UNIVERSIDADE FEDERAL DE UBERLÂNDIA INSTITUTO DE CIÊNCIAS AGRÁRIAS CURSO DE AGRONOMIA

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1 UNIVERSIDADE FEDERAL DE UBERLÂNDIA INSTITUTO DE CIÊNCIAS AGRÁRIAS CURSO DE AGRONOMIA MORGANA COELHO MAMEDE DETECÇÃO DE Pantoea ananatis EM SEMENTES DE MILHO TRABALHO DE CONCLUSÃO DE CURSO UBERLÂNDIA MG JULHO DE 2015

2 MORGANA COELHO MAMEDE DETECÇÃO DE Pantoea ananatis EM SEMENTES DE MILHO Trabalho de Conclusão de Curso apresentado ao Curso de Agronomia, da Universidade Federal de Uberlândia, para obtenção do grau de Engenheira Agrônoma. Orientadora: Profª. Drª. Nilvanira Donizete Tebaldi UBERLÂNDIA MG JULHO DE 2015

3 MORGANA COELHO MAMEDE DETECÇÃO DE Pantoea ananatis EM SEMENTES DE MILHO Trabalho de Conclusão de Curso apresentado ao Curso de Agronomia, da Universidade Federal de Uberlândia, para obtenção do grau de Engenheira Agrônoma. Aprovado pela Banca Examinadora em 09 de julho de 2015 Profª. Drª. Maria Amelia dos Santos Eng a. Agr a. Lara Caroline B. M. Mota Membro da Banca Membro da Banca Profª. Drª. Nilvanira Donizete Tebaldi Orientadora

4 RESUMO i A cultura do milho (Zea mays L.) tem grande importância no cenário brasileiro, compreendendo todas as regiões do país. Com a expansão das áreas cultivadas, o aumento de doenças foi inevitável, tendo como fatores limitantes de produtividade, as doenças foliares. A mancha branca do milho causada pela bactéria Pantoea ananatis é considerada, atualmente, como uma das principais doenças foliares desta cultura no Brasil, estando presente em, praticamente, todas as regiões produtoras. O presente trabalho teve como objetivo detectar a bactéria P. ananatis em sementes de milho. O experimento foi conduzido no Laboratório de Bacteriologia Vegetal e na casa de vegetação, do Instituto de Ciências Agrárias, da Universidade Federal de Uberlândia. Para detecção da bactéria nas sementes foram utilizadas três amostras de sementes, através da diluição em série e o plaqueamento em três meios de cultura 523, YDC e PA20 com três repetições para cada diluição. Os isolados obtidos foram caracterizados bioquímica e fisiologicamente e pelo teste de patogenicidade no hospedeiro. Na avaliação da supressividade e repressividade dos meios de cultura 523, YDC e meio semi seletivo PA20 não houve diferença significativamente entre eles. Desta forma, o meio semi-seletivo PA20 pode ser utilizado para detecção da bactéria P. ananatis, facilitando sua detecção. A bactéria P. ananatis foi detectada em duas amostras de sementes de milho, os isolados bacterianos caracterizados bioquímica e fisiologicamente e a patogenicidade no hospedeiro foi confirmada, atendendo o postulado de Koch. Este é o primeiro relato da detecção de P. ananatis em sementes de milho Palavras-chave: Etiologia, mancha branca, meio de cultura, Zea mays.

5 SUMÁRIO 1- INTRODUÇÃO REVISÃO DE LITERATURA A cultura do milho A mancha branca do milho Pantoea ananatis Ocorrência de Pantoea ananatis em semente Meio de cultura semi seletivo MATERIAL E MÉTODOS Obtenção do inóculo e preparo da suspensão bacteriana Supressividade e repressividade dos meios de cultura Detecção de Pantoea ananatis em sementes de milho Reações de hipersensibilidade Teste de patogenicidade Caracterização bioquímica e fisiológica dos isolados bacterianos RESULTADOS E DISCUSSÃO Avaliação da supressividade e repressividade dos meios de cultura Detecção de Pantoea ananatis em sementes de milho Isolamento de Pantoea ananatis a partir de extratos de sementes Caracterização bioquímica e fisiológica dos isolados bacterianos CONCLUSÕES REFERÊNCIAS... 15

