RELATÓRIO TÉCNICO-CIENTÍFICO FINAL (Observação: as informações prestadas neste relatório poderão, no todo ou em parte, ser publicadas pela FAPESC.

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1 RELATÓRIO TÉCNICO-CIENTÍFICO FINAL (Observação: as informações prestadas neste relatório poderão, no todo ou em parte, ser publicadas pela FAPESC.) Chamada Pública Universal 03/ N do Contrato: n 12284/ IDENTIFICAÇÃO DO PROJETO 1.2. Título do Projeto: Ferramentas moleculares para o estudo da infecção de Litopenaeus vannamei (CRUSTACEA: DECAPODA) pelo vírus da síndrome da mancha branca (WSSV) Grande Área do Conhecimento (usar a nomenclatura do CNPq): Ciências Biológicas, Biologia Molecular 1.4. Coordenador(a) do Projeto: Maria Risoleta Freire Marques 1.5. Localização do projeto (Cidade/Região/SDR): Grande Florianópolis, SC - 18º SDR Instituição: Universidade Federal de Santa Catarina - UFSC Valor total do projeto (incluindo todos os intervenientes): R$ Participação da FAPESC: R$ ,00 Custeio : R$ 8.599,00 Capital: R$ 3.400, Outras instituições participantes (nomear): 1.7. Início do Projeto: 29 / 08 / 2007 Término: 31 / 12 / Equipe Executora (Nome, Titulação, Instituição e Função no projeto) Maria Risoleta Freire Marques; Doutorado; Universidade Federal de Santa Catarina; Coordenadora. Aimê Raquel Magenta Magalhães; Doutorado; Universidade Federal de Santa Catarina; Participante. Talita Medeiros de Souza; Bacharel em Ciências Biológicas; Mestranda pelo PPG em Aqüicultura (durante a vigência do projeto); Universidade Federal de Santa Catarina; Participante.

2 2 DESCRIÇÃO DA PESQUISA, RESULTADOS E IMPACTOS 2.1 Resumo da pesquisa (até 500 palavras, espaço simples, fonte times new roman, tamanho 10) Dentre os diferentes agentes etiológicos casadores de enfermidades em camarões, destaca-se o vírus da Síndrome da Mancha Branca (White Spot Syndrome Virus - WSSV), cuja presença tem sido registrada em diferentes países. Em Santa Catarina, a ocorrência da Síndrome da Mancha Branca, relatada em 2005, teve impaco signifiativo sobre os mais de empregos diretos gerados na carcinicultura local, com o conseqüente empobrecimento das regiões litorâneas envolvidas na atividade. A infecção pelo WSSV é caracterizada por uma mortalidade alta e rápida, acompanhada da presença de manchas bancas, inicialmnte, circulares, na cutícula, as quais são algumas vezes acompanhadas de uma coloração avermelhada no corpo dos animals. O progresso da doença é marcado pela ausência de consumo de alimento e pelo aparecimento de animais morimbundos, nadando próximos à superfície dos tanques. Entretanto, o aparecimento das manchas brancas na cutícula não é considerado como uma observação confiável, particularmente em se tratando do diagnóstico precoce da doença. Essa ressalva tem relação com o fato de que o aparecimento de manchas brancas na cutícula, de aspecto semelhante ao descrito acima, pode ser registrado, ainda, em função de determinadas condições ambientais, como a alcalinidade, por exemplo, tendo sido ainda descrito como parte dos sinais clínico presentes em uma infecção de origem bacteriana, denominada de Síndrome da Mancha Branca Bacteriana, a qual foi relatada recentemente por WANG et al. (2002). O estudo realizado teve por objetivo desenvolver, padronizar e implementar diferentes estratégias moleculares para a detecção e a avaliação da infecção de camarões pelo WSSV, como a hibridização in situ (ISH). Desta forma, outras ferramentas moleculares de detecção e estudo do WSSV, associadas às já amplamente utilizadas, como a PCR, podem contribuir para a seleção de matrizes, para avaliar a qualidade das pós-larvas (PLs) produzidas, bem como para um acompanhamento eficaz do estado sanitário dos animais nas fazendas de culivo. O emprego de outros métodos de detecção do vírus tem sido recomendado, recentemente, não só como ferramenta auxiliar e confirmatória de diagnóstico, mas ainda como estratégia importante para a investigação do processo infeccioso, o que pode vir a fornecer subsídios para a obtenção de animais menos susceptíveis. Além disso, seu emprego possibilita o acompanhamento de experimentos piloto, visando estabelecer a influência de diferentes variáveis ambientais e de técnicas de manejo na susceptibilidade dos animais à infecção. Cabe salientar, ainda, que as diferentes estratégias moleculares padronizadas no presente projeto, visando a detecção e o estudo da infecção pelo WSSV, poderão ser aplicadas futuramente para outros vírus patogênicos, tanto para o L. vannamei, como para outros camarões peneídeos e crustáceos Caracterização da Pesquisa: PESQUISA BÁSICA (PB): PB visando o avanço do conhecimento sobre o tema em estudo ( x ) PB para avançar conhecimento, com potencial de aplicação tecnológica ( x ) PB para o avanço do conhecimento, com potencial para contribuir em políticas públicas ( x ) PB visando avançar o conhecimento, com potencial de aplicação pública ou privada ( ) PESQUISA TECNOLÓGICA ( ) PESQUISA EM POLÍTICAS PÚBLICAS ( ) PESQUISA TECNOLÓGICA E POLÍTICAS PÚBLICAS ( )

