Docentes da Faculdade de Apucarana RESUMO

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1 ANÁLISE DA CITOTOXIDADE DO ÓLEO DE NIM (Azadiractha indica a juss) EM CÉLULAS MERISTEMÁTICAS DE RAIZ DE ALLIUM CEPA FIORI, B.C 1 ; SILVA, C. V. da 2 ; VILELA, V.L.D 2 ; VENÂNICO, M.M 1 ; FIORI, T. A 3 1 Discentes do Curso de Ciências Biológicas da Faculdade de Apucarana 2 Docentes da Faculdade de Apucarana 3 Discente do Curso de Psicologia da Faculdade de Apucarana RESUMO Originária da Índia e introduzida no Brasil pelo Instituto Agronômico do Paraná (IAPAR) o nim (Azadirachta indica) é conhecido devido atividade medicinal e seu efeito no controle de pragas. No entanto, é necessária a realização de mais testes que possam descartar a possibilidade de ação tóxica deste produto para as células. Este trabalho está sendo desenvolvido a fim de avaliar a possível citotoxicidade deste produto em células meristemáticas de Allium cepa. Palavra-chave: pragas, toxicidade, extrato de nim. ABSTRACT Originating in India and introduced in Brazil by the Agronomy Institute of Parana (IAPAR) neem (Azadirachta indica) is known because medical activity and its effect on the control of pests. However, it is necessary to perform more tests that can rule out the possibility of toxic action of this product for the cells. This work is being developed in order to evaluate the possible cytotoxicity of this product in meristematic cells of Allium cepa. Keyword: pests, toxicity, neem extract. INTRODUÇÃO Devido à falta de informação os inseticidas sintéticos passaram a desempenhar um papel negativo na história mundial beneficiando o surgimento

2 de novas pragas, envenenamento dos trabalhadores rurais e animais, intensa contaminação de lagos, rios e mananciais de águas subterrâneas ameaçando até a saúde humana, existe cerca de formulações para a 400 agrotóxicos diferentes, porém apenas formulações encontram-se licenciadas do País (NEVES; NOGUEIRA, 1996). Um grande número de plantas inseticida vem sendo estudadas, dentre elas podemos destacar a família Meliaceae onde seu principal membro é a Azadirachta indica A. Juss popularmente chamada de nim é conhecida a mais de dois mil anos devido as suas qualidades curativas (MARTINEZ,2002). De origem Indiana, o nim é uma planta sempre verde, de crescimento rápido, raiz pivotante, flores de cor branca, fruto em forma de baga ovalada, as sementes produzem um óleo de cor marrom que contém o principal composto azadiractin inibidor da alimentação e a postura de ovos de insetos. Todas as partes da planta são amplamente utilizadas na fabricação de cosméticos, produtos de higiene e medicinais, pecuária e veterinária (NEVES; NOGUEIRA 1996). Segundo Martinez (2002), o uso do nim tem sido utilizado e documentada por centenas de anos na medicina indiana, todas as partes das plantas têm os mais variados usos: antissépticos, antimicrobianos, nos distúrbios urinários, problemas intestinais, doenças respiratórias, reumatismo, ulceras, sífilis crônica, doenças de pele e no couro cabeludo. Possui ação repelente contra moscas, mosquitos, piolhos e carrapatos, as folhas e o óleo tem sido utilizado como cremes cicatrizantes e assepsia de ferimentos, vermífugo e como componente no preparo de rações. O presente trabalho tem por objetivo avaliar a possível citotoxicidade do óleo de Azadirachta indica A. Juss (nim), utilizando como sistema teste as células meristemáticas de raiz de Allium cepa L. REFERENCIAIS TEORICO-METODOLÓGICO

3 O óleo de nim atua diretamente sobre as larvas de insetos tendo ação repelente e antialimentar, inibindo seu crescimento, metamorfose e também sobre todo o ciclo biológico (MOSSINI; KEMMELMEIER,2005). O teste de Allium cepa vem sendo utilizado desde 1938 para avaliar os efeitos genotóxicos dos produtos químicos em cromossomos nos meristemas radiculares, seu cariótipo é pequeno, consiste em 8 pares de cromossomos. Cada bulbo fornece grande quantidade de células, sustentando sua utilização para análise de citotoxicidade (FISKEJO, 1997). Por ser de fácil manuseio e requerer um custo tempo para a concretização e obtenção de resultados o sistema do Aliium cepa é utilizado com frequência, demostrando ser um sistema eficiente na detecção de substancias mutagênicas e eficiente para observação dos efeitos dos agentes químicos em cromossomos e sobre a divisão celular (FISKEJO, 1994). Este método já foi utilizado em pesquisas semelhantes de PERON (2009) e SILVA (2010), as cebolas de tamanho uniformes foram adquiridas de uma fonte comercial e os bulbos colocadas para enraizar em um becker com água em temperatura ambiente, após 4 dias obtivemos raízes com aproximadamente 1,5 cm de comprimento. Para o teste as unidades de A. cepa foram divididas em 2 grupos (controle e tratamento) em seguida foram colocadas para germinar sobre frascos de 50 ml. No grupo controle (Co) a parte inferior esteve mergulhada em água destilada, já o grupo tratamento (Tr) a parte inferior permaneceu submersa em soluções de diferentes concentrações de nim. Por volta de 72h depós o início do teste, os meristemas foram coletados com aproximadamente 1cm de comprimento, lavados em agua destilada e hidrolisados em solução de HCL 1 N por 10 minutos em banho-maria a 60 Cº, o resfriamento dos tubos sucedeu-se em água corrente. A coloração seguiu o método de MENEGUETTI et.al 2011, os meristemas foram colocados sobre a lâmina e corados com o kit Panótico Rápido LB composto por três soluções: triarilmetano a 0,1%, xantenos a 0,1% e tiazinas a 0,1%, foram adicionadas 3 gotas de cada solução seguindo a sequência descrita acima com um intervalo de 2 minutos entre um e outro.

