UNIVERSIDADE ESTADUAL DE GOIÁS UNIDADE UNIVERSITÁRIA DE SÃO LUIS DE MONTES BELOS TECNOLOGIA EM LATICÍNIOS CARLOS EDUARDO FERREIRA

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1 UNIVERSIDADE ESTADUAL DE GOIÁS UNIDADE UNIVERSITÁRIA DE SÃO LUIS DE MONTES BELOS TECNOLOGIA EM LATICÍNIOS CARLOS EDUARDO FERREIRA DETERMINAÇÃO QUALITATIVA DE RESÍDUOS DE ANTIBIÓTICOS DO TIPO BETA-LACTÂMICOS EM LEITE IN NATURA DA BACIA LEITEIRA DA MICRORREGIÃO DE SÃO LUIS DE MONTES BELOS - GO SÃO LUIS DE MONTES BELOS 2011

2 1 CARLOS EDUARDO FERREIRA DETERMINAÇÃO QUALITATIVA DE RESÍDUOS DE ANTIBIÓTICOS DO TIPO BETA-LACTÂMICOS EM LEITE IN NATURA DA BACIA LEITEIRA DA MICRORREGIÃO DE SÃO LUIS DE MONTES BELOS - GO Artigo apresentado à Universidade Estadual de Goiás como requisito para obtenção do título de Tecnólogo em Laticínios. Orientador: Prof a. Dra. Cláudia Peixoto Bueno SÃO LUÍS DE MONTES BELOS 2011

3 2 CARLOS EDUARDO FERREIRA DETERMINAÇÃO QUALITATIVA DE RESÍDUOS DE ANTIBIÓTICOS DO TIPO BETA-LACTÂMICOS EM LEITE IN NATURA DA BACIA LEITEIRA MICRORREGIÃO DE SÃO LUIS DE MONTES BELOS - GO Artigo apresentado à Universidade Estadual de Goiás como requisito para obtenção do título de Tecnólogo em Laticínios. Aprovado em: / /. BANCA EXAMINADORA Prof a. Dra. Cláudia Peixoto Bueno Orientador Prof a. Dra. Camila Silveira de Melo. UEG Prof a. Dra. Aracele Pinheiro Pales dos Santos. UEG

4 3 Dedico este trabalho ao meu pai e minha mãe que sempre estiveram ao meu lado. E também aos meus amigos e professores que sempre me ajudaram e apoiaram. DEDICO.

5 4 AGRADECIMENTOS A Deus, em primeiro lugar por sempre estar comigo, me iluminando e concedendo bênçãos por cada dia de vida. Mas acima de tudo, agradeço a Ti Senhor, por ter-me socorrido nas horas de aflição, cansaço e angústia, me levantando novamente para batalha. Aos meus pais, José Divino e Aparecida por estarem sempre ao meu lado, me ajudando a superar dificuldades e, pela compreensão durante os momentos em que não fui o melhor filho do mundo. Vocês são os responsáveis por essa vitória! Ao meu grande querido tio Antonio Domingues, pessoa que admiro a simplicidade que tem um homem de bem e que me ajudou muito nas horas difíceis o qual permite conhecer toda minha vida pessoal, família e lar que também retribuiu da mesma forma, não esquecerei nunca. À minha orientadora Dra. Cláudia, pela paciência, serenidade, confiança, e ensinamentos, me mostrando que dificuldades virão, mas que posso superá-las. Vamos em direção a mais uma etapa! A coordenadora do curso Abilene Dias e aos professores que desempenharam com dedicação as aulas ministradas. Agradeço aos meus colegas e amigos que sempre estiveram ao meu lado, aos funcionários da Universidade Estadual de Goiás que sempre estiveram prontos a nos ajudar e a todos aqueles que direta ou indiretamente vivenciaram estes momentos comigo torcendo e acreditando em mim. As minhas jóias raras em que direciono todos meus esforços minhas sobrinhas Brenda e Olivia por me trazer alegria nas horas de descanso revitalizando minhas forças para lutar. Aos meus irmãos Erivelton, Fernanda e Luis Geraldo, que foram prestativos nas horas de dificuldade, por serem meus grandes pilares, e que me deram todo apoio necessário, por acreditar que eu venceria, até mesmo quando pensava em não conseguir. À Universidade Estadual de Goiás, que me proporcionou a realização e concretização deste sonho. A todos da empresa LBR Lácteos Brasil S/A, onde tenho grandes amigos, obrigado pela paciência, atenção, respeito, compreensão, ensinamentos, companheirismo.

