Teor fenólico e atividade antioxidante da Bolota

Licenciatura em Biotecnologia Operações Unitárias em Biotecnologia Ano Letivo 2017/2018 Teor fenólico e atividade antioxidante da Bolota Docente: Inês Seabra Discentes: Alexandra Santos 20150207 Ana Raquel Cruz 20150367 Raíssa Vieira 20150217

ÍNDICE: Introdução 2 Objetivo..... 9 Materiais e Procedimento... 9 Resultados e Discussão....... 14 Conclusão....17 Bibliografia... 18 1

INTRODUÇÃO Plantas produtoras de bolotas A bolota é um fruto ou metabolito secundário produzido por árvores da família fagaceae. Esta família pode subdividir-se em varias espécies como quercus suber referente ao sobreiro (Figura 1), quercus rotundifolia que diz respeito a azinheira (Figura 2) ou o quercus robur mais conhecido por carvalho (Figura 3). FIGURA 1 SOBREIRO FIGURA 2 AZINHEIRA FIGURA 3 - CARVALHO Quercus suber Espécie (Figura 4) que se pode encontrar espalhada por todo o território nacional, tendo maior abundância na zona sul (Figura 5). É uma árvore que pode atingir até 25m de altura e viver em média 150 anos. Utilizada maioritariamente para produção de cortiça. (UTAD Jardim Botânico,2017) FIGURA 4 - CLASSIFICAÇÃO CIENTÍFICA DA QUERCUS SUBER (UTAD JARDIM BOTÃNICA,2017) FIGURA 5 - LOCALIZAÇÃO GEOGRÁFICA DA QUERCUS SUBER (UTAD JARDIM BOTÂNICO,2017) 2

Quercus rotundifólia Esta espécie (Figura 6), mais conhecida como azinheira, embora um pouco espalhada por todo o território português, é mais abundante na zona do Alentejo e Trás-os-Montes (Figura 7). (UTAD Jardim Botânico,2017) FIGURA 6 - CLASSIFICAÇÃO CIENTÍFICA DA QUERCUS ROTUNDIFOLIA (UTAD JARDIM BOTÂNICO,2017) FIGURA 7 - LOCALIZAÇÃO GEOGRÁFICA DA QUERCUS ROTUNDIFOLIA (UTAD JARDIM BOTÂNICO,2017) Esta árvore pode chegar até aos 1000 anos e o seu fruto é usado como alimento para porcos apesar de também ser comestível para os humanos podendo assar-se e comer como as castanhas. Quercus robur O carvalho-roble ou carvalho-alvarinho (Figura 8) é uma árvore que se pode encontrar mais abundantemente na zona norte (Figura 9). Esta espécie pode atingir os 45m de altura e ter uma longevidade de 1500 anos. É muito utilizado devido á madeira de alta qualidade, no entanto, relativamente ao fruto em estudo, as bolotas desta espécie são usadas como um substituto da amêndoa. FIGURA 8 - CLASSIFICAÇÃO CIENTIFICA DA QUERCUS ROBUR (UTAD JARDIM BOTÂNICO,2017) FIGURA 9 - LOCALIZAÇÃO GEOGRÁFICA DA QUERCUS SUBER (UTAD JARDIM BOTÂNICO,2017) 3

Fruto/Semente O fruto que irá ser usado ao longo deste trabalho será a bolota, neste caso mais especifico, bolotas provenientes de uma azinheira que se encontra localizada na Escola Superior Agrária de Coimbra. De entre as três espécies acima mencionadas, a azinheira é a que produz as bolotas mais doces podendo ser facilmente introduzida na nossa alimentação. Esta possui elevado poder antioxidante, sendo esta uma das razões pela qual a escolhemos para elaborar o nosso trabalho. FIGURA 10- COMPOSIÇÃO MORFOLÓGICA DOS FRUTOS DO GÉNERO QUERCUS (PACHECO,2015) A bolota ou glande é composta pelo pericarpo (casca) que é a capa externa lignificada que protege a semente (parte mais interna) que, por sua vez, é constituída pela testa, uma espécie de membrana aveludada e pelo embrião onde se acumulam as reservas energéticas (Figura 10) (PACHECO, 2015). O tamanho das bolotas maduras depende, normalmente, do número de sementes e dos recursos disponíveis. O consumo de bolotas, especialmente como farinha, remonta ao século XIV, embora, atualmente, o seu principal destino seja a alimentação de suínos. Por tratar-se de um fruto seco, botanicamente descrito como fruto de casca rija, tem níveis consideráveis de lípidos. Assim, o consumo de bolotas pode ocorrer em forma de farinha ou em óleo. A composição química da bolota (Tabela 1) inclui hidratos de carbono, lípidos, proteínas e aminoácidos resultantes do metabolismo primário do fruto e ainda substâncias de reserva e metabolitos secundários (RAKIĆ et al., 2006). 4

