AVALIAÇÃO DA GENOTOXIDADE DE EXTRATOS VEGETAIS ATRAVÉS DO TESTE Allium cepa
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- Nelson Garrido Rijo
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1 AVALIAÇÃO DA GENOTOXIDADE DE EXTRATOS VEGETAIS ATRAVÉS DO TESTE Allium cepa SILVA, J. V. F 1.; SILVA, V. L 1.; TEODORO, J.A. 1 ; CARDOSO, C. F. 1 ; SILVA, C. V. da 2 1 Discentes do Curso de Ciências Biológicas da FAP 2 Docente da Faculdade de Apucarana RESUMO As ervas são mundialmente usadas para os mais diversos tratamentos nas formas de infusão ou extratos. Na agricultura, várias plantas têm sido usadas no controle de insetos praga. No entanto, estudos comprovam que algumas destas plantas podem afetar a saúde humana, podendo causar alterações celulares. As células de raízes de cebola, Allium cepa, são muito utilizadas para identificar alterações nas divisões celulares, uma vez que esta região tem alto poder de divisão mitótica. Palavras chave: extratos naturais, toxinas, mutagênese. ABSTRACT The herbs are universally used for the most diverse range of treatments in the form of infusion or extracts. In agriculture, several plants have been used in the control of pests. However, studies show that some of these plants may affect human health, may cause cellular changes. The cells of the roots of onion, Allium cepa, are widely used to identify changes in cell divisions, since this region has high power of mitotic division. key words: natural extracts, toxins, mutagenesis. Key words: natural extracts, toxins, INTRODUÇÃO Pereira (2009) diz que diversos estudos sobre a genotoxidade de medicamentos são realizados em laboratórios com intuito de identificar agentes
2 mutagênicos presentes em substâncias sintéticas, porém poucos deles buscam realizar testes que identifiquem agentes mutagênicos em extratos naturais. Um exemplo a ser citado é o nim que é cultivado em todos os países da África, na Austrália e América Latina e usado há séculos na Ásia, principalmente na Índia, como planta medicinal( Martinez, 2004). De acordo com Pedrazzi (1997) a carqueja (Baccharis trimera) é largamente utilizada na medicina popular na forma de infusão devido às propriedades anti-inflamatórias, cicatrizantes e digestivas. Silva (et al Craveiro. 1981) relata que o carqueja têm propriedades farmacológicas e são usados como antibacterianos, analgésicos, sedativos, expectorantes, estimulantes e estomáticos na composição de diversos medicamentos. Meneguetti (2011) diz a toxicidade é relacionada com a detecção, composição química e ação biológica de substâncias tóxicas, a toxicidade de uma substância pode ser considerada como a capacidade de ser prejudicial, causando dano grave ao organismo. Jorge (2009) relata que os agentes mutagênicos podem ser detectados, citologicamente pela inibição do ciclo celular, interrupção em metáfases, indução de alterações cromossômicas numéricas e estruturais e de trocas entre cromátides irmãs entre outros. REFERÊNCIAS TEÓRICOS-METODOLÓGICOS. Diante da necessidade de saber a capacidade mutagênica de extratos naturais o teste de alterações mitóticas da raiz de Allium cepa pode ser utilizado de maneira efetiva. Bagatini (2007) afirma que o sistema de teste de Allium é bem aceito para o estudo de efeitos de citotoxicidade de plantas medicinais, porque as suas raízes ficam em contato direto com a substância testada, permitindo a avaliação de concentrações diferentes. O método de avaliação de alterações cromossômicas em raízes de Allium é validado pelo Programa Internacional de Segurança Química (IPCS, OMS) e o Programa Ambiental das Nações Unidas (UNEP) como um eficiente teste para análise e monitoramento in situ da genotoxicidade de substâncias ambientais (Cabrera; Rodriguez, 1999).
