Purificação de proteínas em escala laboratorial

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1 Cromatografia Purificação de proteínas em escala laboratorial Guia de seleção de colunas e cartuchos

2 RESINAS E COLUNAS DE PURIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS A Bio-Rad tem um portfólio abrangente de colunas e cartuchos de cromatografia para purificação de proteínas de alta qualidade. Estão disponíveis colunas e cartuchos para cromatografia de afinidade preparatória, de troca iônica, de exclusão de tamanho e de modo misto para as técnicas de escala laboratorial mais comuns e importantes. Adicionalmente, colunas de HPLC para análise de moléculas pequenas estão incluídas na coleção de colunas de escala laboratorial da Bio-Rad. Afinidade A cromatografia de afinidade separa proteínas com base na atração de uma porção da proteína a um ligante ligado à matriz de cromatografia. Essa técnica é executada pela utilização da atração de porções de proteínas nativas em uma matriz de cromatografia ou pela inclusão de um marcador na proteína para interagir com um tipo específico de resina (meio). A separação é seletiva e reversível, e o mecanismo de ligação pode ser comparado à conexão de uma chave com a fechadura. A eluição pode ser executada alterando a força iônica ou ph da solução ou pela utilização de um agente caotrópico. A cromatografia de afinidade em geral é a primeira etapa em um protocolo de purificação, proporcionando uma proteína de interesse purificada e concentrada. O isolamento de anticorpos monoclonais pela atração nativa usando a cromatografia de afinidade pode ser executado com as linhas de produtos Bio-Scale Mini UNOsphere e Resina Bio-Scale Mini Affi- Gel da Bio-Rad. A Resina de Proteína A Bio-Scale Mini UNOsphere SUPrA tem elevada capacidade de ligação e fornece anticorpos monoclonais de pureza superior. A Resina de Proteína A Bio-Scale Mini Affi-Gel, o Gel Azul Bio- Scale Mini Affi-Gel, o Gel Azul CM Affi-Gel e as Matrizes e s Azuis Bio-Scale Mini DEAE Affi-Gel proporcionam purificação em uma única etapa de anticorpos IgG a partir de soro. A purificação de proteínas marcadas é facilitada com as famílias de produtos Nuvia e Profinity, que incluem os s Bio-Scale Mini Nuvia IMAC, Bio-Scale Mini Profinity GST e Bio-Scale Mini Profinity exact. A Resina Bio-Scale Mini Nuvia IMAC isola proteínas marcadas com histidina, a Resina Bio-Scale Mini Profinity GST purifica proteínas marcadas com glutationa S-transferase (GST) e a Resina Bio-Scale Mini Profinity exact é uma matriz de autoclivagem que fornece purificação de proteínas sem marcação. l(28 nm), mau Pico de fluxo Pico de eluição Volume da coluna = 4,99 ml Troca iônica O isolamento de cromatografia de troca iônica ocorre por meio de uma proteína de interesse carregada sendo atraída para uma matriz de cromatografia com carga oposta. A separação de proteínas é realizada pela alteração da força iônica ou ph da solução de maneira que altere diferencialmente as propriedades de ligação das proteínas que interagem com a matriz. Os protocolos de eluição incluem o uso de gradientes, etapas isocráticas ou uma combinação desses. A troca iônica pode ser utilizada para o isolamento da proteína, a purificação intermediária ou como técnica de polimento. A Bio-Rad oferece uma variedade de colunas e cartuchos de cromatografia de troca iônica de alta qualidade, com uma variedade de tamanhos de partícula, grupos funcionais e químicas de coluna. As Resinas de Troca Iônica Bio-Scale Mini UNOsphere e Foresight Nuvia, de alto desempenho e capacidade para partículas grandes, foram projetadas para as etapas de captura e intermediárias da purificação de proteínas em escala laboratorial e para triagem de bioprocessos. O tamanho dos seus grânulos as torna ideais para uso com amostras brutas. As s de Troca Iônica ENrich e Bio-Scale Mini UNOsphere, de resolução excepcionalmente alta, são capazes de resolver as amostras de proteína mais complexas e difíceis e são ideais para as etapas de polimento do