MÉTODO DE MANUEL PARA RETICULINA
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- Ana Beatriz Balsemão Aleixo
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1 MÉTODO DE MANUEL PARA RETICULINA FIXADOR: Formalina a 10%, neutra, tamponada. SECÇÕES: Parafina, 6 micrômetros. SOLUÇÕES SOLUÇÃO DE NITRATO DE URÂNIO (URANILA) A 1% Nitrato de urânio (uranila) [UO 2 (NO 3) 2]... 1 grama. Água destilada...até completar 100 mililitros. O nitrato de uranila é substância MUITO TÓXICA. Evite inalá-la, degluti-la e o contato com a pele, mucosas e a roupa. SOLUÇÃO DE PRATA AMONIACAL Nitrato de prata (AgNO 3) gramas. Água destilada...até completar 1000 mililitros. Misture completamente. Remova 70 mililitros da solução de nitrato de prata a 10%. Deixe de lado (guarde). Aos 930 mililitros remanescentes de solução de nitrato de prata a 10%, adicione: Hidróxido de amônio (NH4OH) a 28% mililitros. Acrescente, lentamente, 50 mililitros dos 70 mililitros de solução de nitrato de prata a 10% deixados de lado. Adicione todo ou parte dos 20 mililitros restantes, até que a solução vá ficando levemente opalescente. Esta solução pode ser armazenada no refrigerador por vários meses. Mantenha esta solução em frasco âmbar (escuro) fechado e protegido da luz. O nitrato de prata é muito tóxico, corrosivo e oxidante. O hidróxido de amônio [solução de gás amônia (NH 3) em água] é tóxico e corrosivo. Evite inalá-los, ingeri-los, e o contato com a pele, mucosas, e quaisquer partes do corpo, além da roupa. SOLUÇÃO DE FORMALINA A 1% Formaldeído, 37% - 40%... 1 mililitro. Água destilada mililitros. SOLUÇÃO DE TIOSSULFATO DE SÓDIO (HIPOSSULFATO DE SÓDIO) A 5% Tiossulfato de sódio (hipossulfato de sódio) [Na 2 S2O 3]...5 gramas. Água destilada...até completar 100 mililitros. O tiossulfato de sódio é irritante, tóxico e sensibilizante. Evite inalá-lo, degluti-lo e o contato com a pele, mucosas e outras partes do corpo, e com a roupa. SOLUÇÃO DE CLORETO DE OURO A 1% Dissolva 1 mililitro de cloreto de ouro (AuCl 4), da ampola, em 99 mililitros de água destilada. Para abrir a ampola primeiro sulque-a com um lápis com ponta de diamante e, então, coloque-a em um frasco grande com tampa. Acrescente metade do volume de água, cerca de 45 mililitros, feche o frasco e agite-o vigorosamente. Uma vez que a ampola tenha se partido, acrescente os 54 mililitros restantes de água e filtre. O cloreto de ouro é irritante e sensibilizante. Evite inalar, deglutir e o contato com a pele, mucosas e outras partes do corpo, além da roupa. SOLUÇÃO DE NUCLEAR FAST RED (KERNECHTROT) Nuclear Fast Red (kernechtrot) (C.I )... 0,1 grama. Solução de sulfato de alumínio [Al 2 (SO 4) 3] a 5% mililitros. [Solução de sulfato de alumínio a 5%: 5 gramas de sulfato de alumínio em 100 mililitros de solução com água destilada]. Aqueça, lentamente, até ferver. Após esfriar, filtre, e acrescente um grão de timol para preservar. O sulfato de alumínio é tóxico, irritante e sensibilizante. Evite inalá-lo, degluti-lo e o contato com a pele, mucosas e outras partes do corpo, e com a roupa.
2 PROCEDIMENTO 1. Desparafine e hidrate até água destilada. 2. Sensibilize na solução de nitrato de uranila por 2 minutos. 3. Mergulhe rapidamente em água corrente. 4. Impregne na solução de prata amoniacal por 1 minuto. 5. Lave em água corrente, 2 ou 3 mergulhos rápidos, até que não mais apareça um precipitado branco na água. 6. Desenvolva na solução de formalina por 1 minuto. 7. Lave em água corrente. 8. Matize na solução de cloreto de ouro a 1%, e deixe por 1 minuto. 9. Lave em água corrente. 10. Reduza na solução de tiossulfato de sódio a 5 %, por 1 minuto. 11. Lave em água corrente. 12. Contracore na solução de Nuclear Fast Red por 5 minutos. 13. Lave em água destilada, 3 trocas. 14. Desidrate e clarifique através de etanol a 95%, etanol absoluto, e xileno; 2 trocas de 2 minutos em cada. 15. Monte em meio resinoso. RESULTADOS Fibras reticulares... preto. Núcleos e fundo... vermelho.
