GLICEMIA E ANION-GAP EM BEZERRAS SADIAS DA RAÇA HOLANDESA NO PRIMEIRO MÊS DE VIDA

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1 ARS VETERINARIA, Jaboticabal, SP, Vol. 20, nº 3, , ISSN GLICEMIA E ANION-GAP EM BEZERRAS SADIAS DA RAÇA HOLANDESA NO PRIMEIRO MÊS DE VIDA (BLOOD GLUCOSE AND ANION GAP OF HEALTHY FEMALE HOLSTEIN CALVES DURING THE FIRST MONTH OF LIFE ) (GLICÉMIA Y ANION-GAP EN BECERRAS HOLSTEIN SANAS EN EL PRIMER MÉS DE VIDA) F. M. KANETO 1, C. S. COELHO 2, M. L. R. LEAL 3, J. A. N. LISBOA 4, F. J. BENESI 5 RESUMO Com o objetivo de estabelecer valores de referência e avaliar a influência do fator etário sobre a glicemia e o aniongap de bezerras sadias, da raça Holandesa, no primeiro mês de vida, utilizaram-se amostras de sangue de 225 animais distribuídos por 15 grupos etários. Para o estudo do anion-gap, foram avaliadas as concentrações séricas dos íons sódio, potássio e cloreto, e a taxa plasmática de bicarbonato. Pela análise dos dados obtidos, verificou-se que até os 15 dias de vida os valores médios do anion-gap oscilaram entre 5,95 e 14,13, não havendo diferenças significativas entre as médias dos grupos etários avaliados nesse período; entre 16 e 20 dias de vida ocorreu elevação dos valores, que permaneceram estáveis entre 21 e 25 dias, atingindo um valor médio máximo, significativamente maior, entre 26 e 30 dias de vida (19,12). Os valores médios dos teores de glicose plasmática foram menores nos animais do primeiro grupo etário (70,0mg/dl), evoluindo com elevações progressivas até atingir um valor máximo de 118,8 mg/dl às 48 horas, seguindo com diminuições e pequenas oscilações dos valores até os 30 dias de vida, no intervalo de glicemia de 82,07 a 108,80 mg/dl, sem retornar ao valor imediato ao nascimento. A influência do fator etário provou-se significativa para os dois parâmetros estudados (p < 0,05). PALAVRAS-CHAVE: Bezerros. Neonatos. Glicemia. Anion-gap. SUMMARY Two-hundred-twenty-five healthy female Holstein calves were used to assess glicemia and anion-gap throughout the first month of life. Calves were distributed in 15 experimental groups, according to age. The influence of age on the biochemical values was also studied. The serum concentration of sodium, potassium and chloride and the plasmatic concentrations of bicarbonate were studied for the evaluation of the anion-gap. The results showed that animals with up to 15 days of age had mean values for anion gap that oscillated between 5.95 and 14.13, with no significant differences between groups during this period; blood glucose was lower in animals of the first group (70.0 mg/dl), followed by variations and an increase to the highest mean values (118.8 mg/dl) in animals with 48 hours of age and followed by a decrease until the 30th day of life with values between and mg/dl. Age showed to play a role in all studied biochemical variables (p < 0.05). KEY-WORDS: Calves. Neonates. Blood glucose. Anion gap. 1 Aluno de Graduação. FMUZ - USP - SP. 2 Doutoranda em Cirurgia - FMVZ - USP. Rua General Góis Monteiro, 665, apt. 51B São Paulo, SP. clarissecoelho@yahoo.com.br 3 Doutoranda em Clínica Veterinária - FMVZ-USP. 4 Professor Adjunto - Universidade Estadual de Londrina - Paraná. 5 Professor Titular - FMVZ-USP. 291

2 RESUMEN Con el objetivo de establecer valores de referencia y evaluar la influencia de la edad sobre la glicemia y el anion-gap de becerras Holstein, sanas, en el primer mes de vida, fueron utilizadas muestras de 225 animales distribuidos en 15 grupos con diferentes rangos de edad. Para el estudio del anion-gap fueron evaluadas las concentraciones séricas de los iones sodio, potasio y cloro y los niveles plasmáticos de bicarbonato. Por medio del análisis de los datos obtenidos se verificó que hasta los 15 días de vida los valores medios de anion-gap oscilaron entre 5,95 y 14,13, no existiendo diferencia significativa entre las medias de los grupos evaluados en ese período. Entre los 16 y los 20 días de vida hubo elevación de los valores, que permanecieron estables entre los 21 y los 25 días, alcanzando un valor medio máximo significativamente mayor entre los 26 y los 30 días de edad (19,12). Los valores medios de los niveles de glucosa plasmática fueron menores en los animales del primer grupo (70,0 mg/dl), aumentando progresivamente