6 1 1- INTRODUÇÃO A cultura do milho (Zea mays L.) tem grande importância no cenário brasileiro, compreendendo todas as regiões do país. Na safra 2013/2014, o Brasil produziu cerca de 75 milhões de toneladas de milho (CONAB, 2014), sendo o terceiro maior produtor mundial da cultura (USDA, 2014). A produção intensa da cultura do milho exige que sejam feitas semeaduras antecipadas sob irrigação, semeaduras nas primeira e segunda safra (PEREIRA et al., 2005). Com isso, houve uma modificação na dinâmica populacional dos patógenos que prejudicam a cultura do milho, tendo um aumento na incidência e na severidade de doenças nas regiões produtoras dessa cultura (LANZA, 2009). Estima-se que as perdas geradas por doenças chegam a 60% (PEDRO et.al., 2010). Com a expansão das áreas cultivadas o aumento de doenças foi inevitável, tendo como fatores limitantes de produtividade as doenças foliares. Dentre estas cabe ressaltar: mancha-foliar-de-cercospora (Cercospora zea-maydis), míldio (Peronosclerospora sorghi (W. Weston & Uppal); ferrugem (Puccinia polysora (Underw.); ferrugem-tropical (Physopella zeae (Mains); mancha branca do milho (Pantoea ananatis (Serrano) e a podridão-bacteriana (Dickeya zeae = Erwinia chrysanthemi pv. Zeae (Sabet). É difícil afirmar qual ou quais das doenças ocorrentes no milho sejam a mais importante. A incidência de cada doença varia de região para região além do ano agrícola (CASELA et al., 2006). A mancha branca é considerada, atualmente, uma das principais doenças foliares da cultura do milho no Brasil, estando presente em, praticamente, todas as regiões produtoras (COSTA et al., 2010). Folhas com 10 a 20% de severidade da doença apresentam uma redução na taxa fotossintética líquida em torno de 40%, em cultivares suscetíveis, podendo reduzir a produção de grãos em até 60% (GODOY et al., 2001). Os sintomas iniciam-se pelo aparecimento de lesões foliares aquosas com formato circular, do tipo anasarca, de coloração verde-claro que depois se tornam necróticas de cor palha. Em ataques mais severos há coalescência de lesões (FERNANDES; OLIVEIRA, 1997). Os plantios tardios de milho favorecem condições ambientais para o rápido desenvolvimento da doença. O uso de cultivares resistentes e a aplicação de defensivos químicos são indicados para o controle da doença (COSTA et al., 2010).

7 2 A bactéria P. ananatis já foi descrita sendo transmitida pelas sementes de cebola, arroz, capim sudão e trigo (GOSZCZYNSKA et.al, 2006a). Para detecção da bactéria os autores descreveram um meio de cultura semi seletivo, PA 20, o qual reprimi o crescimento de diversos microorganismos saprófitos dando suporte ao crescimento e visualização de P. ananatis. Os meios de cultura semi-seletivos são de fundamental importância para diagnóstico de doenças, estudos epidemiológicos, etiológicos e para a detecção de bactérias em sementes (RABALHO, 2007). A semente é a principal fonte de inóculo do patógeno, levando a ocorrência de epidemias. Assim, o presente trabalho teve como objetivo detectar a presença de P. ananatis em sementes de milho.

8 3 2- REVISÃO DE LITERATURA 2.1 A cultura do milho A produção mundial de milho nos últimos vinte anos teve aumento significativo. Na safra 2013/2014 o Brasil produziu cerca de 75 milhões de toneladas de milho (CONAB, 2014), sendo o terceiro maior produtor mundial da cultura (USDA, 2014). A cultura do milho no Brasil é de grande importância para o agronegócio nacional, além de ser à base de sustentação para a pequena propriedade, devendo ser interpretada sob a ótica da cadeia produtiva ou dos sistemas agroindustriais, uma vez que o milho é insumo para uma centena de produtos (DUETEET al., 2008). O milho é usado em grande escala tanto pela produção de alimento animal (cerca de 60% a 80%) quanto para exportação e consumo humano (OLIVEIRA; BEZERRA, 2013). 2.2 A mancha branca do milho A mancha branca do milho (MBM) foi inicialmente identificada como mancha de Phaeosphaeria, causada pelo fungo Phaeosphaeria maydis (FANTIN, 1994) e anamorfo Phyllosticta sp. Contudo, diversos autores manifestaram a dificuldade em isolar e cumprir os postulados de Koch com este fungo (CERVELATTI et al., 1998, 2002; AMARAL et al., 2002). Foi então que Paccola-Meirelles et al. (2001) isolaram e identificaram a bactéria Pantoea ananatis (sin. Erwinia ananas), a partir de lesões de estágio inicial da mancha foliar de Phaeosphaeria, em uma freqüência de 86% e 77%. Esta bactéria, quando inoculada em plantas de milho reproduziu, em casa de vegetação, sintomas semelhantes aos da doença no campo. A bactéria foi reisolada a partir das lesões, concluindo assim os postulados de Koch. Os autores demonstraram ser a bactéria, o agente causal da doença, e não um fungo como postulado inicialmente. Também, ao avaliar o desempenho de diversos genótipos de milho, previamente selecionados entre suscetíveis e resistentes, quando inoculados com a bactéria, de forma artificial, as reações foram análogas à analisada em condições de campo (PACCOLA- MEIRELLES et al., 2002). A transferência do nome de Erwinia ananas para o Pantoea