TABELA 1 - COMPOSIÇÃO QUÍMICA DA BOLOTA CRUA Componente Unidade Quantidade por 100g Água g 27,9 Proteína g 6,15 Gorduras totais g 23,86 Carboidratos g 40,75 Cálcio mg 41 Ferro mg 0,79 Magnésio mg 62 Fosforo mg 79 Potássio mg 539 Zinco mg 0,51 Tiamina mg 0,112 Riboflavina mg 0,118 Niacina mg 1,827 Vitamina B6 mg 0,528 Acido fólico total ug 87 Vitamina A ug 2 Gorduras saturadas g 3,102 Gorduras monoinsaturadas g 15,109 Gorduras polinsaturadas g 4,596 Colesterol mg 0 Recentemente, estudos realizados pela Escola Superior de Biotecnologia da Universidade Católica do Porto vieram comprovar o "elevado valor nutricional da bolota fresca e da respetiva farinha que, além de ser rica em fibra e proteína, perfil de lípidos semelhante ao azeite e ausência de glúten, demonstra ter um alto teor de compostos antioxidantes". Como tal foi elaborado um café à base deste fruto que, mais uma vez, demonstrou as suas propriedades antioxidantes como ainda a ausência de toxicidade. Paralelamente a estes estudos foi ainda desenvolvida uma bebida à base de bolota que veio mostrar pela primeira vez "a capacidade de promover o crescimento das bactérias benéficas presentes na flora intestina dos seres humanos" (PINTADO, 2017) Neste momento, devido a todos os benefícios que este alimento pode trazer a saúde humana, estão a ser estudados métodos de conservação da bolota. 5

Compostos Fenólicos Existem vários estudos sobre a atividade antioxidante da bolota, associada a propriedades anti mutagénica, anti carcinogénica e antienvelhecimento. Alguns desses estudos foram realizados com diferentes extratos de bolotas e demostraram uma correlação positiva entre os compostos fenólicos e a atividade antioxidante. Os compostos fenólicos são uma das cinco categorias de fitoquímicos encontrados em alimentos que podem ativar ou limitar a expressão de genes de vias que influenciam o risco de doença e produzem enzimas antioxidantes naturais. Estes componentes são responsáveis pelas funções fisiológicas, biológicas e bioquímicas, principalmente devido à sua forte atividade antioxidante, mas também como estabilizadores das membranas celulares. Além disso, estes compostos são importantes na dieta humana para manter um nível adequado de antioxidantes e para equilibrar a produção e subsequente neutralização das espécies reativas de oxigénio, de azoto e de enxofre. No entanto, está provado que o teor de compostos fenólicos do género Quercus depende da espécie, da fase de maturidade, da variação sazonal e da origem geográfica (RAKIĆ et al., 2006). O que são compostos fenólicos? Os fenóis são substâncias químicas que podem ser de origem natural ou sintética, compostas, como podemos observar na figura 10, por um ou mais grupos hidroxilo (OH) ligados a um anel aromático. A sua classificação varia conforme o número de anéis aromáticos e dos elementos estruturais que ligam estes anéis uns aos outros. FIGURA 11- ESTRUTURA GERAL DOS FENÓIS (SARAIVA,2006) Entre todos os compostos fenólicos, os que são encontrados em maior teor em grande parte das diferentes espécies de bolotas são o ácido gálico e seus derivados e o ácido elágico (pertencente á classe dos taninos). Em menor teor também se encontra outros taninos e flavonóides (RAKIĆ et al., 2006). Flavonóides Constituem o maior grupo de compostos fenólicos que advêm de alimentos de origem vegetal. A sua estrutura química (Figura 12) consiste em 2 anéis aromáticos ligados por 3 carbonos que formam um anel heterocíclico, possuem 15 átomos de carbono e são compostos de baixo peso molecular. 6