fluxo de trabalho de purificação de proteínas em escala laboratorial. Os produtos de Resina de Troca Iônica Bio-Scale Mini Macro-Prep têm alta resolução e capacidade, fornecendo soluções para qualquer etapa da purificação de proteínas. l(28 nm), mau α-lactalbumina Ribonuclease A Citocromo c Lisozima Exemplo de separação por troca de cátions de padrões de proteínas. A ENrich S fornece separação de alta resolução, carga máxima de proteínas de 12 mg, taxa de fluxo de,5-2 ml/min. Exclusão de tamanho A cromatografia de exclusão de tamanho (SEC), também conhecida como filtração em gel, é uma técnica não ligante que separa as proteínas com base nas suas diferenças de tamanho. A composição do tampão em geral não afeta a separação, de modo que todo o método é realizado sob condições isocráticas. Visto que são necessárias condições de carga de baixo volume (em média, <1%) para uma resolução ideal, essa técnica é utilizada mais frequentemente para polimento ou caracterização de proteínas. A Bio-Rad oferece as Resinas e s de Exclusão de Tamanho ENrich e Bio-Scale Mini Bio-Gel P-6 para a separação de proteínas de alta resolução e eficiente dessalinização e troca de tampão das amostras de proteína. As s de Exclusão de Tamanho ENrich SEC proporcionam separações rápidas e reprodutíveis de alta resolução e purificação de proteínas com base no tamanho. Essas colunas podem funcionar a taxas de fluxo elevadas, o que resulta em tempos de separação excepcionalmente curtos. As Resinas e s Bio-Scale Mini Bio-Gel P-6 são o padrão ouro do setor para dessalinização rápida e eficiente e troca de tampão de amostras de proteína. l(28 nm), mau g-globulina bovina Tireoglobulina, pico triplo Ovalbumina de galinha Vitamina B12 Mioglobina equina,8,16,24,32,4,48,56,64,72,8,88,96 1,4 1,12 1,2 1,28 Volume da coluna = 24 ml Exemplo de separação de exclusão de tamanho. A ENrich SEC 65 proporciona a mesma alta resolução para o intervalo de tamanho de peso molecular de execução e 5-65 kd em taxas de fluxo elevadas que induzem 1,5 e 2, ml/min. Modo misto A cromatografia de modo misto é uma técnica que oferece propriedades únicas de separação devido ao uso de várias modalidades de separação. O uso da cromatografia de modo misto como etapa intermediária de purificação ou polimento pode oferecer seletividade e resolução inigualáveis para uma variedade de biomoléculas. As Resinas de Modo Misto Bio-Scale Mini CHT de Hidroxiapatita Cerâmica e Bio-Scale Mini CFT de Fluorapatita Cerâmica com a capacidade exclusiva de remover a proteína A, endotoxinas, ácidos nucleicos e agregados são consideradas os padrões ouro do setor para separação e purificação de anticorpos e são ideais para a segunda ou terceira etapa de um fluxo de trabalho de purificação de anticorpos. A Resina Foresight Nuvia cprime oferece seletividade exclusiva de modo misto por meio de troca de cátions hidrofóbicos. A 28 1,75 1,5 1,25 1,,75,5,25 A 28 ph Fluxo Fração Eluato mab1 Tempo, min Tira de ph 7,5 Tira de 1 N NaOH Exemplo de separação de modo misto. Resina Foresight Nuvia cprime como a etapa de polimento final de uma purificação de anticorpos monoclonais. Resina A Bio-Rad tem um portfólio completo de resinas de cromatografia comprovadas para purificação de proteínas em grande escala e em laboratórios de alto desempenho. Juntamente com os formatos estabelecidos, como colunas, cartuchos e placas de 96 cavidades, a resina de cromatografia está disponível globalmente em quantidades de escala de biofabricação. As Resinas Profinity, Affi-Gel, UNOsphere, Macro-Prep e Nuvia são oferecidas em massa. As químicas de cromatografia escalável incluem de afinidade, troca iônica, exclusão de tamanho e modo misto. Não deixe de discutir suas necessidades de desenvolvimento e escalonamento com um especialista em cromatografia da Bio-Rad. 12,5 1, 7,5 5, ph Exemplo de separação por afinidade marcada. A maioria das proteínas passa pela coluna (pico de fluxo) enquanto o pico de eluição representa aquelas com uma atração específica para o ligante da resina.