3 MÉTODO DE SNOOK PARA RETICULINA FIXADOR: Formalina a 10%, neutra, tamponada. SECÇÕES: Parafina, 6 micrômetros. SOLUÇÕES SOLUÇÃO DE PERMANGANATO DE POTÁSSIO A 0,25% Permanganato de potássio (KMnO 4)...0,25 grama. Água destilada...até completar 100 mililitros. [ou 1 grama de permanganato de potássio em 400 mililitros de solução com água destilada] O permanganato de potássio é tóxico, irritante e sensibilizante. Evite inalá-lo, ingeri-lo, e o contato com a pele, mucosas, e quaisquer partes do corpo, além da roupa. SOLUÇÃO DE ÁCIDO OXÁLICO A 5% Ácido oxálico (C2H2O 4)... 5 gramas. Água destilada...até completar 100 mililitros. O ácido oxálico é tóxico e corrosivo. Evite inalá-lo, degluti-lo e o contato com a pele e outras partes do corpo, além da roupa. SOLUÇÃO DE NITRATO DE URÂNIO (URANILA) A 1% Nitrato de urânio (uranila) [UO 2 (NO 3) 2]... 1 grama. Água destilada...até completar 100 mililitros. O nitrato de uranila é substância MUITO TÓXICA. Evite inalá-la, degluti-la e o contato com a pele, mucosas e outras partes do corpo, além da roupa. SOLUÇÃO DE NITRATO DE PRATA A 5% Nitrato de prata (AgNO 3)... 5 gramas. Água destilada...até completar 100 mililitros. Mantenha esta solução em frasco âmbar (escuro) fechado e protegido da luz. O nitrato de prata é muito tóxico, corrosivo e oxidante. Evite inalá-lo, ingeri-lo, e o contato com a pele, mucosas, e quaisquer partes do corpo, além da roupa. SOLUÇÃO DE HIDRÓXIDO DE SÓDIO A 10% Hidróxido de sódio (Na OH) gramas. Água destilada...até completar 100 mililitros. Acrescente as pastilhas de hidróxido de sódio aos poucos, pois a reação libera calor, podendo causar queimaduras. O hidróxido de sódio é tóxico e corrosivo. Evite inalá-lo, ingeri-lo, e o contato com a pele, mucosas, e quaisquer partes do corpo, além da roupa. SOLUÇÃO DE PRATA AMONIACAL DE SNOOK a Nitrato de prata a 5% mililitros. Acrescente: Hidróxido de sódio a 10% gotas. Enquanto misturando adicione: Hidróxido de amônio concentrado, gota a gota, até que a solução fique clara e que poucos grânulos permaneçam no fundo do frasco. Filtre e use imediatamente. O nitrato de prata é muito tóxico, corrosivo e oxidante. O hidróxido de amônio [solução de gás amônia (NH 3) em água] é tóxico e corrosivo. Evite inalá-los, ingeri-los, e o contato com a pele, mucosas, e quaisquer partes do corpo, além da roupa. SOLUÇÃO DE FORMALINA A 1% Formaldeído, 37% - 40%... 1 mililitro. Água destilada mililitros.
