PROPAGAÇÃO CLONAL IN VITRO DO GENÓTIPO CSRN 142 DE Ricinus communis L. UTILIZANDO O FITORREGULADOR TIDIAZURON*

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1 PROPAGAÇÃO CLONAL IN VITRO DO GENÓTIPO CSRN 142 DE Ricinus communis L. UTILIZANDO O FITORREGULADOR TIDIAZURON* Carla Sibere Nogueira Ribeiro 1 ; Humberto Silva 2 ; Nara Wanderley Pimentel 2 ; Priscila Simone Ribeiro Aires 2 ; Lívia Wanderley Pimentel 2 ; José Wellington do Santos 3 e Julita Maria Frota Chagas Carvalho 3. 1 Universidade Federal Rural de Pernambuco, carlasibere@gmail.com, 2 Universidade Estadual da Paraíba, 3 Embrapa Algodão, julita@cnpa.embrapa.br. RESUMO - A propagação clonal in vitro é uma técnica biotecnológica eficiente na multiplicação de genótipos, aumentando-lhes a frequência de transformação através da indução de organogênese. O objetivo deste trabalho foi induzir a proliferação de clones no genótipo de mamona CSRN 142, determinando o melhor tratamento suplementado com o fitorregulador Tidiazuron (TDZ), no explante gema apical. Na desinfestação das sementes fez-se uso de soluções de hipoclorito de sódio a 2,5% de cloro ativo. Na indução de múltiplos clones, utilizou-se o meio de Murashige e Skoog (MS), suplementado com o TDZ nas concentrações 0,0 (testemunha); 0,5; 1,0; 2,0; 5,0 e 10,0 mg.l -1, com 15 frascos, cada um contendo três explantes por frasco, em um delineamento inteiramente casualizado. As avaliações foram realizadas após 45 dias de cultivo, analisando-se o número de clones por explante (NCE). Constatou-se que a concentração de 0,5 mg.l -1 de TDZ proporcionou a maior capacidade organogênica, alcançando-se no explante gema apical a melhor média com 16,9 clones. Verificou-se que o TDZ foi eficaz na indução de clones do genótipo estudado. INTRODUÇÃO A mamoneira (Ricinus communis L.), originária da Índia, foi importada para o Brasil no século XVI, sendo uma das principais oleaginosas do mundo, cujo produto de maior importância para a industrialização, o óleo, é um dos mais versáteis da natureza (TÁVORA, 1982). A mamona é um arbusto perene, heliófila, que pertence à classe Dicotiledoneae, ordem Geraniales, família Euphorbiaceae, gênero Ricinus e espécie R. communis (MOSHKIN, 1986), sendo também chamada, em algumas regiões do Brasil, de carrapateira, baforeira, baga, rícino e palma-decristo. Segundo Alves (2004), o processo de organogênese é complexo, com atuação de múltiplos fatores externos e internos, envolvendo interação entre fonte de explante, meio de cultura e fatores do ambiente. Dependendo também da ação de reguladores de crescimento exógenos, em particular auxinas e citocininas e da habilidade do tecido em responder a essas mudanças hormonais, durante o período de cultivo (SUGIYAMA, 1999). A propagação clonal in vitro tem sido uma técnica bastante utilizada, pois oferece vantagens de

2 manutenção de genótipos e fenótipos de híbridos, mutações genéticas selecionadas e excelente estado fitossanitário das plantas obtidas. O objetivo deste trabalho foi induzir a proliferação de clones no genótipo de mamona CSRN 142, determinando o melhor tratamento suplementado com o fitorregulador Tidiazuron (TDZ), no explante gema apical. MATERIAL E MÉTODOS Para desinfestação das sementes do genótipo CSRN 142, lavou-se as sementes, em seguida retirou-se o tegumento destas, sendo imersas em solução de hipoclorito de sódio a 2,5% de cloro ativo e adicionando 1mL de Tween 20 para cada 100 ml de solução, durante 20 minutos. Posteriormente, foram lavadas quatro vezes em água bidestilada estéril, onde permaneceram imersas na última água por 24h. Na obtenção da planta matriz, os eixos embrionários foram excisados e inoculados em meio MS (MURASHIGE e SKOOG, 1962) suplementado com 30 g.l -1 de sacarose e 0,55% de ágar e o ph ajustado para 5,7 antes da autoclavagem à 120ºC. Em seguida os tubos de ensaio foram fechados com tampa de polipropileno e vedados com fitafilme. As culturas permaneceram no escuro por horas, e posteriormente foram mantidas durante 25 dias a º C, com um fotoperíodo de 16h de luz/8h de escuro e intensidade luminosa de 30 µ mol m 2 s 1, até a obtenção da planta matriz. Para a indução de múltiplos clones, na câmara de fluxo laminar e com auxílio de instrumentos cirúrgicos esterilizados, os explantes gema apical foram excisados e inoculados em meio básico MS, suplementado com a citocinina TDZ, conforme os tratamentos: T 0 (MS + 0,0 de TDZ) Testemunha; T 1 (MS + 0,5 mg.l -1 de TDZ); T 2 (MS + 1 mg.l -1 de TDZ); T 3 (MS + 2 mg.l -1 de TDZ); T 4 (MS + 5 mg.l -1 de TDZ) e T 5 (MS + 10 mg.l -1 de TDZ). Todos os meios foram suplementados com 3% de sacarose e 0,55% de ágar e o ph do meio ajustado para 5,8 antes de autoclavagem à 120ºC. A incubação permaneceu mantida a 25+2ºC, com um fotoperíodo de 16h de luz/8h de escuro e intensidade luminosa de 30 µ mol m 2 s 1. O subcultivo foi realizado a cada 10 dias. Na avaliação, foi considerado o parâmetro NCE (número de clones por explante). Após avaliados, os múltiplos clones foram transferidos para o meio básico sem fitorregulador, e após 15 dias com a giberelina GA 3 na concentração de 0,5 mg.l -1, para o alongamento dos clones. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado. Utilizando-se 15 frascos por tratamento, com três explantes por frasco. Os dados referentes ao número de clones por explante