FIGURA 12- ESTRUTURA GERAL DOS FLAVONÓIDES Têm uma grande capacidade antioxidante e contribuem positivamente para a dieta humana e animal e também na prevenção de doenças cardiovasculares, neurológicas e cancerígenas (DEGÁSPARI, 2004). Taninos Compostos fenólicos distribuídos por inúmeras espécies de origem vegetal que contém um elevado número de grupos carboxilo e de grupos hidroxilo, de tal maneira, que estabelecem ligações muito fortes com proteínas e outras macromoléculas. A nível da sua estrutura podem ser divididos em: 1. Taninos hidrolisáveis ésteres de ácido gálico (Figura 13) FIGURA 13- EXEMPLOS DE ESTRUTURAS DE TANINOS HIDROLISÁVEIS 2. Taninos condensados polímeros formados pela condensação de 1 ou mais unidades de flavan-3-ol (Figura 14) FIGURA 14- ESTRUTURA GERAL DOS TANINOS CONDENSADOS 7

Os taninos, para além da sua atividade antioxidante, são também depuradores de colesterol, atuando na parede arterial, reforçando a resistência das veias. Diversos estudos relacionam o consumo de taninos à diminuição do risco de doenças cardiovascular e ao retardamento do envelhecimento celular (PACHECO, 2015). Extração Sólido-Líquido A extração sólido-líquido, também designada por lixiviação, é um processo de separação que envolve a transferência de solutos de uma matriz sólida para um solvente. É uma operação de transferência de massa que ocorre num sistema multicompetente e multifásico. As fases mais importantes que ocorrem durante este tipo de extração são: (SEABRA,2017) 1. Entrada do solvente na matriz sólida; 2. Solubilização dos compostos; 3. Transporte do soluto do interior para o exterior da matriz sólida; 4. Transporte dos compostos de superfície externa da partícula para o solvente; 5. Separação do extrato do solvente de extração. A selecção do solvente e alguns aspectos estruturais do tecido vegetal são parâmetros que influenciam o rendimento de uma extracção. Devem então, serem seguidos, alguns principios na selecção do solvente de extracção : 3. A solubilidade do composto específico, ou mistura de compostos, no solvente 4. A facilidade na remoção do solvente após a extracção 5. A tensão interfacial e viscosidade 6. Não ser tóxico, inflamável, reactivo 7. Ser estável, economicamente viável e amigo do ambiente Além disto, a distribuição incial das substâncias a estrair no interior do tecido vegetal influencia a velocidade da extracção. Compostos presentes no exterior das células, faz com que as membranas não constituem resistência à transferência de massa, sendo mais rápida a extracção (SEABRA, 2017). Também a temperatura (que influencia a solubilidade, viscosidade e volatilidade do solvente), a agitação, (que influencia o coeficiente de transferência de massa e taxa de extração sólido-líquido) podem afectar o rendimento de uma extracção (RODRIGUES,2016). 8

OBJETIVO Os objetivos da atividade experimental proposta foram a elaboração de uma extração sólido-líquido com vista à extracção de compostos fenólicos das bolotas, o estudo do efeito do solvente (mistura de H 2 O e etanol), do tempo de extração e da razão sólido:solvente (1:20 no nosso caso) no teor de fenólicos e na atividade antioxidante dos extratos obtidos. MATERIAIS E MÉTODOS Protocolo nº1- Humidade de matrizes vegetais (Método gravimétrico) Materiais: Matéria prima (bolota) triturada Placas de Petri sem tampa Espátulas Excicador Estufa Balança analítica Caneta de acetato Procedimento: 1. Triturou-se a matéria prima (bolota) recorrendo a uma trituradora; 2. As placas de Petri utilizadas foram previamente colocadas numa estufa a 103ºC, durante meia hora no mínimo e posteriormente colocadas num Excicador até que atingissem a temperatura ambiente; 3. Identificou-se as placas de Petri com uma caneta de acetato, pesou-se numa balança analítica e registou-se a sua massa; 4. Colocou-se aproximadamente 1 g de matéria-prima em cada placa de Petri e anotou-se a sua massa (massa amostra húmida); 5. Colocou-se as placas com a matéria-prima numa estufa a 103ºC; 6. Após algum tempo, retirou-se as placas e colocou-se no Excicador para arrefecerem até à temperatura ambiente e quando estas atingiram esta temperatura pesou-se. 9

