BREVE COMUNICAÇÃO ISSN 22381589 Triagem de em Fezes de Roedores de Laboratório Através da Técnica de PCR Milena Coutinho da Motta 1 Jussimara FélixSartoreli 1 Marilda Osti Spinelli 1 Cyntia Marques dos Santos Corrêa de Godoy 1 Robison José da Cruz 1 Juliana Bortolatto 1 1 Diretoria Técnica de Apoio ao Ensino e à Pesquisa da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo Autor para correspondência: Milena Coutinho da Motta Email: milena@biot.fm.usp.br Recebido para publicação: 09/09/2011 Aceito para publicação: 18/12/2011 Este trabalho tem como objetivo otimizar a triagem da bactéria em programa de controle sanitário de animais de laboratório aplicando a técnica de PCR (Polymerase Chain Reaction). Cinquenta amostras de fezes de cada linhagem ou espécie: camundongo C57BL/6 BALB/c Swiss; ratos Wistar e Hamster foram submetidas à reação de PCR utilizando os oligonucleotídeos iniciadores F: 5 CTATGACGGGTApb. Separados por eletroforese em gel de agarose os produtos foram visualizados e fotodocumentados sob luz ultravioleta.a técnica de PCR possibilitou a detecção de camundongos positivos sendo 18% da linhagem C57BL/6 52% da linhagem BALB/c 62% da linhagem Swiss. Em ratos da linhagem Wistar foram detectados 28% de positi RESUMO º em colônias de animais de laboratório. Palavraschave: Camundongos. Ratos. Hamsters. PCR.. 1 Introdução O gênero compreende mais de trinta espécies de bactérias gram negativas mi ros 12 cies de estão associadas a doenças 3. 36. gos hepaticus e bilis bilis muridarium H. cinaedi e espécies do H.rappini 67. Em ratos as principais espécies associadas são H. troglontum H. muridarum H. hepaticus H. bilis H. cholecystus e H. cienaedi 810. RESBCAL São Paulo v.1 n.1 p. 97101 jan./fev./mar. 2012 97
Triagem de em Fezes de Roedores de Laboratório Através da Técnica de PCR 13 11 8 12 necessitando de 2 para o programa. 2 material e método de animais positivos para detec º 2 3 resultados 98 RESBCAL São Paulo v.1 n.1 p. 97101 jan./fev./mar. 2012
Milena Coutinho da Motta Jussimara FélixSartoreli Marilda Osti Spinelli Cyntia Marques dos Santos Corrêa de Godoy Robison José da Cruz Juliana Bortolatto Figura 1 Expressão de em diferentes linhagens de camundongos ratos e hamsters analisados por PCR. O DNA foi extraído das fezes Canaleta 1 marcador de peso molecular 100 pb; 2 Controle positivo; 3 Controle negativo; 5 Amostra positiva de camundongo BALB/c; 6 Amostra positiva de camundongo Swiss; 7 Amostra positiva de Rato Wistar; 8 Amostra positiva de hamster Golden maioria das bactérias do gênero em 6. A técnica empre As bactérias do gênero apreres convencionais 6 cionais. detectaram 4 discussão ratos convencionais. tes métodos de detecção 12 a reação em cadeia de de bactérias do gênero através de murino Tabela 1 Número de animais positivos e porcentagens sobre o total analisado Espécie Camundongos Rato Hamster Linhagem C57BL/6 BALB/c Swiss Wistar Golden Positivos/Total de animais 19/50 26/50 31/50 22/50 % positivos 18% 52% 62% 28% RESBCAL São Paulo v.1 n.1 p. 97101 jan./fev./mar. 2012 99
Triagem de em Fezes de Roedores de Laboratório Através da Técnica de PCR. nero para a extração de DNA na detecção de 12. 5 conclusão knockouts o diagnóstico de bactérias e parasitas. Screening for inrodent feces Laboratory using PCR technique ABSTRACT This work aimed to optimize the screening of the bacterium in sanitary control program of laboratory animals using the PCR (Polymerase Chain Reaction). Fifty stool samples from each strain or : C57BL/6 BALB/c Swiss Hamster and Wistar rats were subjected to PCR using the primers F: 5 CTATGACGGGTATCCGGC by agarose gel electrophoresis products were visualized and photographed under ultraviolet light. The PCR technique allowed the detection of positive mice 18% of C57BL/6 52% of the strain BALB/c 62% of Swiss strain. In Wistar rats were detected was effective in screening for in colonies of laboratory animals. Certi Nº 251. Keywords: Mice. Rats. Hamsters. PCR.. 100 RESBCAL São Paulo v.1 n.1 p. 97101 jan./fev./mar. 2012
hepaticus REFERêNCias Milena Coutinho da Motta Jussimara FélixSartoreli Marilda Osti Spinelli Cyntia Marques dos Santos Corrêa de Godoy Robison José da Cruz Juliana Bortolatto Deeny AA p. 2213. by 27383. Kim D bilis RESBCAL São Paulo v.1 n.1 p. 97101 jan./fev./mar. 2012 101