Efeito de Diferentes Concentrações de BAP e Tipos de Explantes na Indução de Calo em Nim Indiano.

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1 Efeito de Diferentes Concentrações de BAP e Tipos de Explantes na Indução de Calo em Nim Indiano. Kicia Karinne Pereira Gomes 1 ; Giuseppe Serra Seca Vieira 2 ; Ana da Silva Ledo 3 ; Arie Fitzgerald Blank 4 Bolsista PIBIC/CNPq convênio Embrapa Tabuleiros Costeiros, CP. 44 CEP , Aracaju-SE; kicia@cpatc.embrapa.br Bolsista FAP-SE e estagiário da Embrapa Tabuleiros Costeiros; giuseppe@cpatc.embrapa.br Eng. Agr., D. Sc. pesquisadora da Embrapa Tabuleiros Costeiros; analedo@cpatc.embrapa.br Eng. Agr., D. Sc. Professor da Universidade Federal de Sergipe, Av. Marechal Rondon s/n CEP São Cristóvão-SE. arie.blank@terra.com.br RESUMO O nim indiano (Azadirachata indica A. Juss) é uma espécie arbórea da família Meliceae com propriedades medicinais e bioinseticidas. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito de diferentes concentrações de BAP e tipos de explantes na indução de calo. Segmentos caulinares e nodais obtidos de plantas adultas foram cultivados em meio de cultura MS suplementado com diferentes concentrações de BAP. Na ausência de BAP o segmento nodal apresentou 75% de explantes com formação de calo quando comparado com o segmento caulinar (18,75%). Entretanto, o segmento caulinar obteve 93,75; 87,50 e 81,25% de calogênese na presença de 0,4; 0,6 e 0,8 mg.l -1 de BAP, respectivamente. Para a indução inicial de calos em segmentos nodais a presença de BAP no meio de cultura é dispensável e para segmentos caulinares recomenda-se a presença de BAP na faixa de 0,4 a 0,8 mg.l -1 de BAP. Palavras-chaves: Azadirachata indica A. Juss, azadirachtina, micropropagação, cultura de tecidos ABSTRACT Effect of different concentrations of BAP and explant types in the callus induction of neem tree. The neem tree (Azadirachata indica A. Juss) is an arboreal species of the Meliaceae family with medicinal and biopesticidal properties. The present work had as objective to evaluate the effect of different concentrations of BAP and explant types in the callus induction. Nodal and stem

2 segments obtained from adult plants were cultivated on Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with different concentrations of BAP. In the absence of BAP the nodal segment presented 75% of explants with callus formation when compared with the stem segment (18.75%). However, the caulinar segment showed larger callus induction 93.75; and 81.25% in the presence of 0.4 ; 0.6 and 0.8 mg.l -1 of BAP, respectively. Keywords: Azadirachata indica A. Juss, azadirachtin, micropropagation, tissue culture INTRODUÇÃO O nim indiano (Azadirachta indica A. Juss) é uma espécie arbórea da família Meliaceae com propriedades medicinais e bioinseticidas. Há mais de dois mil anos o nim é utilizado na Índia para controle de nematóides, fungos, bactérias e insetos pragas. Como planta medicinal é indicada para o controle de tosse, febre, helmintoses, perda de apetite, entre outras (Scalize, 2003). A planta apresenta uma grande quantidade de substâncias químicas. Desses componentes, com atividade biológica, o mais ativo é a azadirachtina, que, em altas concentrações, causa a morte de insetos (Martinez, 1998). Existem na literatura poucas informações sobre a aplicação de métodos de cultura de tecidos para a clonagem e produção de compostos metabólicos de nim. O estabelecimento de culturas de calos é um importante passo para futuros estudos da organogênese, embriogênese somática e suspensões celulares. Zypman et al. (1997) realizaram experimentos empregando métodos de cultura de tecidos para a produção de bioinseticida em nim indiano. Bioensaios executados para avaliar a eficácia de extratos de folhas, calos e suspensão de células in vitro, demonstraram que todos os extratos foram eficazes no controle de Scheostocerca gregaria, indicando que o emprego de tal técnica para a produção de extratos de nim é possível. Este estudo teve como objetivo avaliar o efeito de diferentes concentrações de BAP e tipos de explantes na indução de calo em nim indiano. MATERIAL E MÉTODOS