Protocolo nº2- Extração sólido-líquido Materiais: Matéria-prima - bolota Manta de aquecimento Cronómetro Copos de Vidro Espátula Proveta para medição do solvente Eppendorfs e suporte para eppendorfs Tubos Caneta de acetato Balança semi-analítica Solventes: Água destilada EtOH a 25% EtOH a 50% EtOH a 75% EtOH a 100% Procedimento: Parte 1 Extração: 1. Efetuou-se o planeamento de extrações para o nosso grupo com a ajuda da professora (Tabela 2); TABELA 2- PLANEAMENTO DAS CONDIÇÕES DAS EXTRAÇÕES PARA A BOLOTA Extração Solvente Tempo(min) T(ºC) Razão sólido: solvente Massa da matéria prima(g) 1 H2O 30 60 1:20 1 2 EtOH 25% 30 60 1:20 1 3 EtOH 50% 30 60 1:20 1 4 EtOH 75% 30 60 1:20 1 5 EtOH 100% 30 60 1:20 1 6 EtOH 50% 15 60 1:20 1 2. Realizou-se então no total 6 extrações, todas em copos de vidro colocados em banho maria. Colocou-se 1g de matéria-prima com as diferentes razões de solvente apresentadas na tabela acima em cada copo e transferiu-se as soluções por decantação para 6 tubos diferentes previamente marcados. 10

Parte 2 - Determinação do rendimento da extração: 1. Mediu-se o volume de extrato colocando um tubo igual ao lado do tubo com o extrato e enchendo-o com água até ao mesmo nível. Posteriormente colocou-se essa água numa proveta e efetuou-se a medição da água, que corresponde ao volume de extrato; 2. Para cada extrato marcou-se 3 eppendorfs limpos e secos (como exemplo e para o extrato 1: 1-1, 1-2 e 1-3, onde o primeiro número refere-se ao extrato e o segundo à amostra, ou seja, 3 amostras para cada extrato). No total obteve-se 18 eppendorfs; 3. Pesou-se os eppendorfs numa balança semi-analítica com 4 casas decimais e apontámos o seu valor numa tabela com indicação das condições de extração; 4. Colocou-se os eppendorfs num suporte adequado e enchemos os eppendorfs 1-1, 1-2 e 1-3 com 1 ml de extrato 1, os eppendorfs 2-1, 2-2 e 2-3 com 1 ml de extrato 2 e assim sucessivamente; 5. Colocou-se o suporte com os eppendorfs abertos numa estufa a 40ºC durante 1 semana até evaporação completa do solvente; 6. Pesou-se os eppendorfs com as substâncias extraídas (extrato sem solvente) na mesma balança e apontou-se os valores na tabela previamente construída. Protocolo nº3- Determinação do teor de compostos fenólicos nos extratos Materiais: Espátula Copo de precipitação Tubos de ensaio Suporte para tubos de ensaio Pipetas automáticas (100 µl; 1 ml; 5 ml) Espectrofotómetro e cuvetes de plástico Vortex Cronómetro Solução de extracto Solventes e Padrão: Água destilada Reagente de Folin-Ciocalteu Na 2 CO 3 Etanol Padrão de composto fenólico (ácido gálico) 11

Procedimento: Parte 1- Preparação das soluções: 1. Preparou-se a solução de Carbonato de sódio a 17%. Para isso pesou-se 17g de Na 2 CO 3 e dissolveu-se em 100mL de água, mantendo-se em agitação até diluição completa do carbonato; 2. Preparou-se a solução padrão de ácido gálico. Para isso pesou-se 3,2 mg de ácido gálico e diluiuse em 2 ml de etanol. Esta solução é denominada de solução-mãe de ácido gálico. Parte 2- Preparação dos extratos para análise: 1. Diluiu-se os extratos em água/ etanol, consoante o solvente de extração. Usou se o Vortex para garantir a solubilização completa do extrato; 2. Adicionou-se etanol/água para obter o extrato diluído em etanol 50%; 3. Para cada extrato obtido usou-se apenas um dos eppendorfs que secou a 40ºC. Parte 3- Análise da solução padrão construção da curva de calibração: 1. Colocou-se 11 tubos de ensaio limpos e secos num suporte, sendo que 1 serviu de branco ; 2. Colocou-se nos tubos de ensaio 0, 4, 8, 12, 16 e 20 µl alíquotas de solução-mãe e adicionou-se etanol para perfazer um volume de 20 µl. O primeiro tubo de ensaio serviu de branco para fazer as leituras de absorvância no espectrofotómetro; 3. Adicionou-se de seguida 1580 µl de água destilada com a ajuda de uma micropipeta de 5000 µl a todos os tubos de ensaio; 4. Iniciou-se a contagem do tempo com um cronómetro ao mesmo tempo que se adicionou 100 µl de Folin com a ajuda de uma micropipeta de 200 µl ao primeiro tubo. Agitou-se bem. De 30 em 30 segundos, adicionou-se o reagente de Folin aos outros tubos por ordem; 5. Adicionou-se 300 µl da solução de Carbonato de Sódio por ordem, a todos os tubos com um intervalo de 30 segundos. Adicionou-se o carbonato no 1º tubo quando se adicionou o reagente de Folin no 2ºtubo; 6. Agitou-se as soluções; 7. Colocou-se os tubos de ensaio num banho a 40ºC, durante 30 minutos; 8. Ao fim de 30 minutos mediu-se a absorvância de cada amostra no espectrofotómetro a 765 nm. Fez-se a leitura de 30 em 30 segundos, para que a reação ocorresse exatamente durante 30 minutos em cada tubo. Parte 4- Análise das amostras de extrato: 1. Num suporte de tubos de ensaio colocou-se 1 + nº de extratos 3 tubos limpos e secos; 12