hasta llegar a un valor máximo de 118,8 mg/dl a las 48 horas, después hubo disminuciones y pequeñas oscilaciones de los valores hasta los 30 días de vida, con un intervalo de 82,07 a 108,80 mg/dl, sin retornar al valor observado en el momento del nacimiento. Fue comprobado que la edad tiene influencia significativa sobre los parámetros estudiados. PALABRAS CLAVE: Becerros. Neonatos. Glicemia. Anion-gap. INTRODUÇÃO O momento do nascimento representa para o neonato não apenas o início da vida extra-uterina, mas também um estresse associado a uma grande alteração metabólica, pois tem de assumir imediatamente funções vitais até então executadas pela placenta, entre as quais destacam-se as funções cardiorespiratória, de homeotermia, de alimentação, de filtração, de secreção interna e de imunoproteção (GROUGNET, 1982; GRUNET & BIRGEL, 1982; HOYER et al, 1989; BENESI, 1992). Durante o processo de desenvolvimento fetal os diferentes sistemas do organismo apresentam maturação gradativa, de forma que ao nascimento o neonato esteja preparado para assumir essas funções orgânicas (GRONGNET, 1982; BRUGÈRE, 1989). A transição, com o nascimento do bezerro, do meio intra-uterino para o meio ambiente (extra-uterino) é dramática. Apresenta exclusiva dependência de fontes de energia maternas com as quais o neonato deve manter a homeostase. As primeiras horas de vida são cruciais para a sobrevivência e as modificações fisiológicas são extensas, demandando alta energia para um atendimento. A frutose parece ter uma função importante como fonte de energia nesta fase, pois ao nascimento está presente em alta concentração no sangue dos neonatos, diminuindo durante as primeiras 24 horas de vida. Os teores de glicose são baixos ao nascimento e aumentam suas concentrações a níveis considerados normais em período variado entre 6 e 18 horas de vida (DANIELS et al, 1974; KURZ & WILLETT, 1991), sendo a seguir mantidos dentro de estreito intervalo de variação. Há evidências de influência exercida pela glicemia materna e pela condição corpórea do neonato ao nascimento, sendo maiores as concentrações em animais provenientes de vacas com maior glicemia e naqueles mais pesados ao nascer (KÜHNE et al, 1989). As variações da glicemia que seguem o momento do nascimento sofrem forte influência da alimentação, incluindo sua qualidade (colostro, leite, substituto do leite) e momento da avaliação pós-alimentação; além de poderem ser relacionadas à maturidade de órgãos (fígado/pâncreas), de atividades enzimáticas específicas ou à simples adaptação ao novo ambiente (REECE & WAHLSTRON, 1972; KÜHNE et al, 1989; KURZ & WILLETT, 1991; ANGELOV et al, 1996). As modificações no equilíbrio ácido-básico no período após o nascimento ocorrem muito freqüentemente. Nas primeiras horas pós-nascimento, a homeostase ácidobásica depende diretamente do tipo de parto (SZENCI et al, 1981; BENESI, 1993), enquanto mais tarde as alterações desse equilíbrio serão relacionadas a várias alterações do curso normal de funções vitais do organismo. O exame do equilíbrio ácido-básico em bezerros imediatamente pósnascimento e nos primeiros dias de vida pode ser um bom método para avaliar a sua capacidade de adaptação (MAURER-SCHWEIZER et al, 1977). As variações típicas dos parâmetros hemogasométricos até que alcancem níveis de bovinos maduros são um sinal de rápida adaptação do metabolismo aos efeitos da transição da vida intra para a extra-uterina no neonato (BENESI, 1992). Ressalta-se que mesmo bezerros nascidos de partos eutócicos apresentam variada extensão de acidose mista (metabólica-respiratória), considerada fisiológica, e que pode ser intensificada nos partos distócicos ou em neonatos pré-maturos, caracterizando o complexo patológico genericamente denominado de asfixia neonatal 292