9 4 ananas foi proposta por Mergaert et al. (1993) e Truper & Clari, (1997) surgindo o nome Pantoea ananatis. A MBM é caracterizada pelo aparecimento de manchas cloróticas, aquosas do tipo anasarca no limbo foliar que ao se desenvolverem podem adquirir coloração palha (PEDRO et al., 2010). 2.3 Pantoea ananatis Segundo Paccola-Meirelles et al. (2001), a MBM é causada pela bactéria P. ananatis - bactéria Gram-negativa, não esporulante, anaeróbia facultativa, formadora de colônias com crescimento mucoso e de coloração amarelo brilhante quando em meio de cultura. A bactéria possui um mecanismo chamado quórum-sensing que permite comunicação através de uma substância química sinalizadora denominada acilhomoserinas lactonas. Esta substância produz um exopolissacarídeo que protege a célula bacteriana de mecanismos de defesa do hospedeiro e obstrui a circulação da seiva nas folhas que originam o tecido necrosado. Em relação à virulência, o patógeno produz cristais de gelo em temperaturas onde não poderiam ser formados, fenômeno da ice nucleation que em culturas que não toleram o congelamento do meio intercelular faz com que as lesões sejam exteriorizadas; como na cultura do milho (GONÇALVES et al., 2010). De acordo com Sauer et al. (2010), a sobrevivência da bactéria em restos culturais ocorre mesmo em condições desfavoráveis, através de um mecanismo conhecido por latência. Em relação ao tamanho populacional para que a bactéria desenvolva os sintomas em condições controladas, a MBM se desenvolve bem em condições de alta precipitação, alta umidade relativa e baixas temperaturas noturnas (14ºC) do ar. Quanto maior a população bacteriana, maior o número de lesões levando a prejuízos na produção de até 60% (CASELA, et al., 2006). As medidas de controle indicam o uso de híbridos resistentes como BRS 1030 e BRS 1035 (COSTA et al., 2012) sendo que no plantio de cultivares suscetíveis, a utilização de fungicidas tem sido ajustada em produtos pertencentes aos seguintes grupos: triazóis, estrobilurinas, benzimidazol e oxitetraciclin (PEDRO et al., 2010).

10 5 A identificação de P. ananatis na semente como agente causal da mancha branca é de suma importância, visto que esforços para controlar a qualidade comercial das sementes produzidas concentram-se na detecção de fungos, e pouco é conhecido referente à patogenicidade da bactéria (GOSZCZYNSKA et al, 2006a). 2.4 Ocorrência de Pantoea ananatis em semente A bactéria P. ananatis já foi descrita sendo transmitida pelas sementes de cebola, arroz, capim sudão e trigo (GOSZCZYNSKA et al, 2006a). A podridão central das escamas da cebola causada pela P. ananatis foi responsável pela devastação de quase 100% dos campos de produção na Georgia em Foi constatada a transmissão da bactéria pela semente (GOSZCZYNSKA et al, 2006a). Walcott et al. (2002) afirmam que o primeiro surto da podridão central das escamas da cebola na Geórgia, foi introduzido a partir de sementes produzidas na África do Sul. Aproximadamente 90% das culturas exploradas agronomicamente são propagadas por sementes. Todas podem ser afetadas por patógenos, a bactéria P. ananatis é responsável por causar grande variedade de sintomas tanto em plantas monocotiledôneas como dicotiledôneas. Sua ocorrência nestes hospedeiros leva a surtos de doenças esporádicas que resultam em grandes perdas econômicas. Como resultado do aumento da circulação de produtos agrícolas, a extensão desta ameaça aumentou dramaticamente ao longo das últimas duas décadas entre os países (COUTINHO; VENTER, 2009). 2.5 Meio de cultura semi seletivo Os meios de cultura semi seletivos são de fundamental importância para diagnóstico de doenças, estudos epidemiológicos, etiológicos e para a detecção de bactérias em sementes. A avaliação da seletividade dos meios de cultura é o principal critério, a qual pode ser obtida a partir de fontes específicas de carbono e nitrogênio, que são capazes de estimular o crescimento de uma determinada espécie e inibir outra (RABALHO, 2007).

