Procariotos x Eucariotos

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Márcio Neves Azambuja
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Microscopia de microrganismos Aula 1 Prática Microbiologia

Camargo Procariotos x Eucariotos http://pathmicro.med.sc.

fortunecity.com/greenfield/eco/813/mod2aula4.

A membrana ondulante e o núcleo são visíveis.

1 Microscopia de microrganismos Aula 1 Prática Microbiologia FFI0751 Profa. Dra. Ilana L. B. C. Camargo Procariotos x Eucariotos Trypanosoma em esfregaço sanguíneo. A membrana ondulante e o núcleo são visíveis. Rickettsia ricketsi dentro de células do sangue (bactéria). 1

Procariotos x Eucariotos Células da mucosa vaginal Célula

picnótico, entre duas células intermediárias.

pathology.com.br/papanicolaou/papanicolaou.

2 Procariotos x Eucariotos Células da mucosa vaginal Célula superficial, cujo citoplasma é avermelhado e cujo núcleo é picnótico, entre duas células intermediárias. Há grande quantidade de bacilos de Döederlein. Célula da mucosa bucal Comparação entre os tamanhos 2

3 Microscopia de microrganismos 5 O primeiro microscópico da história Ampliação de 300x e resolução de 1 m 6 3

4 Tipos de microscópios -Microscópio óptico ou de Luz -Microscópio confocal -Microscópios eletrônicos (Varredura e Transmissão) -Microscópio de tunelamento -Microscópio de força atômica 8 4

5 Microscópio óptico composto MO -com várias lentes -Utiliza a luz visível como fonte de iluminação

6 Rota de Luz no microscópio de baixo para cima Oculares Ampliação Prisma Objetivas Ampliação Amostra Condensador Iluminador 11 Laboratório 6

Objetivas Código de aumento Tipo de aberração corrigida Aumento Correção de curvatura de campo Comprimento do tubo/ espessura da lamínula Abertura numérica Distância de

observadas, selecionando a frequência de luz visível de interesse por meio de seu índice de refração durante a fase de fabricação da lente).

7 Objetivas Código de aumento Tipo de aberração corrigida Aumento Correção de curvatura de campo Comprimento do tubo/ espessura da lamínula Abertura numérica Distância de trabalho 13 Objetivas São classificadas como: Acromáticas: Ajustadas para duas cores, geralmente o vermelho e o verde (ou seja, permite que apenas algumas cores sejam observadas, selecionando a frequência de luz visível de interesse por meio de seu índice de refração durante a fase de fabricação da lente). Apocromáticas: Ajustadas para três cores, normalmente o vermelho, o verde e o violeta. Não-acromática: Não ajustada para cor alguma. Possui a característica de formar halos coloridos ao redor da imagem. 7

8 Lente objetiva Imagem real Invertida Aumentada Lente ocular Imagem virtual Aumentada ainda mais! 8

9 Ampliação total da amostra Ampliação total = potência de ampliação de lentes objetivas x da ocular Objetivas: 10X (baixa potência) 40X (alta potência) 100X (imersão em óleo) 100X 400X 1000X Ocular: Amplia a amostra por um fator de Amplificação e resolução Ampliação e aumento da resolução Ampliação somente!! 9

10 Resolução ou Potência de resolução Capacidade das lentes de diferenciar detalhes finos e estruturas Capacidade de individualizar dois pontos adjacentes Diferenciar entre dois pontos com uma distância específica entre os mesmos Ex: Microscópio com resolução de 0,4 nm pode distinguir 2 pontos se eles estão no mínimo a 0,4 nm de distância um do outro. Quanto menor o comprimento de onda luminosa usado no instrumento, maior a resolução. MO Luz branca com comprimento de onda longo e não pode oferecer resolução a estruturas menores que 0,2 m Limitação da ampliação a cerca de 2000 X. Microscópio eletrônico resolução de cerca de 1000 vezes superior! 19 Limite de resolução D = 0,61 NA D = limite de resolução (diâmetro do menor objeto que pode ser distinguido) = comprimento de onda da luz visível (em geral 0,5 m) NA = Abertura numérica (medida da capacidade de concentrar a luz) NA = sen - metade do ângulo dos raios de luz extremos que ainda penetram a objetiva (> valor = 90 ) - Índice de refração do meio intercalante (espaço entre amostra e objetiva) Ar = 1 Óleo = 1,4 Luz azul com menor comprimento de onda Melhor resolução = filtro azul! 20 10

11 Limite de resolução Abertura numérica (medida da capacidade de concentrar a luz) > Largura angular e abertura numérica Melhor resolução < distância de trabalho 21 Índice de refração Obtenção de imagem clara e detalhada em MO amostra com alto contraste com seu meio Diferenciar o índice de refração das amostras daquele do seu meio Velocidade relativa com que a Luz passa através de um material Altera a direção dos raios de luz sofrendo refração e aumenta o contraste Coloração 22 11

Objetiva de imersão Ampliação alta (100X) com boa resolução, a lente deve ser pequena Embora

perder os raios de luz após eles terem passado através da amostra corada óleo de imersão e a lente de

Para estes raios refratados sejam capturados a lente objetiva deveria ter um diâmetro maior Sem óleo de

12 Objetiva de imersão Ampliação alta (100X) com boa resolução, a lente deve ser pequena Embora necessitemos que a luz percorra a amostra e o meio para ser refratada de modo diferente, não desejamos perder os raios de luz após eles terem passado através da amostra corada óleo de imersão e a lente de imersão Mesmo índice de refração que o vidro e torna-se parte da óptica do vidro do microscópio. Para estes raios refratados sejam capturados a lente objetiva deveria ter um diâmetro maior Sem óleo de imersão nessa lente, a amostra torna-se borrada 23 Objetivas Tabela 2. As propriedades das objetivas do microscópio 24 12

13 Amplificação e resolução Produto do aumento obtido com as lentes objetivas e ocular Aumento 100 X, 400X, ou 1000X 10 X 10 X, 40X, ou 100X Microscópio óptico Limite de resolução é de ~0,2 µm Aumento limite de ~1500x Como carregar o seu microscópio 26 13

14 Como colocar a lâmina no seu microscópio Charriot Platina 27 Como utilizar o seu microscópio 28 14

15 Como utilizar o seu microscópio Ajuste as oculares quanto à distância entre seus olhos, afim de observar um só campo!! 29 Como limpar o MO Solução de limpeza e algodão Solução de limpeza: Solução de limpeza (50% éter sulfúrico PA, 50% clorofórmio PA); Cotonete caseiro ou palito isento de ferpas, com ponta envolvido com algodão; 30 15

16 Tabela

17 Campo escuro Contraste de fase 33 Aguardem Biologia Celular!!!! 17

18 35 18

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