INFLUÊNCIA DA DESINFESTAÇÃO E MEIO DE CULTURA NA GERMINAÇÃO E DESENVOLVIMENTO IN VITRO DE Prosopis affinis Sprenger 1

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1 INFLUÊNCIA DA DESINFESTAÇÃO E MEIO DE CULTURA NA GERMINAÇÃO E DESENVOLVIMENTO IN VITRO DE Prosopis affinis Sprenger 1 ROCHA, Bruna Nery 2 ; LÖBLER, Lisiane 2 ; MARTINS, Carlos Roberto 3 1 Trabalho de Pesquisa _PUCRS 2 Alunas de Pós graduação em Agrobiologia (UFSM), Santa Maria, RS, Brasil 3 Pesquisador da Embrapa Tabuleiros Costeiros, Aracaju - SE Brasil. bruna_nery_rocha@hotmail.com; lisilobler@gmail.com; martins@cpatc.embrapa.br RESUMO A pesquisa visou observar a influência da desinfestação e do meio de cultura na germinação e desenvolvimento in vitro de Prosopis affinis Sprenger. As sementes submetidas à superação de dormência foram desinfestadas utilizando a imersão das sementes em solução de álcool a 70% durante 1 minuto, lavagem em água destilada esterilizada e imersão em hipoclorito de sódio a 2% durante 15 minutos. Os meios MS ou WPM foram solidificados com 7 g.l -1 de ágar e suplementados com 30 g.l -1 de sacarose, com ph ajustado para 5,8. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado utilizando 25 repetições por tratamento. Os resultados foram submetidos à análise estatística pelo teste DMS (5% de probabilidade) utilizando o programa WinStat. A utilização do meio WPM proporciona maior crescimento em altura de plântulas de Inhanduvá cultivadas in vitro, não havendo interferência significativa do meio com relação à contaminação dos explantes. Palavras-chave: Inhanduvá; sementes; MS; WPM. 1. INTRODUÇÃO A espécie Prosopis affinis Spreng. pertence a familia Fabaceae, estando presente significativamente dentro dos domínios do Parque Estadual do Espinilho localizado a sudoeste do estado do Rio Grande do Sul (SECRETARIA DA COORDENAÇÃO E PLANEJAMENTO, 2006). Considerado por Marchiori et al. (1985) como um ecossistema sensível, devido a intervenção antrópica e degradação crescente ocasionada pela criação de gado no local e nas proximidades. 1

2 Possui potencial para reflorestamento que consiste nas suas características de resistência à seca e a produção de madeira de qualidade para variados fins, além da produção de vagens considerando seu valor nutritivo e frutificação na época mais seca do ano (RIBASKI, 2001). Partindo da vulnerabilidade do Inhanduvá na região, são necessários estudos para sua conservação, visto que há poucas pesquisas que focam esta Fabaceae. Assim intensifica-se a necessidade de conhecimento sobre as formas de propagação. Um método que vem sendo utilizado e apresenta eficiência é a micropropagação, mas espécies lenhosas apresentam dificuldades para o estabelecimento in vitro, principalmente se for utilizado material vegetal proveniente de plantas adultas, pois podem apresentar infestação interna ou externa por microrganismos. Por isso, a utilização de plântulas germinadas in vitro, em condições assépticas, torna-se mais vantajosa (SKIRVIN, 1981). Corder & Borges Junior (1999) consideram que diversos fatores podem afetar o potencial germinativo das sementes promovendo a formação de plântulas anormais, dentre eles, a presença de microrganismos, especialmente fungos e bactérias, fazendo-se necessário utilizar métodos de desinfestação das sementes para germinação in vitro. Assim, a pesquisa visou observar a influência da desinfestação e do meio de cultura na germinação e desenvolvimento in vitro de Prosopis affinis Spreng. 2. METODOLOGIA O experimento foi conduzido no Laboratório de Cultura de Tecidos da PUCRS Campus Uruguaiana. As sementes foram previamente submetidas à superação de dormência utilizando-se do corte oposto à micrópila com imersão em água destilada a temperatura de 20 C durante 20 minutos seguindo método mais adequado para superação de dormência da espécie (ROCHA et al., 2009). As sementes foram submetidas à assepsia em câmara de fluxo laminar com a imersão das sementes em solução de álcool a 70% durante 1 minuto, lavagem em água destilada esterilizada e imersão em hipoclorito de sódio a 2% durante 15 minutos. Os meios MS Murashigue e Skoog, (1962) ou WPM (Wood Plant Medium) foram solidificados com 7 g.l -1 de ágar e suplementados com 30 g.l -1 de sacarose, o ph foi ajustado para 5,8 com NaOH 0,1N ou HCl 0,1N, antes da inclusão do ágar e da autoclavagem (1atm, 120 C, 20 min). Após a inoculação das sementes os frascos foram expostos a fotoperíodo de 16 horas de luz e intensidade luminosa de 35 μmol m -2 s -1 fornecida por lâmpadas fluorescentes 2