6 5 A dúvida é o principio da sabedoria. Aristóteles

7 10 6 DETERMINAÇÃO QUALITATIVA DE RESÍDUOS DE ANTIBIÓTICOS DO TIPO BETA-LACTÂMICOS EM LEITE IN NATURA MICRORREGIÃO DE SÃO LUIS DE MONTES BELOS - GO Carlos Eduardo Ferreira 1 ; Cláudia Peixoto 2 RESUMO: A presença de resíduos de antibióticos em leite é um fator de risco para o consumidor, pode ter efeitos adversos para saúde pública e para a indústria de laticínios. O objetivo desse estudo foi verificar a presença de resíduos de antibióticos pelo kit Charm-test (Hexis científica), que funciona por um princípio de inibição microbiana que detecta resíduos β-lactâmicos entre outros antibióticos utilizados no tratamento de infecções do gado leiteiro. Foram coletadas 720 amostras de leite cru da microrregião de São Luis de Montes Belos GO. Os resultados apresentados mostraram 1,8% de positividade, ou seja, os resíduos β-lactâmicos estavam presentes em 13 amostras do total analisado. A presença de resíduos de antibióticos no leite contribui para a ocorrência do fenômeno de resistência microbiana e possibilita a reações alérgicas nos consumidores deste produto, sendo considerado um grave problema para a saúde pública. A presença de resíduos de antibióticos é extremamente indesejável para as indústrias, haja vista que o resíduo atua na inibição de culturas lácteas sensíveis utilizadas na fabricação de queijos, iogurtes e outros produtos fermentados, alterando sua qualidade e dificultando sua obtenção. As indústrias e o governo devem trabalhar para a conscientização dos produtores no intuito que os mesmos compreendam os fatores que levam à presença de resíduos no leite, e como preveni-los. Palavras-chave: antibióticos, saúde pública, resíduo ABSTRACT: The presence of antibiotic residues in milk is a factor of risk to the consumer, so it can have adverse effects on public health and to the dairy industry. The objective of this study was to verify the presence of antibiotic residues done by charm-test kit(hexis scientific), which works by a principle of microbial inhibition that detects residues b-lactam and other antibiotics used to treat infections in cattle. We collected 720 samples of raw milk from the closest cities around sao luis de montes belos-go. The results showed 1,8% positivity, so the b-lactam residues were present in 13 of total samples analyzed. The presence of antibiotic residues in milk contributes to te occurrence of the phenomenon of microbial resistance and allergic reactions in consumers of this product being considered a very serious problem for the public health. The presence of antibiotic residues is extremely undesirable for the industry, because this residue acts in the inhibition of lactic cultures used in the manufacture of cheese, yogurt and other fermented products changing its quality. The industries and the government should work on the awareness of producers in order to make them understand the factors that lead to residues in milk and how to prevent. Keywords: antibiotics, public health, waste 1 Acadêmico do curso de Tecnologia em Laticínios da UEG, UnU. de São Luís de Montes Belos/GO. < duduveluti18@hotmail.com>. 2 Profª Drª. do Curso Tec. em Laticínios, UEG UnU São Luís de Montes Belos/GO. <vetcpb@gmail.com>.

8 7 LISTA DE TABELAS Tabela - 1 Concentrações de resíduos de antibióticos detectáveis pelo Charm-test comparados com os LMRs tolerados pela Legislação Brasileira.

9 8 LISTA DE FIGURA Figura 1. Figura 2. Figura 3. Unidade CHARM SL/MRL TEST - Chapa aquecedora Interpretação visual dos resultados do kit Charm-test Resultados das análises de leite para pesquisa de antibióticos

10 9 LISTA DE ABREVIATURAS ANVISA Agência Nacional de Vigilância Sanitária DDA Departamento de Defesa Animal DIPOA Departamento de Inspeção de Produtos de Origem Animal IN Instrução Normativa LMRs Limites Máximos de Resíduos MAPA Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento PAMvet Programa de análise de resíduos de medicamentos veterinários em alimentos de origem animal PNCR Plano Nacional de Controle de Resíduos em Produtos de Origem Animal SIF Serviço de Inspeção Federal Kg Quilograma µl Microlitro µg Micrograma