2. No primeiro tubo de ensaio colocou-se 20 µl de água. Este tubo de ensaio serviu como branco para as leituras de absorvância no espectrofotómetro; 3. Nos restantes tubos de ensaio, colocou-se 20 µl das amostras a analisar com a ajuda de uma micropipeta. Analisou-se 3 amostras de cada extrato; 4. Repetiu-se os passos 3 8 explicados atrás para a construção da curva de calibração. Protocolo nº4- Determinação da atividade antioxidante usando o radical DPPH Materiais: Espátula Balança analítica Tubos de ensaio Suporte para tubos de ensaio Pipetas automáticas (100 µl; 1 ml; 5 ml) Espectrofotómetro e cuvetes de plástico Vortex Cronómetro Solventes e Reagente: Radical DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) Etanol Água destilada Procedimento: Parte 2- Preparação dos reagentes: 1. Preparou-se a solução de DPPH em etanol com uma concentração de 0.3 mm (milimolar). Foi necessário 1 ml por amostra. TABELA 2- CONCENTRAÇÕES DE DPPH E ETANOL PARA AS SOLUÇÕES DPPH (mg) 3,0 5,9 8,9 11,8 14,8 17,7 20,7 23,7 26,6 29,6 Etanol (ml) 25 50 75 100 125 150 175 200 225 250 2. Diluiu-se os extratos em etanol: água (75:25, v/v). Parte 2- Reação: 1. Colocou-se os tubos de ensaio no suporte (3 para o controlo, 3 por cada extrato e 3 brancos ) 13

2. Em 3 tubos de ensaio colocou-se 2,5 ml de solvente que se usou para dissolver os extratos (etanol: água 75:25) sendo este o controlo (em triplicado). Noutros 3 tubos de ensaio colocou-se 2,5mL de solução de extrato sendo este a amostra (em triplicado). 3. Ligou-se o cronómetro e no instante de tempo zero adicionou-se 1mL da solução de DPPH ao 1º tubo de controlo. Agitou-se no Vortex durante uns breves segundos e colocou-se num suporte ao abrigo da luz, à temperatura ambiente; 4. Repetiu-se este procedimento para os outros dois tubos de controlo e para os 3 tubos com extrato que serviram de amostra, com intervalo de 30 segundos entre eles. Não se desligou o cronómetro durante todo o ensaio 5. Fez-se autozero do equipamento com etanol: água (75:25) a 517 nm 6. Após 30 minutos leu-se a absorvância do 1º controlo. Repetiu-se o procedimento para os restantes de 30 em 30 segundos. 7. Colocou-se 2,5 ml de cada solução de extrato e 1mL de etanol. Agitou-se e mediu-se a absorvância, sendo este o branco de cada extrato. RESULTADOS E DISCUSSÃO: Os resultados abaixo demonstrados foram obtidos a partir de fórmulas impostas no Excel anexado a este relatório, sendo elas: Protocolo 1: Massa amostra húmida (g) - Massa amostra seca (g) Humidade, % 100 Massa amostra húmida (g) Coeficiente de variação, CV (%) Desvio Padrão 100 Média Resultados satisfatórios se CV < 10 %. 14