3 branca-frias. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado utilizando 25 repetições por tratamento. Após 25 dias da inoculação foram avaliadas a porcentagem de germinação, contaminação fúngica e contaminação bacteriana. Aos 45 dias de cultivo foram avaliados o número de folhas, comprimento da radicula e comprimento da plântula. Os resultados foram submetidos à análise estatística pelo teste DMS (5% de probabilidade) utilizando o programa WinStat. 3. RESULTADOS E DISCUSSÕES As sementes inoculadas em meio MS ou WPM apresentaram 100% de germinação, sendo que as submetidas ao WPM apresentaram apenas 25% de contaminação fúngica (Tabela 1), confirmando assim a eficiência da assepsia durante 15 minutos em hipoclorito de sódio 2% estabelecido por Rocha et al. (2009), sendo que o hipoclorito de sódio é considerado como um potente oxidante e sua ação pode resultar em modificações nas propriedades das membranas celulares do tegumento ou no fornecimento de oxigênio adicional para a semente, aumentando, dessa forma, a porcentagem de germinação (HSIAO & QUICK, 1984). Lédo et al. (2007) obtiveram altos índices de germinação em sementes de mangabeira (Hancornea speciosa Gomes) utilizando o meio MS, bem como a ausência de contaminação das sementes. Conforme Junior et al. (2009) em sementes de Teca (Tectonia grandis L. f.) são necessários 40 minutos em hipoclorito de sódio 2,5%, já para as sementes de Inhanduvá são necessários apenas 15 minutos de imersão em hipoclorito de sódio 2% para que se obtenham sementes assépticas in vitro. Maiores porcentagens de germinação das sementes de Teca in vitro ocorreram nos meios MS e WPM na composição original de sais. O número de folhas e comprimento da radícula das plântulas dos meios utilizados não diferiram significativamente. Quanto ao comprimento das plântulas as que foram submetidas ao meio WPM apresentaram média de 2,11 cm, diferindo significativamente das submetidas ao meio MS que apresentaram média de 1,93 cm (Tabela 2). Nery et al. (2008) considera que o meio MS não tem se mostrado satisfatório em espécies lenhosas, alguns casos, tendo-se observado que composições mais diluídas em macronutrientes tiveram melhor desempenho. O meio de cultura WPM, que significa Wood 3