3 O experimento foi desenvolvido no Laboratório de Biotecnologia Vegetal da Embrapa Tabuleiros Costeiros. Foram utilizados segmentos caulinares e nodais de, aproximadamente, 0,5 cm, obtidos a partir de ramos jovens de plantas adultas. Os explantes foram lavados em água corrente por 10 minutos e, em seguida, submetidos ao procedimento de assepsia em câmara de fluxo laminar, onde foram imersos em álcool 70% (v/v) por dois minutos, em hipoclorito de sódio a 2% por 15 minutos e lavados três vezes com água destilada estéril. Os explantes foram inoculados em meio de MS suplementado com 3% de sacarose, 100 ml.l -1 de cisteína e com as seguintes concentrações de Benzinoaminopurina (BAP): 0,0 mg.l -1 ; 0,2 mg.l -1 ; 0,4 mg.l -1 ; 0,6 mg.l -1 ; 0,8 mg.l -1 e 1,0 mg.l -1. O experimento foi instalado em delineamento inteiramente casualizado em esquema fatorial 6 x 2 (6 concentrações de BAP x 2 tipos de explantes) com oito repetições, sendo que cada unidade experimental foi constituída de quatro frascos contendo três segmentos cada. O meio de cultura foi previamente autoclavados a 120 ºC durante 20 minutos. As culturas foram mantidas em sala de crescimento na ausência de luz, com temperatura de 26 ºC ± 2 e umidade relativa do ar em torno de 70%. A porcentagem de explantes com formação de calo friável foi avaliada aos 40 dias após a inoculação. Os dados foram transformados para x+0,5, submetidos à análise de variância e as médias comparadas utilizando-se o teste de Tukey a 5%. RESULTADOS E DISCUSSÃO O início de formação de calos friáveis, na região do ferimento promovido pelo corte, foi observado aos 20 dias após a inoculação (Figura 1). Houve interação significativa entre as concentrações de BAP e o tipo de explante para a porcentagem de explantes com calo (Tabela 1). Não houve diferença significativa entre as concentrações de BAP na indução de calos em segmentos nodais. Na ausência de BAP o segmento nodal apresentou alta formação de calo (75%) quando comparado com o segmento caulinar (18,75%), conforme a Tabela 2. Provavelmente, esse explante apresente uma maior concentração endógena de hormônios, o que favoreceu a indução de calo mesmo na ausência de BAP. Entretanto, o segmento caulinar mostrou maior calogênese na presença de BAP. Os tratamentos com 0,4; 0,6 e 0,8 mg.l -1 de BAP não diferiram entre si e promoveram 93,75, 87,50 e 81,25% de formação calo, respectivamente (Tabela 2). Sureerat (1991), estudando o

4 efeito de diferentes concentrações de BAP em diferentes explantes de nim indiano, observou a formação de numerosos brotos em tecido cotiledonar de 16,3 a 72,9%, quando os embriões foram cultivados em 10 e 50 M de BAP, respectivamente. Para a indução inicial de calos em segmentos nodais a presença de BAP no meio de cultura é dispensável e para segmentos caulinares recomenda-se a presença de BAP na faixa de 0,4 a 0,8 mg.l -1 de BAP. LITERATURA CITADA MARTINEZ, S.S.; LIMA, J. de; BOIÇA Jr., A.L. Avaliação agronômica e fitoquímica de neem, Azadirachta indica, de diferentes procedências em vários locais das regiões Sul e Sudeste do Brasil. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE ENTOMOLOGIA, , Rio de Janeiro. Resumos..., Rio de Janeiro: Sociedade Entomológica do Brasil, P MURASHIGE, T.; SKOOG, F. A revised medium for rapid growth and biossays with tobacco tissue cultures. Physiologia Plantarum, Copenhagen, v. 15, p , ZYPMAN, S.; ZIV, M.; APPLEBAUM, S.; ALTMAN, U. Tissue culture methods and cloning of the neem tree (Azadirachata indica) for bioinsective production. Acta Horticulturae, Leuveni, p , SUREERAT, K. Tissue culture of neem (Azadirachata indica). Seedlings. Bangkok, 1991, 62 p. SCALIZE, F.E. Indução e detecção de azadirachtina em calos de Azadirachta indica Adr. Juss. (Nim) f. Tese (Mestrado em agronomia) - Unesp, Jaboticabal-SP.

5 Figura 1. calo friável de nim indiano aos 40 dias após a inoculação. Tabela 1. Resumo da análise de variância da porcentagem de explantes com calo em função da concentração de BAP e tipo de explante de nim indiano. Aracaju-SE, Fontes de Variação GL SQ QM F BAP 5 192, ,5712 2,559* Explante 1 88, ,0629 5,843* BAP X Explante 5 261, ,3800 3,475** Erro , ,0724 CV (%) 61,39 ** significativo a 1% pelo teste F. Tabela 2. Médias da porcentagem de explantes com calo em nim indiano aos 40 dias após a inoculação em função da concentração de BAP e do tipo de explante. Aracaju, SE, 2004.

6 Tipo de Explante Concentração de BAP (mg.l -1 ) 0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 Segmento 18,75 bb 56,25 aab 93,75 aa 87,50 aa 81,25 aa 62,50 aab caulinar Segmento nodal 75,00 aa 25,00 aa 75,00 aa 37,50 ba 62,50 aa 25,00 ba Médias seguidas de mesma letra, maiúscula na linha e minúscula na coluna, não diferem entre si, pelo teste de Tukey a 5% de significância.