DESCRIÇÃO E FUNCIONAMENTO DO MICROSCÓPIO ÓPTICO. Aprender como usar o microscópio;

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1 MICROSCÓPIO DESCRIÇÃO E FUNCIONAMENTO DO MICROSCÓPIO ÓPTICO OBJETIVOS Aprender como usar o microscópio; Observar a morfologia e outras características distintas das bactérias; Ter noção do tamanho dos microrganismos; Aprender o funcionamento da objetiva de 100X, também conhecida como lente de imersão. 1

2 COMPONENTES DO MICROSCÓPIO COMPONENTES DO MICROSCÓPIO O microscópio é composto basicamente por: SISTEMA ÓPTICO PLATINA PORTA-OBJETOS DISPOSITIVO DE FOCAGEM SISTEMA DE ILUMINAÇÃO 2

3 SISTEMA ÓPTICO q Oculares (1 ou 2): poder de ampliação variável (x5, x10 ou x12); q Sistema de transmissão óptica: poder de ampliação varia entre 1 e 1,5; q Objetivas: poder de ampliação variável (x4, X10, x20, x40, x100); q Revólver: dispositivo rotativo onde estão montadas as objetivas. 3

4 Objetivas de imersão As objetivas com poder de ampliação x100 são OBJETIVAS DE IMERSÃO => é necessário colocar óleo de imersão entre a objetiva e a amostra -> (o ar provoca alterações na imagem quando se usam objetivas com esta capacidade de aumento. PLATINA PORTA-OBJETOS Dotada de um sistema de movimentação das lâminas de preparação em dois sentidos perpendiculares. 4

5 SISTEMA DE ILUMINAÇÃO q Fonte de luz (lâmpada luz branca); q Condensador: dispositivo que contém uma lente que concentra e focaliza a luz; q Diafragma: situado entre a fonte luminosa e o condensador. Permite aumentar o contraste da amostra e a profundidade do campo. DISPOSITIVO DE FOCAGEM Focagem através de movimentos macro e micrométricos (PARAFUSOS MACROMÉTRICO E MICROMÉTRICO). 5

6 PODER DE AMPLIAÇÃO Calcula-se multiplicando a capacidade de ampliação das objetivas (x4, x10, x20, x40, x100) pela ampliação do sistema de transmissão óptica (1 ou 1,5) e pela capacidade de ampliação das oculares (x5, x10 ou x12) FUNCIONAMENTO Colocar a preparação na platina porta-objetos; Colocar a área a examinar na zona do feixe luminoso emergente do condensador; Selecionar a objetiva de menor capacidade para escolher o campo a estudar. Aproximar a platina da objetiva através do sistema macrométrico; No caso de utilização da objetiva de imersão: depositar uma gota do meio de imersão sobre a área em observação. Utilizar o sistema micrométrico de focagem; A pós terminar o trabalho as objetivas de imersão devem ser limpas com xilol, a fonte luminosa deve ser desligada e deve ser colocada a proteção sobre o microscópio. 6

7 TIPOS DE MICROSCOPIA MICROSCOPIA DE CAMPO CLARO: utiliza uma fonte de luz direta que ilumina todo o campo microscópico da amostra. Os raios de luz incidem no objeto e são refocalizados pelas lentes objetivas; MICROSCOPIA DE CAMPO ESCURO: utiliza um microscópio luminoso equipado com uma objetiva e um condensador especial para iluminar os microrganismos contra um fundo escuro. Somente os raios de luz que incidem em objetos no campo são desviados ou refratados para as objetivas -> método particularmente útil para o exame de microrganismos vivos não corados; 7

8 TIPOS DE MICROSCOPIA MICROSCOPIA DE FLURESCÊNCIA: técnica de microscopia óptica utilizada em hospitais e laboratórios clínicos, porque pode ser adaptada a testes rápidos que identificam os microrganismos patogénicos -> um espécime é corado com corante fluorescente que absorve energia luminosa de comprimentos de onda curtos (azul) e emite luz de comprimento de onda maior, como a luz verde; TIPOS DE MICROSCOPIA MICROSCOPIA DE CONTRASTE DE FASE: utiliza um microscópio luminoso modificado que permite maior contraste entre materiais de espessuras ou densidades diferentes. Um condensador especial e a objetiva controlam a iluminação de maneira a que essas diferenças sejam acentuadas. O resultado é uma imagem com graus variados de luminosidade (contraste). Com este método os materiais mais densos aparecem claros, enquanto partes das células que têm densidades próximas à da água (citoplasma) aparecem escuras. Uma vantagem desta técnica é a capacidade de mostrar a estrutura celular sem utilização de corantes e morte dos microrganismos. 8

9 Tipo de Microscópio Ampliação máxima útil Observação do espécime Aplicações Campo Claro Resolução=0.25um Espécimes corados ou descorados; as bactérias geralmente coradas, aparecem com a cor do corante. Características morfológicas grosseiras de bactérias, leveduras, bolores, algas e protozoários. Campo escuro Geralmente descorados; aparecem brilhantes ou iluminados sobre um campo escuro. Microrganismos que exibem algumas características morfológicas especiais quando vivos e em suspensão fluida; por exemplo, os espiroquetas. Fluorescência Luminoso e corado; cor do corante fluorescente. Técnicas de diagnóstico em que o corante fluorescente fixado ao organismo revela a sua identidade. Contraste de fase Graus variáveis de iluminação. Exame de estruturas celulares em microrganismos maiores e vivos; por exemplo, leveduras, algas, protozoários e algumas bactérias. Electrónico Resolução=0.003um Até= Observado em tela fluorescente. Exame de vírus e das ultra-estruturas das células microbianas 9

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