3 (BENESI, 1993; ANGELOV et al., 1996). A dinâmica dos valores do equilíbrio ácido-básico apresenta íntima relação com aquela de componentes bioquímicos do sangue, como o lactato e a glicose. A avaliação do equilíbrio ácido-básico requer em muitas situações além da hemogasometria o estabelecimento do anion-gap. Tem esta determinação o objetivo de elucidar a presença de desequilíbrios ácidobásicos mistos, particularmente aqueles que se neutralizam, não se refletindo sobre o ph do sangue (CARLSON, 1997). O cálculo do anion-gap é feito pela diferença entre as somas das concentrações dos principais cátions (sódio e potássio) e ânions (cloreto e bicarbonato) medidos no sangue, possibilitando estimativa da concentração dos chamados ânions não medidos (por exemplo: proteínas do plasma com carga negativa). Este simples cálculo pode ser muito útil na categorização de desequilíbrios ácido-básicos com vistas aos potenciais fatores causadores. Muito comumente, as elevações de anion-gap estão associadas com o desenvolvimento de acidose metabólica em que aumentam os ânions que não são rotineiramente medidos no laboratório clínico, como no caso do acúmulo de ácidos orgânicos oriundos do metabolismo (ácido lático, cetoácidos) observado nos quadros de diarréias, pneumonias, choque hipovolêmico, cetose, diabete, indigestão por grãos, etc. A presença de acidose metabólica com alto anion-gap fornece fundamentos para a investigação de doenças capazes de produzirem acúmulo de ânions não medidos (KANEKO et al, 1997). A necessidade de estudo sobre as variações das taxas de glicose sangüínea no período neonatal de bezerros leiteiros mantidos sob manejo tradicional de nossos rebanhos e a ausência de informações sobre o anion-gap em neonatos bovinos motivaram esta pesquisa, cujos objetivos foram a determinação de valores padrões da glicemia e do anion-gap no soro sangüíneo de bezerras sadias da raça Holandesa, no primeiro mês de vida, e a avaliação da possível variação dessas características sob influência dos fatores etários. MATERIAL E MÉTODOS Foram utilizadas 225 bezerras sadias, da raça Holandesa, com até 30 dias de vida, oriundas de 17 propriedades produtoras de leite localizadas em 8 municípios no Estado de São Paulo. As bezerras foram distribuídas por 15 grupos experimentais, cada um com 20 animais, de acordo com a faixa etária: do nascimento até 7 horas de vida; 8 a 16 horas; 17 a 24 horas; 2 dias; 3 dias; 4 dias; 5 dias; 6 a 7 dias; 8 a 9 dias; 10 a 11 dias; 12 a 13 dias; 14 a 15 dias; 16 a 20 dias; 21 a 25 dias e 26 a 30 dias. Todos os animais selecionados foram submetidos a exame clínico prévio conforme métodos e padrões estabelecidos na Clínica Médica da FMVZ/USP e recomendados por DIRKSEN et al. (1993). Durante a avaliação clínica, foi observada a coloração das mucosas oculares e vaginal, o grau de hidratação, as condições da região umbilical, os reflexos do sistema nervoso central, bem como realizado o exame das funções vitais. Para o estudo da glicemia e do anion-gap, foi colhido sangue exclusivamente das bezerras que se apresentaram clinicamente hígidas e que ainda não haviam sido submetidas a programas de premunição contra Babesia spp. e Anaplasma sp.. Foram excluídos do experimento os animais que apresentaram volume globular inferior a 25% ou superior a 40%. As amostras de sangue foram colhidas por punção da veia jugular, com a utilização de tubos de colheita a vácuo siliconizados 1 sem anticoagulante, com capacidade para 10 ml, para as determinações de sódio, potássio e cloreto, e em tubos de vidro contendo fluoreto de sódio, para a determinação de glicose. Após a colheita, as amostras foram centrifugadas por cerca de 15 minutos, sendo o soro e o plasma sangüíneos identificados e armazenados sob congelamento a -20 C até a realização das determinações. Para a determinação das taxas de bicarbonato no plasma, as amostras de sangue venoso foram colhidas em seringas de plástico de 3 ml providas de agulhas 25 x 0,8 mm e umedecidas com heparina sódica, com eliminação de bolhas de ar e obliteração da agulha com acoplamento de rolha de borracha para evitar o contato com o ar. Até o momento do processamento em laboratório, as amostras foram mantidas sob refrigeração em banho de água-gelo em isopor (LISBOA et al, 2001). Para as avaliações da glicose, sódio, potássio e cloreto, as amostras de sangue foram submetidas à centrifugação para a obtenção de plasma e de soro, após a coagulação, sendo então identificadas e armazenadas sob congelamento até a realização das determinações. A hemogasometria foi efetuada imediatamente após a chegada das amostras de sangue no laboratório de pesquisa do Departamento de Clínica Médica FMVZ/USP. As dosagens de glicose foram efetuadas no plasma, obtido a partir de amostras de sangue fluoretadas, através do método BARHAM & TRINDER (1972), utilizando-se analisador bioquímico automático (Bayer Technicon modelo RA100), em comprimento de onda 510 nm. A determinação do bicarbonato plasmático foi efetuada por utilização de analisador automático de gases 293