3 2.3. Síntese de resultados e impactos da pesquisa - cumprimento dos objetivos; impactos dos resultados da pesquisa: avanço do conhecimento; inovação tecnológica; benefícios sociais, econômicos, ambientais, culturais e regionais, efetivos ou esperados; contribuição à formulação de políticas públicas; outros impactos ou efeitos observados ou potenciais (até 500 palavras, espaço simples, fonte times new roman, tamanho 10) Ao longo do desenvolvimento do projeto, foi possível atingir os objetivos propostos, sendo os principais: 1- padronização de procedimentos de coleta e de processamento de espécimes de camarão (Litopenaeus vannamei) para a realização de análises histológicas; 2- padronização, utilização e validação do método de hibridização in situ (ISH) para o diagnóstico da síndrome da mancha branca (WSS); 3- diagnóstico comparativo da WSS em animais sintomáticos e assintomáticos, utilizando análises histológicas, ISH e a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Além disso, foram realizadas análises destas mesmas amostras (objetivo 3) através de PCR em tempo real (qpcr), o que não estava previsto no projeto original. A inclusão desta metodologia permitiu que a análise comparativa inicialmente pretendida pudesse ser ampliada, sendo os resultados obtidos agregados ao presente projeto, como um objetivo adicional. A incorporação destas análises por qpcr foi viabilizada como decorrência da aquisição do termociclador apropriado, a qual foi possível através de recursos vinculados a um projeto de pesquisa aprovado junto à Secretaria Especial de Pesca SEAP, durante a vigência do projeto objeto do presente relatório. As metodologias moleculares padronizadas também representam uma ferramenta importante para o escopo do diagnóstico de outras viroses, uma vez que poderão, com as adaptações e modificações adequadas, ser aplicadas para a detecção e o monitoramento de outros vírus, o que é de importância significativa para o estabelecimento do estado sanitário adequado da carcinicultura em Santa Catarina dentro de um caráter preventivo e ativo. Os resultados obtidos permitiram realizar uma análise comparativa, em termos dos níveis de sensibilidade de detecção entre os métodos moleculares de diagnóstico empregados, bem como de suas limitações, dentro das condições locais, particularmente no caso de animais assintomáticos e/ou com uma baixa carga viral. Este conhecimento tem relevância no caso do acompanhamento de animais no campo, bem como na seleção de reprodutores, visando à certificação tanto de propriedades e cultivos, como de estabelecimentos de produção de pós-larvas. Este conhecimento contribui ainda para o delineamento de estratégias sanitárias e de decisões comerciais nos empreendimentos, visando a qualidade do produto e estratégias mais eficientes de despesca, entre outras. Cabe salientar ainda que a realização do projeto esteve associada à formação de recursos humanos em nível de graduação e pós-graduação, destacando-se a defesa de uma dissertação de Mestrado, junto ao Programa de Pós-Graduação em Aqüicultura da UFSC. 3. DETALHAMENTO TÉCNICO 3.1. Data: 01/ 04 / 2009 Prestação de contas financeira: ( x ) Finalizada ( ) Em atraso 3.2. Avaliação (feita pelo(a) coordenador(a) da pesquisa):