11 6 Considerando a grande quantidade de microorganismos, além do patógeno de interesse, que constituem a flora microbiana associada às sementes, a eficiência do meio semi-seletivo está diretamente relacionada à seletividade exercida pelo mesmo, com alta supressividade para micro-organismos saprófitas e baixa repressividade para bactérias fitopatogênicas que se deseja detectar e/ou quantificar (ROMEIRO, 2001). Dessa forma, entende-se por supressividade a competência que um meio possui de inibir o desenvolvimento da flora microbiota que não o organismo que se espera isolar, e por repressividade a aptidão que um meio tem de inibir o desenvolvimento do organismo que se deseja isolar (FRARE, 2005). O meio semi-seletivo possui como vantagens à facilidade de uso, e o menor custo quando comparado a técnicas imunológicas ou moleculares e, também, a diversidade de amostras que podem ser empregadas, como: solo, água e tecido foliar (TOUSSAINT et al., 2001). Uma das principais medidas de controle de bactérias é o uso de sementes sadias. Assim os meios de cultura semi seletivos devem ser práticos, simples e de fácil execução para a detecção de bactérias nas sementes.

12 7 3- MATERIAL E MÉTODOS O experimento foi conduzido no Laboratório de Bacteriologia Vegetal e na Casa de Vegetação, do Instituto de Ciências Agrárias, da Universidade Federal de Uberlândia no período de março a abril de Obtenção do inóculo e preparo da suspensão bacteriana Os isolados UFU A18 e UFU E43 de Pantoea ananatis, proveniente de folhas de planta de milho de Morrinhos, GO e Uberlândia, MG, respectivamente, pertencentes à coleção de trabalho do Laboratório de Bacteriologia Vegetal do Instituto de Ciências Agrárias da UFU foram cultivados em meio de cultura 523 (KADO; HESKETT, 1970) por 48h. A suspensão bacteriana foi preparada em solução de NaCl 0,85%, e ajustada em espectrofotômetro para OD 550 = 0,5 correspondendo a, aproximadamente, 1x10 10 UFC ml Supressividade e repressividade dos meios de cultura Para avaliação da supressividade e repressividade dos meios de cultura foi realizada diluição em série da suspensão bacteriana do isolado UFU E43 e o plaqueamento nos meios de cultura 523 e YDC e o meio semi seletivo PA20 (20 g de NaCl, 1 g de K 2 HPO4, 1 g de NH 4 H 2 PO 4, 0.2 g de MgSO 4 7H 2 O, 1 ml da solução aquosa a 1.6% de azul de bromotimol, 2 ml da solução aquosa a 0.075% de cristal violeta, 15 g de agar, 1 L de água, ph=8.0 ajustado com 1,0 N NaOH (GOSZCZYNSKA et al., 2006b). Para cada diluição, foram replicadas três placas de Petri. Aos três meios de cultura foi adicionado 0,04 mg L -1 de thiophanato metílico (BOMFETI et al., 2007) para evitar o crescimento de fungos, principalmente para a detecção da bactéria nas sementes. As placas foram incubadas a 28 o C por 4 dias. Em seguida, foram contadas as colônias, calculando-se o índice conhecido como UFC.mL -1.