3 foram submetidos à análise de variância e as médias foram transformadas em x + 1 e analisadas mediante o procedimento PROC GLM do SAS, versão 8.2 (SAS/ STAT ), sendo comparadas pelo teste de Tukey, a 5% de probabilidade. RESULTADOS E DISCUSSÃO Os resultados das médias alcançadas na indução de número de clones por explante (NCE) para todas as concentrações utilizadas no explante gema apical, estão apresentados na Tabela 1, onde constata-se que o T 0 não foi responsivo à indução de multibrotações (Fig. 1A), os tratamentos T 2, T 3, T 4 e T 5 não diferiram significadamente entre si e apresentaram múltiplos clones notáveis, mas o T 1 (MS + 0,5 mg.l -1 de TDZ) apresentou efeito diferencial e promissor neste trabalho, alcançando uma proliferação de 16,9 brotos por explante (Fig. 1B). Observa-se que este composto do grupo das feniluréias, que desempenha atividade de citocinina, o TDZ, apresentou excelentes resultados. Nieuwerk et al.; (1986) verificaram que este hormônio estimulou a multiplicação de partes aéreas da macieira, em concentração bem inferior ao BAP. Segundo Alves et al. (1995), o TDZ é mais ativo na multiplicação que outras citocininas, por causa do aumento da atividade da enzima fosfatase ácida, que promove a interconversão nucleotídeonucleosídeo da estrutura de citocininas endógenas, tornando-as biologicamente mais ativas, podendo manifestar-se como inibidor do crescimento, quando utilizado na mesma concentração de outras citocininas. A partir dos resultados obtidos neste trabalho, percebe-se que a qualidade do explante, o tipo de regulador e as concentrações utilizadas, desempenham importante papel na formação e multiplicação de clones, interferindo na variabilidade, integridade e multiplicação do genótipo de mamona testado. CONCLUSÕES Os tratamentos suplementados com a citocinina TDZ induzem múltiplos clones, no explante gema apical; Tratamentos sem fitorregulador (testemunha) não induzem múltiplos clones; A concentração de 0,5 mg.l -1 de TDZ proporciona melhor capacidade organogênica, com satisfatória proliferação de múltiplos brotos; *Financiamento: Embrapa, CNPq.

4 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ALVES, E. C. S. de C.; XAVIER, A.; OTONI, W. C. Organogênese de explante foliar de clones de eucalyptus grandis x e. urophylla. Pesquisa Agropecuária Brasileira, Brasília, v. 39, n. 5, p , ALVES, R. M. M.; LEMOS, G. B.; COSTA, M. P. Efeitos do thidiazuron na atividade da fosfatase ácida durante a micropropagação da arnica (Solidago microglosa). In: Congresso Brasileiro de Fisiologia Vegetal, 5. Anais... Lavras, p. 196, MOSHKIN, V. A. Flowering and pollination In: MOSHKIN, V. A. Castor. New Delhi: Oxonian Press, 1986, p MURASHIGE, T. SKOOG, F. A revised medium for rapid growth and bio-assays with tobacco tissue culture. Physiologia Plantarum, v.5, p NIEUWKERK, J.D.; ZIMMERMAN, R.H.; FORDHAM, I. Thidiazuron stimulation of apple shoot proliferation in vitro. Hort Science, v.21, p , SAS / STAT User s Guide In: SAS Institute SAS Onlinedoc: Version 8.2, Cary CD - ROM SUGIYAMA, M. Organogenesis in vitro. Current Opinion in Plant Biology, v. 2, p , TÁVORA, F. J. A. F. A cultura da mamona (Ricinus communis). Fortaleza: EPACE, 1982, 111 p. Tabela 1. Valores médios da variável número de clones por explante (NCE) e dados tranformados em Y= x + 1, com relação à gema apical do genótipo de mamona CSRN 142, induzido por diferentes concentrações de Tiadizuron (TDZ). Tratamentos NBE NCE Y= x + 1 T 0 - Murashige e Skoog + 0,0 TDZ 1,0 1,41 c T 1 - MS + 0,5 mg/l de TDZ 16,9 4,19 a T 2 - MS + 1 mg/l de TDZ 8,9 3,13 b T 3 - MS + 2 mg/l de TDZ 8,9 3,13 b T 4 - MS + 5 mg/l de TDZ 11,6 3,52 b T 5 - MS + 10 mg/l de TDZ 10,2 3,35 b F tratamento 39,34 ** Cv% 13,35

5 Médias seguidas das mesmas letras não diferem estatisticamente entre si pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. **Significativo (p < 0,01) pelo teste F A B Figura 1. Indução de organogênese do genótipo de mamona CSRN 142, no explante gema apical. A)Tratamento T 0 (testemunha). B) Multibrotação obtida por tratamento T 1 (MS + 0,5 mg.l -1 de TDZ), com 16,9 clones por explante.