3 Para os procedimentos realizados devem ser utilizadas cebolas de tamanho uniforme adquiridas em uma fonte comercial, os bulbos das cebolas devem ser colocadas para enraizarem em um Becker com água por 4 dias, período suficiente para atingirem 1,5 cm de comprimento. As unidades de A. cepa devem ser divididas em 2 grupos (controle e tratamento) em seguida colocadas para germinar sobre frascos de 50 ml. No grupo controle (Co) a parte inferior esteve mergulhada em água destilada, já o grupo tratamento (Tr) a parte inferior permaneceu submersa em soluções dos extratos vegetais. Por volta de 72h depois do início do teste, os meristemas foram coletados com aproximadamente 1cm de comprimento, lavados em agua destilada e hidrolisados em solução de HCL 1 N por 10 minutos em banho-maria a 60 Cº, o resfriamento dos tubos sucedeu-se em água corrente. Em seguida, os meristemas foram colocados sobre a lamina e corados com o kit Panótico Rápido LB que é composto por três soluções: triarilmetano a 0,1%, xantenos a 0,1% e tiazinas a 0,1%, foram adicionadas 3 gotas de cada solução seguindo a sequência descrita acima com um intervalo de 2 minutos entre um e outro (MENEGUETTI et. al. 2011). Em seguida as laminas foram feitas e inseridas as lamínulas, foi feito o esmagamento com o polegar e cobertos com papel filtro. O microscópio de luz com as lentes objetivas focadas em 100 vezes deve então ser utilizado para o cálculo do índice mitótico (IM) como é demostrado a seguir: CONCLUSÃO Os testes citados no trabalho estão sendo realizados no laboratório de Biologia Celular da Faculdade de Apucarana. Os experimentos preliminares com o extrato de óleo de nem tem demonstrado um efeito citotóxico evidenciado pelo crescimento lento das raízes e diminuição do índice mitótico. No grupo controle o índice foi de 42,8, enquanto que no grupo tratado com nem o I.M foi de 5,82. (Figura 1).
4 A B Figura 1. Atraso no crescimento radicular de Allium cepa. Em A, raízes imersas no controle por 72h. Em B, raízes imersas em extrato de óleo de nem a 1% por igual período. REFERÊNCIAS PEREIRA, Andréia V. et al. Atividade anti-fúngica do neem e jurema-preta sobre cepas de Candida spp isolados de vacas com mastite subclínica no Estado de Pernambuco. Rev. bras. farmacogn, João Pessoa, v. 19, n. 4, Dec BAGATINI, Margarete Dulce; SILVA, Antonio Carlos Ferreira da; TEDESCO, Solange Bosio. Uso do sistema teste de Allium cepa como bioindicador de genotoxicidade de infusões de plantas medicinais. Rev. bras. farmacogn., João Pessoa, v. 17, n. 3, Sept Cabrera, G. L., and D. M. G. Rodriguez. Genotoxicity of soil from farmland irrigated with wastewater using three plant bioassays. Mutation Research/Fundamental and Molecular Mechanisms of Mutagenesis 426.2, , 2009.
5 MENEGUETTI, D. U. O.; SILVA, F. C.; A.; POLETTO, P. O.; J. Adaptação da Técnica de Micronúcleo em Allium cepa, para Futuras Análises de Mutagenicidade dos Rios da Região do Vale do Jamari, Rondônia, Amazônia Ocidental. Revista Pesquisa & Criação, v. 10, N. 02, p , MARTÍNEZ, Clara. Characterization of a Bacillus thuringiensis strain with a broad spectrum of activity against lepidopteran insects. Entomologia experimentalis et Applicata, v. 111, n. 1, p , JORGE, V. R. Citotoxidade de Allium cepa em diferentes concentrações de Tuia (Thuja Occidentalis). universidade do estado de mato grosso. pró-reitoria de pesquisa e pós-graduação. 2 a jornada cientifica da Unemat. 05 e 06 de out de PEDRAZZI, A. H. P. et al. Hematological evaluation of carqueja (Baccharis trimera) infusion. Fitoterapia, v. 68, n. 1, p , SILVA, F.G. et al. Influência do processamento pós-colheita e armazenamento na composição química da droga vegetal e do óleo essencial de carqueja (Baccharis trimera) (Less.) DC.]. Rev. bras. plantas med., Botucatu, v. 12, n. 4, Dec
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