4 A) O Projeto se desenvolveu segundo a proposta originalmente definida? ( X ) Sim ( ) Não Se houve mudanças significativas, elas foram especificadas e justificadas? ( ) Sim ( ) Não Houve solicitação de alteração de rubrica (custeio/capital)? ( ) Sim ( X ) Não Descrever as alterações: sem alterações B) Equipamentos adquiridos, quando for o caso: Banho seco de temperatura regulável, contendo dois blocos intercambiáveis: um para incubação de tubos de tubos tipo eppendorf ( volume de 1,5 ml) e outro para incubação de lâminas histológicas. C) Problemas ou dificuldades na execução do projeto, quando houver: D) Objetivos e metas previstas foram atingidas? ( X ) Totalmente ( ) Parcialmente Comentar: Os objetivos e metas previstas foram atingidos integralmente com o desenvolvimento do projeto. O escopo de estratégias moleculares para o diagnóstico, monitoramento e estudo de enfermidades de etiologia viral em crustáceos empregadas pelo nosso grupo foi ampliado de forma significativa, abrindo ampliando e abrindo perspectivas para estudos em andamento e ainda para novos projetos relacionados a este tema.

5 E) Disseminação do conhecimento e produção gerada pela pesquisa: - Artigos publicados ou encaminhados (quantidade): 01 artigo (em fase final de redação para ser submetido para publicação em periódico indexado: Journal of Virolgy Methods) - Dissertações ou teses originadas ou incorporadas: 01 dissertação de Mestrado. - Participação em Congressos, Simpósios ou Seminários: 02 Congressos, com apresentação de trabalho. Descrever a produção e sua repercussão: - Dissertação de Mestrado: Aluna: Talita Medeiros de Souza Programa: Programa de PG em Aqüicultura UFSC Defesa: 19 de dezembro de 2008 Banca: Maria Risoleta F. Marques, Dra., UFSC, orientadora Luis Alberto Romano, Dr., Centro de Patologia Acuatica - CPA, Argentina Eduardo Cargnin Ferreira, Dr., UFSC. - Congressos: a- XXXVII Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Bioquímica e Biologia Molecular SBBq e XI Congresso da Associação Pan-Americana de Bioquimica e Biologia Molecular PABMB. 17 a 20 de maio de Águas de Lindóia, SP. de Souza, T.M.; Muller, I.C.; Marques, M. R. F. White spot syndrome vírus (WSSV) in a shrimp farm in Northern Santa Catarina: clinical signs versus molecular diagnostic. (H-46) b- X Encontro Brasileiro de Patologistas de Organismos Aquáticos ENBRAPOA. 17 a 21 de novembro de De Souza, T. M.; Muller, I. C.; Marques, M. R. F. Avaliacao temporal do vírus da mancha branca em Litopenaeus vannamei por PCR nested e PCR em tempo real. (PT-026).

6 F) Principais benefícios efetivos ou potenciais para a sociedade em decorrência da pesquisa, entre os seguintes aspectos, no que couber: ( x ) Incremento da renda familiar ( ) Melhoria da saúde ( x ) Aumento da ocupação/emprego ( ) Melhoria do saneamento ( ) Redução da jornada de trabalho ( ) Melhoria da moradia ( ) Melhoria do sist. de transporte ( ) Melhoria da alimentação ( ) Melhoria do sist. de comunicação ( ) Alternativa econômica/renda ( ) Melhoria do fornec. de energia ( ) Melhoria da organização social ( ) Aquisição de bens duráveis ( ) Melhoria na educação ( ) Satisfação do beneficiado ( x ) Avanço do conhecimento científico ( ) Melhoria do Meio Ambiente ( ) Inovação tecnológica ( x ) Diretrizes para Políticas Públicas ( ) Melhoria em Sistema de Gestão ( ) Avaliação de Políticas Públicas ( ) Regulação setorial ( ) Avaliação da Tecnologia no setor ( ) Avaliação de condições Socioeconômicas ( x ) Contribuição ao Desenvolvimento Regional ( ) Contribuição à inserção social ( ) Possibilidade de obter patente ( ) Redução da desigualdade social ( x ) Agregação de valor a produtos ( ) Redução de consumo de energias ( ) Redução de resíduos Descrever os benefícios assinalados: Florianópolis, SC, 01 de abril de Assinatura do(a) Beneficiário(a) 4. VERIFICAÇÃO TÉCNICA DO PROJETO (campo da FAPESC) 4.1 Mediante as informações apresentadas pelo(a) coordenador(a) do projeto no presente relatório, verifica-se que os objetivos, metas e resultados previstos foram: ( ) Plenamente atingidos ( ) Parcialmente atingidos ( ) Não foram atingidos

7 4.2 Recomendações e encaminhamentos: Florianópolis, SC, de de. Assinatura da FAPESC