Profa. Leila Larisa Medeiros Marques

Transcrição

1 Profa. Leila Larisa Medeiros Marques

2 Processo de fazer cópias exatas de um organismo ou de qualquer elemento.» Clonagem celular;» Clonagem molecular.

3 Clonagem celular Vitória em 2011:

4 Clonagem celular

5 Clonagem celular

6 » Surgiu a Dolly, que teve seu nascimento anunciado em 1997, tornando-se um marco na Era Biotecnológica.

7 » A ovelha Dolly só nasceu depois de 276 tentativas que fracassaram. A equipe retirou uma célula embrionária normal de uma ovelha e removeu seu núcleo. Depois, retiraram o núcleo de uma célula da glândula mamária de outra ovelha e usaram corrente elétrica para fundi-la com a célula enucleada. Além disso, dentre as 277 células da mãe de Dolly que foram inseridas em um óvulo sem núcleo, 90% não alcançaram nem o estágio de blastocisto. De todos os outros embriões que conseguiram se dividir e ser implantados, apenas Dolly nasceu.

8 Clonagem celular

9 celular A ovelha Dolly foi sacrificada no Instituto Roslin, na Escócia (14/02/2003), após ser diagnosticada com uma doença pulmonar progressiva comum em animais mais velhos. A hipótese que tem sido discutida é que essa doença, comum em animais mais velhos, poderia estar associada ao encurtamento dos telômeros (seqüências de DNA que ficam na ponta dos cromossomos).

10 » O maior feito dos cientistas, foi fazer com que uma célula adulta se tornasse totipotente (células-tronco) de novo. As células-tronco (ou totipotentes) possuem a capacidade de se diferenciarem em diferentes tipos de célula;» Estava aberto o caminho para a clonagem terapêutica e a terapia por células-tronco.

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13 » Utilização da técnica de clonagem para obtenção de células tronco a fim de restaurar a função de um órgãos ou tecido;» A clonagem "terapêutica" teria a vantagem de não oferecer riscos de rejeição se o doador fosse a própria pessoa. (ex.: reconstituir a medula em alguém que se tornou paraplégico após acidente);» Ajudaria casais inférteis que não podem ter filhos, mesmo após anos de tratamento de infertilidade;» Melhoramento animal, resgate de material genético, maximização do potencial genético de uma raça.

14 » Conceito: É a técnica que fabrica embriões a partir da transferência do núcleo da célula já diferenciada, de um adulto ou embrião, para um óvulo sem núcleo;» Não há o implante em um útero, logo não pode reproduzir seres humanos.

15 » Vantagem: Possibilita a obtenção de célulastronco embrionárias pluripotentes, potencialmente capazes de produzir qualquer tecido em laboratório, o que poderá permitir o tratamento de doenças cardíacas, doenças degenerativas (Alzheimer, Parkinson), câncer, além da reconstituição de medula óssea, de tecidos queimados ou tecidos destruídos etc, sem o risco de rejeição, caso o doador seja o próprio beneficiado com a técnica.

16 » A clonagem humana no Brasil é proibida atualmente (Lei nº , de 24 de março de 2005) com pena de reclusão de dois a cinco anos e multa para quem realizá-la. Entretanto, segundo a mesma lei, é permitida, para fins de pesquisa e terapia, a utilização de célulastronco embrionárias obtidas de embriões humanos produzidos por fertilização in vitro e não utilizados no respectivo procedimento. Vale frisar que esses embriões devem estar inviáveis ou congelados há três anos ou mais.

17 Envolve a manipulação dos genes e criação de inúmeras combinações entre genes de organismos diferentes. - O melhoramento genético tradicional é imprevisível e demorado. - Através da engenharia genética consegue-se resultados mais previsíveis e em tempo bem menor.

18 resultado obtido a partir de pedaços de DNA de fontes diferentes ligados entre si. Para se conseguir DNA recombinante, é preciso cortar as moléculas de DNA que se quer recombinar e em seguida, "colar" um no outro. Para isso, os pesquisadores contam com ferramentas extremamente úteis chamadas ENZIMAS DE RESTRIÇÃO.

19 Ex. produção de um produto de interesse

20 » Expressar um gene significa produzir a proteína que ele codifica;» Para expressão de gene eucarioto em procarioto: cdna.

21 » Para começar precisamos aumentar a quantidade do gene de interesse: PCR (Polymerase Chain Reaction)» Precisamos saber: - Sua sequência de nucleotídeos; - Organismos que o contenham; - Em que tecidos é encontrado.

22 A PCR encontra sua principal aplicação em situações onde a quantidade de DNA disponível é reduzida. Uma das principais aplicações do PCR é na medicina forense, onde pequenas amostras de DNA retiradas da cena de um crime (pedaços de cabelo, gotas de sangue ou saliva, etc.) são amplificadas para serem analisadas. A PCR também é utilizada em procedimentos científicos de Biologia Molecular como amplificação para gerar mutagênese, detecção de mutações ou preparação de fragmentos de DNA para clonagem.

23 » Extrair o material genético da célula sem danificá-lo;» Adicionar uma mistura (também conhecida como prémix) que contém os dntps (desoxirribonucleotídeos trifosfatos), que são as bases nitrogenadas ligadas com um fosfato. Os primers também chamados de oligonucleotídeos (ou iniciadores) e a enzima taq polimerase em uma solução tampão;» Toda esta mistura é colocada na máquina de PCR, o termociclador, que faz ciclos de temperatura préestabelecidos com tempos exatos.

24 RT-PCR» Fase de desnaturação (94-96 o C): fase onde ocorre o desenrolamento da fita dupla de DNA através da quebra das pontes de H entre as bases, dando origem a duas fitas simples de DNA;» Fase de hibridização ou anelamento (50-54 o C): nesta fase os primers se ligam, especificamente, às suas sequências homólogas correspondentes no DNA;» Fase de extensão do DNA (72-76 o C): fase onde ocorre a síntese de uma nova fita antiparalela sobre a fita anteriormente desnaturada, reação esta catalisada pela taq-polimerase.» Após 30 ciclos: 1 fragmento de DNA de cópias Rotina da PCR no lab

25 Estudo dirigido (duplas)- preencher e entregar.

26 » O resultado da PCR é analisado através de uma eletroforese em gel de agarose ou de poliacrilamida

27 Separação de moléculas pelo tamanho e carga elétrica quando submetidas a um campo elétrico; Gel de suporte para migração: agarose ou acrilamida; Existem também suporte de papel (papel de filtro e acetato de celulose). OBS.: a fricção com o suporte que as macromoléculas experimentam é pequena, o que faz com que o tamanho da molécula não influencie profundamente a sua velocidade de migração. Sendo assim, as moléculas são preferencialmente separadas com base em suas cargas não separa bem o DNA

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30 Dinâmica: 2 grupos

31 BORÉM, A.; SANTOS, F. R. Entendendo a biotecnologia. Viçosa: UFV, Capítulo 6. Clonagem celular. SERAFINI, L. A.; BARROS, N. M.; AZEVEDO, J. L. Biotecnologia: avanços na agricultura e na agroindústria. Caxias do Sul: EDUCS, Capítulo 1. LIMA, N.; MOTA, M. Biotecnologia- Fundamentos e aplicações. Lisboa: Lidel, Capítulo VII. BORZANI, W. et al. Biotecnologia Industrial. V. 1. Fundamentos. São Paulo: Blucher, Capítulo 4. Links: PCR: Rotina da PCR: eletroforese: Clone bovino: /noticia/ /bezerra-brasilia-e-o-novo-clone-da-embrapa