11 10 SUMÁRIO RESUMO ABSTRACT INTRODUÇÃO MATERIAIS E MÉTODOS RESULTADOS E DISCUSSÃO CONCLUSÃO REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS... 17

12 INTRODUÇÃO De acordo com a Instrução Normativa 51 de 2002 do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) - entende-se por leite, sem outra especificação, o produto oriundo da ordenha completa e ininterrupta, em condições de higiene, de vacas sadias, bem alimentadas e descansadas. O leite de outros animais deve denominar-se segundo a sua espécie (BRASIL, 2002). Para Müller (2002), o leite é considerado o mais nobre dos alimentos, por sua composição nutritiva: água 87%, sólidos totais 13%, gordura 3,9%, lactose 4,8% e minerais 0,8%. A origem do consumo de leite e da atividade leiteira no Brasil está ligada à exploração do gado trazido durante o período de colonização. Inicialmente os animais foram utilizados como força de trabalho nos engenhos de cana-de-açúcar, e posteriormente como animais de corte em algumas regiões do país. O consumo de leite até então, era de caráter secundário com poucas vacas sendo mantidas para esta atividade (MIRANDOLA 2006, citado por ALVES, 2006). Nas últimas décadas, qualidade e segurança alimentar têm recebido cada vez mais atenção da população mundial, principalmente em relação a perigos químicos e microbiológicos presentes em alimentos. Apesar de microrganismos patogênicos serem mais comumente ligados a casos de enfermidades por ingestão de alimentos contaminados, a presença de resíduos químicos também é bem comum em todo o mundo. A principal causa da presença de resíduo químico no leite resulta da aplicação de antibióticos no rebanho leiteiro, para a prevenção e/ou tratamento de doenças, com enfoque para as infecções da glândula mamária (mastite). Os antibióticos, segundo Haraguchi (2011), são substâncias derivadas de organismos vivos ou sintetizadas por eles capazes de inibir o crescimento de outros organismos. Existem milhares de antibióticos, porém somente uma parte deles é usada na medicina. Para todo antibiótico existe um período de carência que consiste no prazo de eliminação do antibiótico no leite, após a última aplicação. Este período varia de produto para produto, e de acordo com a via de aplicação que pode ser intramamária, intramuscular ou intravenosa. Sempre que um antibiótico é recomendado para tratamento de vacas em lactação, deve-se estar atento para o

13 12 período de carência. Isto significa que neste período todo o leite da vaca tratada deve ser retirado do consumo. O principal problema é que os produtores não descartam o produto contaminado (NERO et al, 2007). Segundo Brito (2005), existem várias razões que levam à preocupação com resíduos de antibióticos no leite. Entre elas destacam-se o risco a saúde pública e a industrialização de derivados lácteos. Tomazi (2011) afirma que estes resíduos podem ser tóxicos e perigosos para a saúde humana, podendo causar uma série de problemas como reações alérgicas e resistência à antibioticoterapia. Para a indústria o principal problema é a inibição de culturas láteas sensíveis utilizadas na fabricação de queijos, iogurtes e outros fermentados, dificultando sua obtenção ou alterando sua qualidade. A pasteurização tem pouco ou nenhum efeito sobre o conteúdo de resíduos de antibióticos em leite (BRITO, 2005). Segundo Tomazi (2011), os processos térmicos convencionais aplicados no leite não impedem que os resíduos de antimicrobianos cheguem à mesa dos consumidores. O Plano Nacional de Controle de Resíduos (PNCR), instituído pela Instrução Normativa 42/1999, regulamenta os procedimentos para o monitoramento e a investigação dos níveis de resíduos e contaminantes nos setores de carne, mel, leite e pescado. As ações no Ministério da Agricultura para a aplicação do PNCR são desenvolvidas pela Coordenação de Controle de Resíduos e Contaminantes (CCRC), vinculada à Secretaria de Defesa Agropecuária (SDA/MAPA). Suas ações estão direcionadas para se conhecer e evitar a violação dos níveis de segurança ou dos Limites Máximos de Resíduos (LMRs), de substâncias autorizadas, bem como a ocorrência de quaisquer níveis de resíduos de compostos químicos de uso proibido no país. Para isto, são colhidas amostras de animais abatidos e vivos, de derivados industrializados e/ou beneficiados, destinados a alimentação humana, provenientes dos estabelecimentos sob Inspeção Federal SIF (BRASIL, 1999). O uso de medicamentos veterinários em animais produtores de alimentos, cujos resíduos poderiam significar risco à saúde pública, deu início também ao Programa de Análise de Resíduos de Medicamentos Veterinários em Alimentos de Origem Animal - PAMVet em 2002, tendo como primeira matriz de análise o leite bovino. O programa definido pela Resolução nº. 253 de 16/09/03 foi desenvolvido pela Agencia Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA), com o objetivo de operacionalizar sua competência legal de controlar e fiscalizar resíduos de