4 SOLUÇÃO DE TIOSSULFATO DE SÓDIO (HIPOSSULFATO DE SÓDIO) A 5% Tiossulfato de sódio (hipossulfato de sódio) [Na 2 S2O 3]...5 gramas. Água destilada...até completar 100 mililitros. O tiossulfato de sódio é irritante, tóxico e sensibilizante. Evite inalá-lo, degluti-lo e o contato com a pele, mucosas e outras partes do corpo, e com a roupa. SOLUÇÃO DE CLORETO DE OURO A 1% Dissolva 1 mililitro de cloreto de ouro (AuCl 4), da ampola, em 99 mililitros de água destilada. Para abrir a ampola primeiro sulque-a com um lápis com ponta de diamante e, então, coloque-a em um frasco grande com tampa. Acrescente metade do volume de água, cerca de 45 mililitros, feche o frasco e agite-o vigorosamente. Uma vez que a ampola tenha se partido, acrescente os 54 mililitros restantes de água e filtre. O cloreto de ouro é irritante e sensibilizante. Evite inalar, deglutir e o contato com a pele, mucosas e outras partes do corpo, além da roupa. SOLUÇÃO DE NUCLEAR FAST RED (KERNECHTROT) Nuclear Fast Red (kernechtrot) (C.I )... 0,1 grama. Solução de sulfato de alumínio [Al 2 (SO 4) 3] a 5% mililitros. [Solução de sulfato de alumínio a 5%: 5 gramas de sulfato de alumínio em 100 mililitros de solução com água destilada]. Aqueça, lentamente, até ferver. Após esfriar, filtre, e acrescente um grão de timol para preservar. O sulfato de alumínio é tóxico, irritante e sensibilizante. Evite inalá-lo, degluti-lo e o contato com a pele, mucosas e outras partes do corpo, e com a roupa. PROCEDIMENTO 1. Desparafine e hidrate até água destilada. 2. Oxide na solução de permanganato de potássio a 0,25%, por 5 minutos. 3. Lave em água de torneira. 4. Deixe na solução de ácido oxálico a 5% até clarear. 5. Lave em água de torneira. 6. Passe na solução de nitrato de uranila a 1% (mordente) por 5 segundos. 7. Lave em água de torneira. 8. Deixe na solução de prata amoniacal de Snook por 1 minuto. b 9. Mergulhe em água corrente. 10. Deixe na solução de formalina a 1% por 1 minuto. 11. Lave em água corrente. 12. Deixe na solução de cloreto de ouro a 1% até que os cortes fiquem cinza escuros (1 minuto). 13. Lave em água corrente. 14. Deixe na solução de tiossulfato de sódio a 5% por 30 segundos a 1 minuto. 15. Lave em água corrente. 16. Contracore na solução de Nuclear Fast Red por 5 minutos. 17. Lave em água destilada. 18. Desidrate e clarifique através de etanol 95%, etanol absoluto, e xileno; 2 trocas de 2 minutos em cada. 19. Monte em meio resinoso. RESULTADOS Fibras reticulares... cinza a preto. Fundo... róseo. a Substitua a solução a cada 10 a 12 lâminas coradas. b Utilize cubas de coloração limpas e pinças de teflon ou cobertas com parafina nas etapas 8 a 18, e nas etapas 8 a 15 proceda com uma lâmina de cada vez.
5 REFERÊNCIA SNOOK, T. - The guinea pig spleen; studies on the structure and connections of the venous sinuses. Anat. Rec., 89: 413, 1944.
6 MÉTODO DE WILDER PARA RETICULINA FIXADOR: Formalina a 10%, neutra, tamponada. SECÇÕES: Parafina, 6 micrômetros. SOLUÇÕES SOLUÇÃO DE ÁCIDO FOSFOMOLÍBDICO A 10% Ácido fosfomolíbdico [H3P(Mo3O 10) 4] gramas. Água destilada mililitros. O ácido fosfomolíbdico é irritante e corrosivo. Evite inalá-lo, degluti-lo e o contato com a pele, mucosas e outras partes do corpo, e com a roupa. SOLUÇÃO DE NITRATO DE URÂNIO (URANILA) A 1% Nitrato de urânio (uranila) [UO 2 (NO 3) 2]... 1 grama. Água destilada...até completar 100 mililitros. O nitrato de uranila é substância MUITO TÓXICA. Evite inalá-la, degluti-la e o contato com a pele, mucosas e a roupa. SOLUÇÃO DE NITRATO DE PRATA A 10,2% Nitrato de prata (AgNO 3)... 10,2 gramas. Água destilada...até completar 100 mililitros. Mantenha esta solução em frasco âmbar (escuro) fechado e protegido da luz. O nitrato de prata é muito tóxico, corrosivo e oxidante. Evite inalá-lo, ingeri-lo, e o contato com a pele, mucosas, e quaisquer partes do corpo, além da roupa. SOLUÇÃO DE HIDRÓXIDO DE SÓDIO A 3,1% Hidróxido de sódio (Na OH)... 3,1 gramas. Água destilada...até completar 100 mililitros. Acrescente as pastilhas de hidróxido de sódio aos poucos, pois a reação libera calor, podendo causar queimaduras. O hidróxido de sódio é tóxico e corrosivo. Evite inalá-lo, ingeri-lo, e o contato com a pele, mucosas, e quaisquer partes do corpo, além da roupa. SOLUÇÃO DE PRATA AMONIACAL a Solução de nitrato de prata a 10,2 %... 5 mililitros. Acrescente: Hidróxido de amônio concentrado, gota a gota, até que o precipitado que se forma esteja quase todo dissolvido. Acrescente: Solução de hidróxido de sódio a 3,1 %... 5 mililitros. A solução formará precipitado novamente. Acrescente: Hidróxido de amônio concentrado, gota a gota, até que a solução clarifique. Complete o volume da solução, até 50 mililitros, com água destilada. O hidróxido de amônio [solução de gás amônia (NH 3) em água] é tóxico e corrosivo. Evite inalálo, ingeri-lo, e o contato com a pele, mucosas, e quaisquer partes do corpo, além da roupa. SOLUÇÃO REDUTORA Água destilada mililitros. Formalina, neutra, a 40%... 0,5 mililitro. Solução de Nitrato de uranila a 1%... 1,5 mililitro.