13 8 Para análise estatística as médias foram comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade (FERREIRA, 2008). 3.3 Detecção de Pantoea ananatis em sementes de milho Para detecção de P. ananatis em sementes de milho foram avaliadas três amostras de milho provenientes de campos de produção em Formosa, GO. Para extração da bactéria foram utilizadas amostras, que continham 100g de sementes imersas em 200 ml de solução salina 0,85% durante 16 h em geladeira. A partir do extrato de semente obtido foi feita a diluição em serie e plaqueamento nos meios de cultura descritos anteriormente. As placas de Petri foram incubadas a 28ºC por 4 dias. Após esse período, foram detectadas as colônias da bactéria alvo, que foram, então, repicadas para o meio de cultura 523, e calculado o número de UFC g -1 de sementes. Os isolados de bactéria obtidos foram preservados e mantidos na coleção do Laboratório de Bacteriologia do ICIAG/UFU Reações de hipersensibilidade O teste de hipersensibilidade foi realizado em plantas de fumo (White Burley). O teste de reação de hipersensibilidade (HR) é utilizado na evidenciação da condição de uma determinada bactéria ser fitopatogênica ou não, obtendo-se uma resposta rápida e de fácil interpretação. A suspensão bacteriana foi inoculada por infiltração nos espaços entre nervuras laterais na face dorsal das folhas de fumo. A avaliação foi feita de 24 a 48 h após a inoculação, observando a reação, caracterizada por necrose e dessecamento do tecido da região infiltrada (MARIANO et al., 2000) Teste de patogenicidade Plantas de milho foram cultivadas em vasos plásticos de 500 g contendo substrato solo (Latossolo Vermelho), areia grossa e vermiculita na proporção de 3:1:1, com 2 plantas por vaso. O teste de patogenicidade foi realizado quando as plantas estavam no estádio de desenvolvimento que apresentava de 3 a 4 folhas, com aproximadamente 10 dias após a semeadura. As plantas foram submetidas à câmara

14 9 úmida 24 h antes e após a inoculação. A inoculação foi feita com algodão umedecido contendo suspensão bacteriana (10 10 UFC.mL -1, OD 550 = 0,5) de cada isolado obtido na detecção das sementes Caracterização bioquímica e fisiológica dos isolados bacterianos Os isolados bacterianos obtidos foram caracterizados bioquímica e fisiologicamente pelos testes: Gram em KOH 3%, crescimento em meio YDC, oxidação ou fermentação da glicose, motilidade, produção de ácidos a partir da glicose de inositol, sorbitol, sucarose e D-arabinose, pela produção das enzimas arginina dihidrolase, liquefação da gelatina, oxidase, catalase e crescimento a 37 o C, para a identificação da bactéria.

15 10 4- RESULTADOS E DISCUSSÃO 4.1 Avaliação da supressividade e repressividade dos meios de cultura Para avaliação da supressividade e repressividade, os meios de cultura 523, YDC e meio semi seletivo PA20 (Tabela 1), com e sem a adição de thiophanato metílico, não diferiram significativamente entre si, no número de unidades formadoras de colônia por ml (UFC ml -1 ), que variou de 3,9x10 9 a 4,9x10 9. Desta forma, o meio semi-seletivo PA20 pode ser utilizado para detecção da bactéria P. ananatis. Resultados semelhantes foram descritos por Mehta et al. (2005), na detecção de Xanthomonas axonopodis pv. malvacearum em sementes de algodão, em que os meios de cultura semi seletivo e o padrão não diferiram estatisticamente no número UFC.mL -1. Quanto ao uso de fungicida nos meios de cultura, Bomfeti et al., (2007) em experimentos in vitro observaram que o comportamento da bactéria quando cultivada em presença de diferentes agentes químicos (oxitetraciclina e streptomicina, benomyl, triadimenol, tebuconazole, oxicloreto de cobre, hidróxido de cobre e thiophanato metílico) não foram efetivos no seu controle, enquanto que impediram a formação de estruturas reprodutivas fúngicas. Tabela 1. Detecção de Pantoea ananatis (UFC.mL -1 ) em meios de cultura 523, YDC e PA20 sem e com adição de thiophanato metílico. Uberlândia - MG, Meio de cultura Nº UFC ml ,2 x Thiophanato Metílico 4,9 x 10 9 YDC 3,7 x 10 9 YDC + Thiophanato Metílico 4,4 x 10 9 PA20 3,9 x 10 9 PA20 + Thiophanato Metílico 4,3 x 10 9 CV (%) = No meio semi-seletivo PA20 (Figura 1) houve redução no diâmetro das colônias e formação de um halo amarelo em torno das inclusões amarelas escuras internas das colônias individuais de P. ananatis quando comparado com os meios 523 e YDC, independente do uso de thiophanato metílico. De acordo com Goszcynska et al.,