4 Plant Medium LLOYD & McCOWN, (1981), geralmente é utilizado em espécies lenhosas quando o meio MS não é eficiente. Conforme Jesus et al. (2010) o meio MS é menos indicado na proliferação de brotos da cv. Catuaí Vermelho (Coffea arábica), sendo que o WPM apresentou melhores resultados. Considera-se a variação das concentrações de NO -3 e NH +4 entre os meios MS e WPM, sendo o meio MS é mais concentrado de macronutrientes, com 60 mmol de concentração destes dois componentes enquanto o WPM é constituído de 14,68 mmol dos mesmos. Assim a forma e a concentração do nitrogênio presente podem influenciar na síntese de citocininas endógenas ocasionando diferentes respostas no desenvolvimento dos explantes. Tabela 1: Porcentagens de germinação, contaminação fungica e contaminação bacteriana em sementes de Inhanduvá submetidas a assepsia com álcool durante 1 minuto, hipoclorito de sódio a 2% durante 15 minutos e inoculação em meios WPM ou MS. Tratamentos (%) Germinação (%) Contaminação Fungica 15m. WPM 100% 25% 0% 15m. MS 100% 0% 0% (%) Contaminação Bacteriana Tabela 2: Médias de números de folhas, comprimento da radícula e comprimento das plântulas submetidas a MS e WPM. Comprimento da Comprimento da Tratamentos Nº Folhas Radícula (cm) Plântula (cm) MS 2,49 a 4,63 a 1,93 b WPM 2,51 a 4,68 a 2,11 a CV% 25,16 21,40 21,50 *Médias seguidas pela mesma letra não diferem entre si pelo teste DMS (5% de probabilidade). 4. CONCLUSÃO Sementes de Inhanduvá (Prosopis affinis Sprenger) apresentam alto índice de germinação in vitro em meio de cultura MS ou WPM. O meio de cultura WPM é o mais adequado para a obtenção de maior crescimento em altura das plântulas in vitro. REFERÊNCIAS 4

5 CORDER, M. P. M. & JUNIOR, N. B. Desinfestação e Quebra de Dormência de sementes de Acacia mearnsii DE WILD. Ciência Florestal, v. 9, n. 2, HSIAO, A. I.; QUICK, W. A. Actions of hypoclorite and hydrogen peroxide on seed dormancy and germination of wild oats, Avena fatua L. Weed Research, Oxford, v. 24, p , JESUS, A. M. S.; CARVALHO, S. P.; VILLA, F.; PASQUAL, M.; CARVALHO, M. Desenvolvimento in vitro de brotações de cafeeiro em diferentes meios de cultura e reguladores de crescimento de planta. Scientia Agraria, Curitiba, v.11, n. 6, p , nov./dez., JUNIOR, P. C. P. F.; NAGAO, E. O.; PEREIRA, J. E. S. Estabelecimento, germinação e multiplicação in vitro de teca (Tectona grandis L. f.) a partir de genótipos da Amazônia Sul-Ocidental. Scientia Forestalis, Piracicaba, v. 37, n. 84, p , dez, LÉDO, A. S.; SECA, G. S. V.; BARBOZA, S. B. S. C.; JUNIOR, J. F. S. Crescimento inicial de mangabeira (Hancornia speciosa Gomes) em diferentes meios de germinação in vitro. Ciências Agrotécnicas, Lavras, v. 31, n. 4, jul./ago., MARCHIORI, J. N. C.; LONGHI, S. J. & GALVÃO, L. Composição Florística e Estrutura do Parque de Inhanduvá no Rio Grande do Sul. Revista Centro de Ciências Rurais, n. 15, p , set MURASHIGE, T.; SKOOG, F. A Revised Medium for Rapid Growth and Bioassays with Tobacco Tissue Cultures. Physiologia Plantarum, Copenhagen, v. 15, n.1, p , NERY, M. C.; CARVALHO, M. L. M.; OLIVEIRA, L. M.; NERY, F. C.; SILVA, D. G. Germinação in vitro e ex vitro de embriões/sementes de Tabebuia serratifolia (VAHL) NICH. Revista Cerne, Lavras, v. 14, n.1, p. 1-8, RIBASKI, J. Potencial del Algarrobo (Prosopis juliflora) en Sistemas Silvopastoriles en la Región Semiárida de Brasil. II Conferencia Electronica Agroforesteria para la Producción Animal en America Latina (FAO-CIPAV), 25 p. out., ROCHA, B. N.; MARTINS, C. R.; MISSIO, E. L. Superação de dormência e germinação de sementes de Inhanduvá (Prosopis affinis) Sprenger. Revista da FZVA. Uruguaiana, v.16, n. 2, p ,

6 SECRETARIA DA COORDENAÇÃO E PLANEJAMENTO. Projeto Conservação da Biodiversidade como Fator de Contribuição ao Desenvolvimento do Estado do Rio Grande do Sul, Resumo do Projeto, 2006, 15p. Disponível em: < SKIRVIN, R. M. Fruticulture crops. In: CONGER, B. V. Cloning agricultural plants via in vitro techniques. Boca Raton: CRC Press, p ,