14 13 medicamentos veterinários em alimentos, conforme determina o inciso II do parágrafo 1º do Art. 8º da Lei nº de 26/01/1999. A implementação do PAMVet é resultado de recomendações originárias de um fórum de discussão promovido pela ANVISA em 2000 sobre resíduos de antibióticos no leite bovino. Este trabalho tem como objetivo avaliar a incidência de resíduos de antibióticos no leite cru da bacia leiteira do município de São Luis de Montes Belos por meio de teste qualitativo de antibióticos do tipo beta-lactâmicos. 2.0 MATERIAIS E MÉTODOS As amostras foram coletadas e analisadas em um laticínio do município de São Luís de Montes Belos no período de julho de 2011 a setembro de As amostras foram coletadas todos os dias, uma por caminhão, diretamente das bocas em fracos plásticos próprios de 250 ml e levados imediatamente ao laboratório físico-químico para realização das análises de rotina. Foram coletadas amostras de 24 cidades todos os dias durante três meses, fazendo um total de 720 amostras. As amostras foram analisadas com o kit Charm-test (Hexis científica), que funciona por um princípio de inibição microbiana, ele detecta resíduos de β- lactâmicos entre outros antibióticos utilizados no tratamento de infecções do gado leiteiro. Para a realização da análise a principio foi ligada a chapa aquecedora de bancada e regulada a temperatura do bloco de ferro para 56ºC, foi ser tolerada uma variação de no máximo + 1 C, pois a mesma não pode ser inferior a 51ºC, por inibir a reação, ou superior a 60ºC por destruir os anticorpos ali presentes. Logo após, os testes (kits comerciais) foram inseridos nas cavidades do bloco, encaixando-os perfeitamente no orifício destinado a eles. Em seguida foi adicionada a amostra de leite muito bem homogeneizada. A homogeneização é fundamental, pois o teor de gordura não pode estar acima de 6%. Foi inserido em cada teste 300 µl, de leite (exatamente o volume da micropipeta que acompanha o kit). O adesivo plástico do teste é levantado e o leite é inserido lentamente na lateral da cavidade do kit até a linha indicada pela seta conforme visualizado na Figura 1.

15 14 Colocação da amostra Figura 1- Unidade CHARM SL/MRL TEST Chapa aquecedora Neste momento, o leite foi absorvido por uma esponja cor laranja contida no kit e logo após é liberado para a reação. O adesivo então foi fechado, o aparelho tampado e o timer da chapa aquecedora ligada. Após oito minutos foi realizada a Interpretação visual dos resultados como pode ser visualizado na Figura 2. Figura 2 - Interpretação visual dos resultados do kit Charm-test Fontes: Adaptado Charm Sciences, Inc., EUA; ANVISA, 2003;

16 15 Análises estatísticas A análise dos dados baseou-se na distribuição de frequência absoluta e relativa com utilização da estatística descritiva. 3.0 RESULTADOS E DISCUSSÃO Das 24 cidades analisadas apenas 5 apresentaram resultados positivos para antibiótico. Das 720 amostras analisadas (100%), foi encontrada a presença de beta lactâmicos em 13 amostras, ou seja, 1,8% de positividade. Em 707 amostras não foi encontrado resíduo de antibiótico, ou seja, 98,2% dentro dos padrões legais vigentes, conforme pode ser visualizado na Figura 3. Figura 3 Resultados das análises de leite para pesquisa de antibióticos. Os resultados apresentados por Nero (2007) tiveram maior incidência, ou seja, 11,4% (24 amostras) apresentaram resultados positivos principalmente na região de Londrina, encontrando também resíduos na da região de Botucatu - SP (8,0%), Viçosa - MG (8,5%) e Pelotas RS (6,0%). Já Nascimento et al. (2001), relataram ter trabalhado com 96 amostras analisadas. Dessas amostras 48 apresentaram substâncias antimicrobianas (50%)