3 GUIA DE SELEÇÃO DE COLUNAS E CARTUCHOS 1% de homogeneidade Pureza da proteína POLIMENTO PURIFICAÇÃO INTERMEDIÁRIA Analítico Alta resolução Boa resolução, fluxo rápido Alta resolução Boa resolução, fluxo rápido ENrich SEC, Aminex ENrich Q e S, ENrich SEC, UNO Q e S, CHT, CFT, Nuvia cprime ENrich SEC, Aminex, Macro-Prep ENrich Q e S, UNO Q e S Macro-Prep, UNOsphere, Nuvia Q e S As s Aminex proporcionam excelente separação de carboidratos, ácidos orgânicos e alcoóis. Ganhe alta especificidade com a modalidade de modo misto das Resinas CHT, CFT e Nuvia cprime. Grânulos de Macro-Prep 5 µm oferecem a flexibilidade de remover contaminantes em massa e traços de impurezas com altas taxas de fluxo. Grânulos de ENrich 1 µm são ideais para resolução de espécies de proteínas semelhantes ou remoção de contaminantes em massa e traços de impurezas. Use as Resinas Macro-Prep, UNOsphere e Nuvia para captura ou purificação intermediária. Fluxo de trabalho de purificação de anticorpos l (28 nm), mau l (28 nm), mau Purificação com ENrich SEC Monômero Dímero Agregados,1,2,3,4,5,6,7,8,9 1, 1,1 1,2 1,3 Volume da coluna = 23,56 ml Purificação por troca de ânions com ENrich Volume da coluna =,98 ml l (28 nm) %B Purificação com UNOsphere SUPrA 2.4 l 3 (28 nm) %B CAPTURA Purificação marcada Purificação de anticorpos Nuvia IMAC, Profinity GST, Profinity exact UNOsphere SUPrA, Affi-Prep Protein A, Affi-Gel, Affi-Gel Blue Use as Resinas Nuvia e Profinity para alta pureza de proteínas marcadas em uma etapa. As Resinas UNOsphere SUPrA, Affi-Prep e Affi-Gel oferecem alta pureza de anticorpos e fragmentos de anticorpos em uma etapa. l (28 nm), mau Fluxo de trabalho de purificação de mab-s TCF, com carga de amostra de 5 ml.

4 NOSSA FAMÍLIA DE PRODUTOS s ENrich s de troca iônica e exclusão de tamanho de alta resolução para purificações intermediárias e de polimento. s de HPLC Aminex As colunas de HPLC Aminex são o padrão de pesquisa e do setor para a análise de carboidratos, ácidos orgânicos e alcoóis em aplicações de alimentos e bebidas, biocombustíveis e biotecnologia. l(19 nm), mau Ácidos orgânicos purificados por uma coluna Aminex Alta resolução de pico para os ácidos oxálico (1), cítrico (2), málico (3), succínico (4), fórmico (5) e acético (6). s Foresight Formatos de coluna especialmente projetados para estudos de escalonamento e modelagem, embalados com uma variedade de meios de escala de processo. s Bio-Scale Mini s de coluna versáteis de baixa pressão contendo meios de afinidade e troca iônica que podem ser usados com uma variedade de sistemas ou simplesmente com uma seringa. TABELA DE SELEÇÃO DE COLUNA s e cartuchos pré-embalados Número de catálogo Formato Quantidade Tamanho da partícula, µm Capacidade do meio Aplicações de purificação Filtração em gel/dessalinização ENrich SEC ml 1 25 μl Escala laboratorial, alta resolução, separação rápida ENrich SEC ml 1 25 μl Escala laboratorial, alta resolução, separação rápida Bio-Scale Mini Bio-Gel P-6 Modo misto Bio-Scale Mini CHT Tipo I Bio-Scale Mini CHT Tipo II Bio-Scale Mini CFT Tipo II Foresight Nuvia cprime Análise de carboidratos, ácidos orgânicos e alcoóis