T.M. Mabel Pinilla Fernández PhD (c)
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1 T.M. Mabel Pinilla Fernández PhD (c)
2 Epidemiologia En chile, 2 da causa de muerte en mujeres
3 Clasificación Clínico- patológica y Sobrevida Tamanho Tumoral (T) T1: 2.0cm em sua maior dimensão T2: 2-5 cm em sua maior dimensão T3: >5cm em sua maior dimensão T4: Tumor de qualquer tamanho com extensão na parede torácica ou a pele. Status Linfonodal (N) Sem metástases Micrometástases Metástases N1:1-3 Linfonodos acomehdos N2: 4-9 Linfonodos acomehdos N3: 10 Linfonodos acomehdos Metástases a distância (M) M0:Sem metástases M1:Presença de metástases TNM 99% 92% 82-65% 47% 44% 14% Registros hospitalares de câncer, INCA 2010
4 Herencia BRCA1 BRCA2 Encargados de reparar daño en el DNA o eliminar las celulas que no pueden ser reparadas
5 Clasificación _Cáncer de Mama Ductal Lobular In situ Invasivo In situ Invasivo Cancer de Mama Enfermedad de Paget's Tumors Phyllodes Tumor Inflamatorio
6 Marcadores Moleculares Receptor estrógeno Receptor progesterona ERBB2 Ki- 67
7 Clasificación Molecular Basal CitoceraYnas 5 e 17 HER- 2 Aumento de expresion de ERBB2 Normal- like Luminal Receptor de estrógeno Perou et al. Nature, 2000
8 Clasificación Molecular Basal HER- 2 Normal- like Luminal Expressão de ERBB2 Sorlie et al. Proc. Natl. Acad. 2001
9 Clasificación Molecular Hu et al. Luminal A, B/HER- 2/normal like/ Basal/ IFN Perou et al. Luminal/HER- 2/normal- like/basal Parker et al. PAM Sorlie et al. Luminal A, B, C/ HER- 2/ normal- like/ Basal 2007 Herschkowitz et al. Luminal A, B/ HER- 2/normal- like/ Basal/ claudin low
10 Tratamiento SubQpo Estrogeno /Progesterona ERBB2 (Her2/neu) Ki- 67 Sin Estrogeno/progesterona ni ERBB2 Tratamiento Tamoxifeno Transtuzumab Quimioterapia Sin tratamiento
11 Evaluación del perfil molecular de pacientes con carcinoma ductal invasivo con y sin linfonodos compromeqdos
12 Metodología
13 Muestras Foram incluídas 103 amostras de carcinoma ductal invasivo de mama, provenientes do banco de tecidos do Hospital A. C. Camargo Com ensaios imunoistoquímicos de rohna para receptores hormonais (estrógeno e progesterona) e do receptor HER2 Com ressecção dos linfonodos Livres de tratamento neo- adjuvante (RT ou QT)
14 Muestras Molecular Linfonodo Não AcomeYdo AcomeYdo à 1-3 LN à 4LN *Cheang et al. J. Natl. Cancer Inst., 2009
15 Seleção das células epiteliais Seleção das células epiteliais neoplásicas mediante microdissecção a laser UHlizando CapSure HS Arcturus Feixe de laser com diâmetro de 7,5μm Tempo máximo de captura de 10 minutos Pixcell II LCM (Arcturus Engineering, Mountain View, CA, USA)
16 Extração e Avaliação do RNA O RNA total foi extraído a parhr das células epiteliais capturadas no CapSure HS uhlizando o kit Pico Pure RNA isolahon Arcturus. Avaliação da Integridade do RNA Total (Bioanalyzer) RIN 8.1 RIN 3.8 Apenas as amostras com boa integridade (RIN >5) foram uylizadas nas etapas de amplificação, marcação e hibridização.
17 Amplificação do RNA poli A 1 round Castro et al., round Agilent
18 Descrição do array uqlizado nas hibridizações Microarray 244K sondas para um ou mais éxons de genes codificadores de proteínas sondas TINs (nas fitas senso e anhsenso) sondas PINs Nakaya et al. Genome Biol., 2007 TIN: Totalmente Intrônicos PIN: Parcialmente Intrônicos
19 Perfil de expressão gênica dos transcritos codificantes Subgrupos Moleculares Aumento da expressão dos genes NAT1, MAPT, ESR1, SCL39A6, FOXA1 e PGR Aumento da expressão dos genes FOXC1, SFRP1, CDH3, MIA e ACTR3B Aumento da expressão dos genes ERBB2, GRB7 e TEMEM45B Imunoistoquímica
20 Perfil de expressão gênica dos transcritos codificantes Status Linfonodal Linfonodo não acomeydo Linfonodo acomeydo 1-3LN 4LN Teste T, não pareado - p 0,05 74 genes Fold Change abs > aumento da expressão LN não acomeydos 40 aumento da expressão 4LN
21 Perfil de expressão gênica dos transcritos codificantes Status Linfonodal Legenda:
22 Perfil de expressão gênica dos transcritos codificantes Verificação do perfil de expressão 74 genes Short Time- series Expression Miner STEM Linfonodo não acomeydo Linfonodo acomeydo 1-3LN 4LN 0 1 2
23 Perfil de expressão gênica dos transcritos codificantes
24 Validación de la expresión en muestras de pacientes con y sin linfonodo compromeqdo
25 Prevenir la aparición y la evolución del Cancer de Mama es tarea de todos T.M. Mabel Pinilla Fernández PhD (c) mabelpinilla@udec.cl
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