, a maior diferença ao D C S Foi calculada a razão acima e comparada com o valor crítico apropriados da tabela de teste de Cochran para um nível de confiança de 95 %. max DD () Não-homogeneidade significativa A mesma soma dos quadrados das diferenças (Equação 4) foi utilizada para calcular a variância analítica, s an, Equação 3. s an D / m MS (3) w i Página 16 de 17

18 Onde D i é a diferença de cada par de resultados do teste de homogeneidade e m é o número de recipientes selecionados para o teste de homogeneidade. A seguir, calculou-se a variância V S das somas S i de acordo com a Equação 4: Onde s é a média de S i. vs MSB (si s) /(m 1) (4) Calculou-se a variância amostral, s, de acordo com a Equação 5 sam s sam (MS MS )/ (5) B w Calculou-se a variância amostral aceitável, para avaliação da homogeneidade. all, como all ( 0,3 p) onde p é o desvio padrão Xm -1; 0,95 Tomando-se os valores de F 1 e F, onde F1 e F (m 1) crítico de homogeneidade para o ensaio como (Equação 6): (F m-1;m; 0,95 1), calculou-se o valor Como s sam 1 all F san c F (6) < c, não há evidência de que o desvio-padrão amostral na população de amostras ultrapassa a fração aceitável do desvio-padrão alvo. Página 17 de 17

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