Percentagem (%) Protocolo 2: Rendimento de extracção, % Massa extracto (g) 100 Massa MP em base seca (g) Onde, 100 - Humidade (%) Massa MP em base seca (g) Massa MP em base húmida (g) 100 Protocolo 4: Abs amostra Absbranco % AA 1 100 Abscontrolo 100,00 90,00 80,00 70,00 60,00 50,00 40,00 30,00 20,00 10,00 0,00 96,67 87,62 58,00 21,25 5,50 6,60 Amostra 6-15 min Amostra 1-30 min Tempo (min) Rendimento das extracções Teor de fenólicos nos extractos Atividade antioxidante dos extractos FIGURA 45 GRÁFICO QUE TRADUZ O EFEITO DO TEMPO O gráfico 1 traduz o efeito do tempo nas extrações. 15 Neste estudo, utilizaram-se as amostras 1 e 6 pois, apesar das concentrações de etanol serem iguais em ambas (50:50) e a razão de solido solvente também ser a mesma (1:20), e as condições a que foram sujeitas serem as mesmas diferenciando apenas na quantidade de tempo em que estas se encontraram em banho maria, que no caso da amostra 1 foi de 30 minutos e a amostra 6 de metade do tempo, 15 minutos.

Percentagem(%) Avaliando os resultados, podemos afirmar que o rendimento de extração é semelhante em ambas as amostras, ou seja, 5,5% na amostra 6 e 6,6% na amostra 1. Podemos retirar ainda do gráfico que o teor de compostos fenólicos dos extratos é superior quando a amostra é submetida a menos tempo no banho maria. No entanto a atividade antioxidante do mesmo é ligeiramente superior quando a nossa amostra é submetida a um maior tempo de banho maria. Tendo em conta que o principal objetivo é a extração de compostos fenólicos, apesar de a percentagem em ambas as amostras serem muito próximas, podemos concluir que o tempo ideal de extração seria de 30 minutos e não de 15, obtendo assim um rendimento ligeiramente superior. 100,00 96,67 90,00 88,55 80,00 78,62 72,33 79,61 70,00 60,00 50,00 40,00 30,00 20,00 10,00 6,60 21,25 17,20 14,86 20,90 12,06 14,00 18,01 11,60 15,26 0,00 EtoH:H2O(50:50) EtoH:H2O(25:75) EtoH:H2O(0:100) EtOH:H20(75:25) EtOH(100) Concentração de etanol Rendimento das extracções Teor de Fenólicos nos extractos Actividade antioxidante FIGURA 16 -GRÁFICO QUE TRADUZ O EFEITO DA COMPOSIÇÃO DO SOLVENTE Em relação ao efeito da composição de solvente, usámos para comparação as extrações 1, 2, 3, 4 e 5, sendo que podemos ver as variações das concentrações de etanol na tabela 3. Analisando o gráfico da figura 2, podemos verificar que a extração com maior rendimento é a da amostra 3 (100% água), com um rendimento de aproximadamente 21% e um desviopadrão de 0,6, com menor rendimento de extração temos a amostra 1 onde foi usada uma concentração de 50:50 e onde o rendimento obtido foi apenas de 6,6%. TABELA 3- CONCENTRAÇÃO DE ETANOL NAS DIFERENTES AMOSTRAS Amostras EtOH:H 2 0 1 50:50 2 25:75 3 0:100 4 75:25 5 100:0 Quanto ao teor de fenólicos, a extração mais eficaz foi a 1 (EtOH: H 2 0 50:50) com uma média de teor de fenólicos nos extratos de 21,25%, apesar de ter um desvio padrão bastante elevado, de 7,13. Podemos ainda avaliar no gráfico a percentagem de atividade antioxidante, que apesar de serem todas bastante elevadas, destaca-se a atividade da amostra 1 de quase 97%. 16

Assim sendo e apesar de esta ter tido um menor rendimento, a composição de solvente ideal para extração de fenóis da bolota seria de 50% água e 50% etanol. Além de mais, a extração 1 é a que apresenta maior atividade antioxidante. Quanto ao efeito da razão sólido/solvente não foi estudado no nosso trabalho tendo em conta que a diluição foi sempre a mesma, 1:20. CONCLUSÃO: Com a elaboração destas atividades laboratoriais foi possível perceber que a bolota apresenta elevadas taxas de compostos fenólicos, tornando-se assim um alimento benéfico para a saúde humana na medida em que inibe a oxidação de moléculas de outros alimentos, principalmente lípidos, tornando-os mais estáveis. Foi ainda possível perceber que, através do mesmo método de extração, é possível obter mais ou menos rendimento dependendo das quantidades de etanol e agua utilizadas. 17

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