4 As lâminas foram cobertas com a lamínula e envoltas em papel filtro, e, seguida com foi pressionado o polegar contra a lamínula para que as raízes fossem esmagadas. A análise das lâminas contendo as metáfases mitóticas foi realizada com o uso de microscópio OlympusTM, iluminação de campo claro, usando a objetiva de 100 X (imersão a óleo). Para avaliar as células com alteração estruturais e determinação do Índice Mitótico (IM), foram utilizados cinco bulbos para cada controle, e tratamento, sendo analisados 100 células por bulbo, totalizando 1000 células por grupo com três repetições. Estão sendo avaliadas também a ocorrências de alterações cromossômicas e morfológicas nas células em divisão. As analises estatísticas para os ensaios de citotoxidade do Allium cepa serão submetidos através da comparação das médias por meio do teste t student. Todas as análises serão realizadas no nível de significância de 5%. CONCLUSÃO O presente trabalho pretende verificar a possível ação citotóxica do óleo de nim, os testes preliminares têm demonstrado uma diferença significativa no tempo de crescimento das raízes imersas nas concentrações de nim de 0,5% em relação ao controle. As Lâminas confeccionadas demonstraram uma maior concentração de células em intérfase do grupo tratado quando comparado com o controle e um menor número de células em divisão (Tabela 1). Tabela 1. Avaliação da divisão celular mitótica de Allium cepa em extrato de óleo de nim à concentração de 0,5%. Tratamento Prófase Metáfase Anáfase Telófase Controle 1,8 0,3 0,2 0,7 Nim 0,5% 0,2 0,05 0,01 0,25 % de células em divisão celular mitótica em um total de contagem de 1000 células. Foi observado um efeito citotóxico com relação ao crescimento das raízes que quando imersas no nim, tiveram um tempo muito maior para um crescimento relativamente pequeno.

5 É importante ressaltar que os prováveis dados obtidos a partir de sistemas testes vegetais não podem ser considerados definitivos, já que a substância testada pode apresentar interações diferentes em cada organismo. REFERENCIAS FISKEJO, G. Allium Test II: Assessment of a chemicaol s genotoxic Potential by Recording Aberration. In: Root Tips of Allium cepa L Environ mental Toxicology and Water Quality: An International Journal, nº 9, p FISKEJO, G. Allium test for screening chemicals; evaluation of cytological parameters. In: WANG, W; GORSUCH, J; HUGHES, J. Plants for Evironmental Studies. USA: CRC Press, p Disponível em: <Allium test for screening chemicals; evaluation of cytological parameters>. Acesso em: 20 jul MARTINEZ, S.S. O nim (Azadirachta indica): natureza, usos múltiplos, produção. Londrina: IAPAR, p. MENEGUETTI, D. U. O de et al. Adaptação da técnica de micronúcleo em Allium cepa, para futuras análises de mutagenicidade dos rios da região do vale do Jamari, Rondônia, Amazônia Ocidental. Revista Pesquisa & Criação, Rondônia, v. 10, n. 2, p , MOSSINI, S.A. G; KEMMELMEIER. C. A arvore Nim (Azadirachta indica A. Juss): Múltiplos Usos. Acta Farmacéutica Bonaerens, [S.I], v. 24, p.39-48, dez NEVES, B. P.; NOGUEIRA, J.C.M. Cultivo e utilização do nim indiano (Azadirachta indica A. Juss). Goiânia: Embrapa, p. PERON, A. P.; CANESIN, E. A.; CARDOSO, C. M. V. Potencial mutagênico das águas do Rio Pirapó (Apucarana, Paraná, Brasil) em células meristemáticas de raiz de Allium cepa L. Revista Brasileira de Biociências. Porto Alegre, 7. Maio SILVA, L. P; BOSSO, A.A; CARDOSO, S. C. Avaliação da Citotoxicidade da Própolis em Células Meristemáticas de Allium cepa. Unopar Cientifica Exatas e Tecnologia. Londrina, v. 9, n.1, p , Nov