7 SOLUÇÃO ESTOQUE DE CLORETO DE OURO A 1% Dissolva 1 mililitro de cloreto de ouro (AuCl 4), da ampola, em 99 mililitros de água destilada. Para abrir a ampola primeiro sulque-a com um lápis com ponta de diamante e, então, coloque-a em um frasco grande com tampa. Acrescente metade do volume de água, cerca de 45 mililitros, feche o frasco e agite-o vigorosamente. Uma vez que a ampola tenha se partido, acrescente os 54 mililitros restantes de água e filtre. O cloreto de ouro é irritante e sensibilizante. Evite inalar, deglutir e o contato com a pele, mucosas e outras partes do corpo, além da roupa. SOLUÇÃO DE CLORETO DE OURO A 0,2% Solução estoque de cloreto de ouro a 1% mililitros. Água destilada mililitros. SOLUÇÃO DE TIOSSULFATO DE SÓDIO (HIPOSSULFATO DE SÓDIO) A 5% Tiossulfato de sódio (hipossulfato de sódio) [Na 2 S2O 3]...5 gramas. Água destilada... até completar 100 mililitros. O tiossulfato de sódio é irritante, tóxico e sensibilizante. Evite inalá-lo, degluti-lo e o contato com a pele, mucosas e outras partes do corpo, e com a roupa. SOLUÇÃO DE NUCLEAR FAST RED (KERNECHTROT) Nuclear Fast Red (kernechtrot) (C.I )... 0,1 grama. Solução de sulfato de alumínio [Al 2 (SO 4) 3] a 5% mililitros. [Solução de sulfato de alumínio a 5%: 5 gramas de sulfato de alumínio em 100 mililitros de solução com água destilada]. Aqueça, lentamente, até ferver. Após esfriar, filtre, e acrescente um grão de timol para preservar. O sulfato de alumínio é tóxico, irritante e sensibilizante. Evite inalá-lo, degluti-lo e o contato com a pele, mucosas e outras partes do corpo, e com a roupa. PROCEDIMENTO 1. Desparafine e hidrate até água destilada. 2. Oxide na solução de ácido fosfomolíbdico a 10% por 10 minutos. 3. Lave totalmente em água corrente de torneira até que todos os traços amarelos da solução desapareçam. 4. Deixe na solução de nitrato de urânio (uranila) a 1% por 1 minuto. 5. Lave em água destilada por 10 a 20 segundos. 6. Deixe na solução de prata amoniacal por 1 minuto (OBS: Aproximadamente 5 a 7 lâminas podem ser passadas na solução de prata amoniacal. Após isso, tal solução deve ser trocada). 7. Mergulhe muito rápido em etanol a 95%. 8. Deixe na solução redutora por 1 minuto. 9. Lave em água destilada. 10. Deixe na solução de cloreto de ouro a 0,2% por 1 minuto. (OBS: A exposição prolongada na solução de cloreto de ouro pode corar muito as fibras reticulares, as quais parecerão avermelhadas ao final do procedimento). 11. Lave em água destilada. 12. Deixe na solução de tiossulfato de sódio a 5% por 1 minuto. 13. Lave em água de torneira. 14. Contracore na solução de Nuclear Fast Red por 5 minutos. 15. Lave bem em água destilada. 16. Desidrate e clarifique através de etanol 95%, etanol absoluto, e xileno; 2 trocas de 2 minutos em cada. 17. Monte em meio resinoso. RESULTADOS Fibras reticulares... preto. Colágeno... rosa. Outros elementos tissulares... vermelho.
8 REFERÊNCIA WILDER, H.C. - An improved technique for silver impregnation of reticulum fibers. Am. J. Path., 11: 817, 1935
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