Aminex Troca iônica Placas, coluna ENrich Q 78-1 ENrich S UNO Q UNO S Bio-Scale Mini Macro-Prep High Q Bio-Scale Mini Macro-Prep High S Bio-Scale Mini Macro-Prep DEAE Bio-Scale Mini UNOsphere S Foresight Nuvia Q Foresight Nuvia S Bio-Scale Mini UNOsphere Rapid S Bio-Scale Mini UNOsphere Q Afinidade marcada Bio-Scale Mini Nuvia IMAC Bio-Scale Mini Profinity GST Bio-Scale Mini Profinity exact Afinidade de imunoglobulina Bio-Scale Mini UNOsphere SUPrA Protein A Bio-Scale Mini Affi-Prep Protein A Bio-Scale Mini Affi-Gel Blue Bio-Scale Mini DEAE Affi-Gel Blue Placas, coluna, colunas 5 x 1 ml 1 x 5 ml 5 x 5 ml 2 x placas de 96 cavidades 1 x 25 x 4, mm 1 x 3 x 7,8 mm 1 x 3 x 7,8 mm 1 ml 8 ml 1 ml 8 ml 1 x 6 ml 1 x 12 ml 1 x 6 ml 1 x 12 ml 2 x placas de 96 cavidades 2 x 1 ml 4 x 1 ml Monólito 1-22% CV Dessalinização mg IgG Escala laboratorial, alta seletividade, alta capacidade mg IgG Escala laboratorial, alta seletividade ,5 mg/g de lisozima Escala laboratorial, proteínas ácidas e básicas 7 4 mg IgG Escala laboratorial, proteínas básicas em alto teor de sal 9, 9, 25 1,7 meq/ml Análise de carboidratos, ácidos orgânicos e alcoóis 1 13 mg BSA Escala laboratorial, alta resolução, polimento 1 12 mg IgG Escala laboratorial, alta resolução, polimento Monólito 2 mg BSA, IgG Escala laboratorial, alta resolução, polimento Monólito 2 mg BSA, IgG Escala laboratorial, alta resolução, polimento 5 37 mg BSA Escala laboratorial, captura, polimento 5 49 mg IgG Escala laboratorial, captura, polimento 5 4 mg BSA, IgG Escala laboratorial, captura, polimento 8 6 mg IgG Escala laboratorial, captura, polimento mg BSA Escala laboratorial, captura, polimento mg IgG Escala laboratorial, captura, polimento 1 6 mg IgG Escala laboratorial, captura, polimento mg IgG Escala laboratorial, captura, polimento mg de proteína marcada com histidina 1 mg de proteína marcada com GST 3 mg de proteína marcada com subtilisina Proteínas recombinantes marcadas com histidina Proteínas recombinantes marcadas com GST Proteínas marcadas com subtilisina mg IgG Anticorpo monoclonal, IgG mg de lgg1 de camundongo, mg de IgG humana Anticorpo monoclonal, IgG mg de albumina Remoção de albumina, enzima, IgG 15-3,2-1, ml de F3GA e DEAE no soro Purificação de IgG do soro, proteínas séricas

5 Os vetores, marcadores e resinas Profinity exact são licenciados exclusivamente sob os direitos de patente da Potomac Affinity Proteins. Este produto destina-se apenas a fins de pesquisa. Para aplicações comerciais ou fabricação usando esses produtos, é possível obter licenças comerciais entrando em contato com o Gerente de Marketing para Cromatografia do Grupo de Ciências da Vida, Bio-Rad Laboratories, Inc., 6 Alfred Nobel Drive, Hercules, CA 94547, Telefone 1-8-4BIORAD ( ). Bio-Rad Laboratories, Inc. Grupo de Ciências da Vida Site EUA Austrália Áustria Bélgica Brasil Canadá China República Tcheca Dinamarca Finlândia França Alemanha Grécia Hong Kong Hungria Índia Israel Itália Japão Coreia México Holanda Nova Zelândia Noruega Polônia Portugal Rússia Singapura África do Sul Espanha Suécia Suíça Taiwan Tailândia Reino Unido Boletim 6498 Rev. C BR/PT Sig 1213