16 11 (2006b) esse comportamento se deve a redução do ph do meio PA20 que a bactéria promove. Para detecção de Xanthomonas axonopodis pv. vignicola em videira, no meio semi-seletivo CCM, também, houve redução no tamanho das colônias da bactéria alvo (PEIXOTO et al., 2006). Figura 1 - Pantoea ananatis em meios 523 (A e D), YDC (B e E), PA20 (C e F) sem e com a adição de thiophanato metílico, respectivamente, aos 5 dias após incubação. Fonte: Mamede, M.C., Detecção de Pantoea ananatis em sementes de milho Na detecção de P. ananatis nas sementes de milho, a bactéria não foi detectada na amostra 1 (Tabela 2). Na amostra 2, a bactéria foi detectada nos meios YDC e PA20 com adição de thiophanato metílico e na amostra 3, somente no meio PA20. As colônias de P. ananatis (Figura 2) no meio de cultura semi seletivo PA20 apresentam característica de ovo frito, com o centro da colônia de coloração amarelo escuro à marrom, envolvida por um halo mais claro de cor amarela, facilitando a

17 12 detecção e a identificação da bactéria, diferenciando das demais bactérias e das saprófitas. Este é o primeiro relato da detecção de P. ananatis em sementes de milho. Segundo Rabalho (2007), ao desenvolver meio de cultura semi-seletivo para detecção de Xanthomonas spp. em sementes de tomateiro, o meio apresentou alta eficácia, devido à sua baixa repressividade, alta supressividade e baixo custo. Tabela 2. Número de colônias de Pantoea ananatis detectadas em extratos de sementes de milho, em diferentes meios de cultura com adição de thiophanato metílico. Meio de cultura Amostra 1 Amostra 2 Amostra Thiophanato Metílico YDC + Thiophanato Metílico PA20 + Thiophanato Metílico Figura 2 - Detecção de Pantoea ananatis em extratos de sementes de milho, em meio de cultura semi seletivo PA20, aos 8 dias após o plaqueamento. Fonte: Tebaldi, N.D., 2015.

18 Isolamento de Pantoea ananatis a partir de extratos de sementes A partir do extrato das sementes de milho foram preservados dez isolados bacterianos, na coleção do Laboratório de Bacteriologia do ICIAG/UFU, sob os números UFU G13, UFU G41, UFU G47, UFU G48, UFU G72, UFU G73, UFU G74, UFU G75, UFU G76 e UFU G Caracterização bioquímica e fisiológica dos isolados bacterianos Os isolados UFU A18 e UFU E43 (Tabela 3) foram usados como parâmetro comparativo para os testes bioquímicos em relação aos demais isolados, pois já haviam sido caracterizados molecularmente como P. ananatis. Todos os isolados bacterianos detectados nas sementes de milho (Tabela 3) foram caracterizados como: Gram negativos, fermentação da glicose, colônias amarela em meio YDC, oxidade, catalase, arginina dihidrolase, produção de ácidos a partir do inositol, sorbitol, sacarose, D-arbinose, motilidade, liquefação da gelatina e crescimento a 37ºC todos positivos, sendo caracterizados como P. ananatis. Todos os isolados bacterianos foram patogênicos em plantas de milho (Tabela 3), reproduzindo os sintomas de lesões encharcadas, característico de P. ananatis, confirmando o postulado de Koch. Todos os isolados bacterianos obtidos de extratos de sementes de milho apresentaram a reação de hipersensibilidade em plantas de fumo. O meio de cultura semi seletivo PA 20 foi usado para a detecção de P. ananatis em sementes de cebola (GOSZCZYNSKA et al., 2006b), com uma média de 6-7 dias após incubação as colônias apresentavam-se amarelas, brilhantes, formato circular e com centro escurecido. Entre os lotes de sementes infestadas houve variação para presença de colônia de 2.2 x 10 3 UFC.g -1 a 5.0 x 10 6 UFC.g -1.

19 14 Tabela 3 - Características morfológicas, bioquímicas e fisiológicas de isolados de Pantoea ananatis em sementes de milho. Uberlândia, MG, Isolados UFU Testes Bioquímicos A18 E43 G13 G41 G77 G47 G48 G72 G73 G74 G75 G76 GRAM Oxidativa/Fermentativa F F F F F F F F F F F F YDC (cor da colônia amarela) Oxidase Catalase Arginina dihidrolase Produção de ácidos Inositol Produção de ácidos Sorbitol Produção de ácidos Sacarose Produção de ácidos D- arabinose Motilidade Liquefação da gelatina Crescimento a 37ºC Reação de hipersensibilidade (Fumo) Inoculação no hospedeiro CONCLUSÕES Este é o primeiro relato da detecção de Pantoea ananatis em sementes de milho. O meio de cultura semi seletivo PA20 foi eficiente para a detecção da bactéria Pantoea ananatis nas sementes.

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