17 16 sendo que 33 amostras (34,8%) apresentaram resíduo de antibióticos do tipo betalactâmicos. Os resultados apresentados por Folly & Machado (2001), também apresentaram resultado superior para a região Norte do Estado do Rio de Janeiro onde entre as 300 amostras de leite analisadas 13 foram positivas, demonstrando uma contaminação de 4,33%. A sensibilidade desse teste para as diferentes substâncias antimicrobianas estão na Tabela 1, assim como os LMRs (Limites Máximos de Resíduos) tolerados pela Legislação Brasileira. Tabela 1. Concentrações de resíduos de antibióticos detectáveis pelo Charm-test comparados com os LMRs tolerados pela Legislação Brasileira. Concentração mínima para Substância antimicrobiana β-lactâmicos positividade no Charm-test (µg/kg) LMR (µg/kg) Penicilina G 3 4 Amoxicilina 6 4 Ampicilina 5 4 Ceftiofur Cefapirina 10 NE* Sulfametazina Sulfadimetoxina Gentamicina NE Oxitetraciclina Tilosina NE Fontes: Adaptado Charm Sciences, Inc., EUA; ANVISA, 2003; *NE = não especificado. Estes resultados só reforçam a necessidade de políticas de melhoria de conscientização dos produtores por parte das indústrias, órgãos de fiscalização competente além da criação e manutenção de políticas já existentes como o PAMVet e PNCR.

18 17 4- CONCLUSÃO - Conclui-se que houve uma pequena porcentagem de resultados positivos, porém, diante dos riscos dos contaminantes químicos, estes resultados são bem significativos para a saúde dos consumidores. - A presença de resíduos de antibióticos no leite contribui para a ocorrência do fenômeno de resistência microbiana e possibilita a reações alérgicas nos consumidores deste produto, sendo considerado um grave problema para a saúde pública. - As indústrias devem trabalhar para a conscientização dos produtores no intuito que os mesmos compreendam os fatores que levam à presença de resíduos no leite, e como preveni-los, pois, a porta de entrada de resíduos de antibióticos e outras substâncias químicas é a produção primária. - Os programas governamentais implantados de caráter educativo e/ou punitivo são de grande importância na luta a favor de um produto seguro à população. 5.0 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ANVISA - Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Programa Nacional de Análise de Resíduos de Medicamentos Veterinários em Alimentos Expostos ao Consumo - PAMVet. Brasília, Disponível em: < Acesso em 01 agosto BRASIL, Instrução Normativa no 51, de 18 de setembro de Aprova os regulamentos técnicos de produção, identidade e qualidade do leite tipo... Diário Oficial da União, Brasília, p. 13, 20 set Seção 1. BRITO, M. A. V. P.;LANGE, C. C. Resíduos de antibióticos no leite. Comunicado técnico 44. Juiz de Fora - MG, dez FOLLY, M. M.; MACHADO, S. C. A. Determinação de resíduos de antibióticos, utilizando-se métodos de inibição microbiana, enzimático e imuno ensaios no leite pasteurizado comercializado na região norte do estado do rio de janeiro, Brasil.Ciência Rural, Santa Maria, v.31, n.1, p.95-98, 2001.

19 HARAGUCHI, T. Antibióticos: classificação geral. Faculdade de ciências farmacêuticas da Universidade São Paulo, Abril de MAPA,2010. Residuos e Contaminantes. Disponivel em: Acesso em 13 de outubro de MIRANDOLA, A. Panorama atual da cadeia produtiva do leite no brasil. Curso de pós-graduação latu sensu em higiene e inspeção de produtos de origem animal e vigilância sanitária de alimentos. Rio de Janeiro, nov MÜLLER, E. E. Qualidade do leite e células somáticas. Anais do II Sul- Leite: Simpósio sobre Sustentabilidade da Pecuária Leiteira na Região Sul do Brasil, Maringá : UEM/CCA/DZO NUPEL, P. Toledo PR, 29 e 30/08/2002. páginas NASCIMENTO, G. G. F. et al. Ocorrência de resíduo de antibiótico no leite comercializado em Piracicaba, SP. Ver. Nutr., Campinas, pag , maio/agosto, NERO L.A et al. Resíduos de antibióticos em leite cru de quatro regiões leiteiras no Brasil. Ciênc. Tecnol. Aliment., Campinas, 27(2): , abr.-jun TOMAZI, T. Efeito do tratamento térmico sobre os resíduos de antibióticos β- lactâmicos. Artigo técnico, qualidade do leite, MilkPoint. Jan