Introdução à Histologia e Técnicas Histológicas. Prof. Cristiane Oliveira

Transcrição

1 Introdução à Histologia e Técnicas Histológicas Prof. Cristiane Oliveira

2 Visão Geral Corpo humano organizado em 4 tecidos básicos: Epitelial Conjuntivo Muscular Nervoso

3 Visão Geral - Tecidos consistem em cells e matriz extracelular; - Cell: Unidade fundamental estrutural e funcional dos seres vivos; - Corpo humano contém cerca de 60 x 10 cells (60 trilhões) 12 - Aprox. 200 diferentes tipos (com tamanhos e formatos variados)

4 Célula Cell eucariótica massa de protoplasma circundada por uma membrana plasmática externa Componentes do protoplasma: Núcleo (contém genoma formado pelos cromossomos); Citoplasma (gel aquoso formado por água - 70%; proteínas, lipídios, carboidratos, outras moléculas orgânicas e inorgânicas)

5 Célula animal idealizada, com seus principais componentes.

6 Microscopia óptica: Células do epitélio bucal coradas com azul de metileno

7 Célula As organelas - estruturas especializadas com capacidade funcional estão no citoplasma; Poucas cells podem ser multinucleadas (ex: Osteoclastos e cells musculares esqueléticas); Envoltório nuclear - reveste o núcleo, cuja substância (cromatina) contém 1 ou mais nucléolos.

8 Célula Estrutura interna da cell - é modificada de modo a refletir sua função: Cells musculares especializadas contração; Cells nervosas (neurônios) condução; Cells tecido conjuntivo sustentação; Cells epiteliais glandulares secreção. para

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11 Microscopia Histologia é o estudo dos tecidos e das células do corpo; Ferramenta primária para estudo das cells MICROSCÓPIO Produz imagens aumentadas das cells e aumenta o contraste para resolução dos detalhes.

12 Microscopia Microscópio Óptico fornece aumento do objeto em até 1000X

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15 MICROSCÓPIO ELETRÔNICO Fornece aumento do objeto de a x. Microscópio eletrônico de transmissão Para cortes ultrafinos, corados com metais pesados - contraste (imagem preto e branco). Mitocôndria

16 MICROSCÓPIO ELETRÔNICO Microscópio eletrônico de varredura Para espécimes espessos ou células inteiras que tenham sido previamente fixadas (imagem em 3D). Vírus bacteriófago Ácaro

17 Técnicas Histológicas Para análise em microscopia óptica de luz é necessária a preparação de lâminas com corte de tecidos muito finos. Microvilosidades intestinais Pele

18 Passos para confecção de lâminas 1. Coleta do Material Partes de órgãos são retiradas com auxílio de um bisturi, pinça ou lâmina de barbear; Não é indicada a extração de porções grandes (já que o objetivo é obter uma camada fina para ser analisada em microscópio óptico)

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20 Passos para confecção de lâminas 2. Fixação do Material Consiste na utilização de procedimentos físicos ou químicos para imobilizar as substâncias constituintes das células e tecidos (fornecendo maior resistência para suportar as demais etapas); Os agentes fixadores mais utilizados são o formol tampando e o líquido de Bouin (ambos fixam as proteínas, evitando sua degradação).

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22 Passos para confecção de lâminas 3. Inclusão Consiste na impregnação do tecido com uma substância firme que permita, posteriormente, seccioná-la em camadas delgadas; A parafina é a mais utilizada nesse procedimento.

23 1ª etapa: Material álcool 70% (desidratação) Xilol (diafanização) Parafina (impregnação)

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25 Passos para confecção de lâminas 4. Microtomia Consiste em utilizar um micrótomo para obter cortes sucessivos, delgados e uniformes, a partir de blocos de parafina com peças incluídas. Esse aparelho é formado por lâmina (fixa ou descartável) de aço, afiada, em um braço ao qual se prende o bloco e que se desloca verticalmente.

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27 Passos para confecção de lâminas 5. Montagem da lâmina histológica As fitas obtidas a partir do micrótomo são transferidas para um banho-maria, com o auxílio de uma pinça, para serem distendidas; A água deve estar entre 3 a 8ºC abaixo do ponto de fusão da parafina utilizada;

28 Os cortes são separados individualmente em lâminas de vidro; As lâminas são colocadas em estufa a 60ºC para secagem (1 a 24 hrs);

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30 Bloco de parafina

31 Passos para confecção de lâminas 6. Coloração A maioria dos preparados histológicos observados nas aulas práticas são corados com uma combinação de 2 corantes: Hematoxilina & Eosina (H.E.); A hematoxilina se comporta como um corante básico e, assim, cora constituintes celulares e intercelulares basófilas em cor roxo-azulado; A eosina se comporta como corante ácido e, assim, cora as estruturas acidófilas (ex: colágeno) em rósea-avermelhado.

32 Corantes utilizados na rotina de laboratórios Tricrômico de Masson cora núcleo de azul escuro; citoplasma, queratina e músculo vermelho; Mucigênio e colágeno azul claro.

33 Orceína cora fibras eláticas de marrom Artéria aorta

34 Weigert cora fibras eláticas de azul

35 Prata Cora fibras reticulares de preto astrócitos

36 Hematoxilina férrica Cora as estriações dos músculos, os núcleos e os eritrócitos de preto.

37 Wright e Giemsa especializado em cells sanguíneas

38 Vídeo Técnicas Histológicas: uma abordagem prática (FIOCRUZ)