4 sangüíneos (Hemogasômetro ABL 330 e ABL 5 Radiometer, Copenhagen), conforme metodologia preconizada por SEVERINGHAUS & BRADLEY (1958) e SIGGAARD-ANDERSEN (1963). O sódio e potássio séricos foram quantificados por fotometria de chama, conforme recomendado por KORZUN & MILLER (1987), com uso de fotômetro de chama (Celm FC 130), em comprimento de onda específico, na região de luz visível, sendo de 589 nm para a determinação do sódio e 768 nm para o potássio. Os teores de cloretos séricos foram determinados de acordo com método descrito por EINSENMAN (1929), em aparelho analisador de cloretos (Corning Chloride Analyser modelo 925). O anion-gap foi calculado a partir de fórmula preconizada por CARLSON (1997) e a seguir disposta: Anion-gap = (concentração sérica de sódio + concentração sérica de potássio) (concentração sérica de cloreto + concentração plasmática de bicarbonato) Os dados obtidos para os constituintes bioquímicos (sódio, potássio e cloreto) foram submetidos à análise de variância (ANOVA) e ao teste de Duncan para comparação entre médias, ao nível de significância de 5 % (α = 0,05). As analises estatísticas foram efetuadas com o auxílio de um programa estatístico computadorizado (SAS, 1985). RESULTADOS E DISCUSSÃO Os valores médios e desvios padrão obtidos para o anion-gap e para a glicemia, considerando-se os diferentes grupos etários estudados durante o primeiro mês de vida de bezerras sadias da raça Holandesa, estão apresentados na tabela 1 e a visualização da variação dos valores médios dessas determinações estão apresentados, nos Gráficos 1 e 2, respectivamente, para o anion-gap e glicemia. Anion-gap A avaliação dos resultados obtidos pela análise de variância (ANOVA) permitiu determinar que o aniongap das bezerras sofreu influência do fator etário (p < 0,03). Através da análise dos dados obtidos pelo método de Duncan, pôde-se verificar que entre o nascimento e 15 dias de vida ocorreram variações dos valores médios do anion-gap, com oscilações entre 5,95 e 14,13, não havendo diferenças significativas entre as médias dos diferentes grupos etários nesse período. Merece destaque que entre 16 e 20 dias de vida ocorreu elevação dos valores do anion-gap, que foi mantida dos 21 aos 25 dias, e que atingiu um valor médio máximo e significativamente maior que o de vários grupos etários anteriores, entre 26 e 30 dias de vida das bezerras estudadas. Considerando-se os resultados obtidos para o anion-gap, dispostos na Tabela 1 e Figura 1, deve ser ressaltado inicialmente que o cálculo do anion-gap pode ser de extrema ajuda na classificação de desordens ácidobásicas considerados os seus potenciais fatores causadores e serve como um guia para o prognóstico em diversas circunstâncias (CARLSON, 1997). Como já foi mencionado na introdução deste trabalho, no início da vida extra uterina, há um grande estresse e alterações metabólicas em neonatos bovinos, assim como, são freqüentes as modificações no equilíbrio ácido básico nestes animais no período pós-nascimento. ROUSSEL et al. (1998) descreveram que as perturbações do balanço ácido-base e das concentrações de eletrólitos plasmáticos são freqüentemente encontradas em bovinos doentes e que a prática de avaliação destes componentes permite uma identificação e correção dos desequilíbrios de forma relativamente simples e a adoção de um tratamento mais adequado. Segundo estes autores o anion-gap, calculado de acordo com a mesma regra adotada neste trabalho, foi superior nos animais com menos de um mês de vida quando comparados àqueles observados nos animais com mais de um mês de idade. Seus resultados possibilitaram se correlacionar valores obtidos de anion-gap com o prognóstico dos animais avaliados. Alterações do anion-gap conforme a faixa etária foram relatadas em cavalos (GOSSET et al., 1983), destacando-se que os jovens potros apresentam um valor significativamente mais alto do anion-gap que os animais adultos. Além disso, mais dados experimentais serão necessários para estabelecer claramente a variação fisiológica do anion-gap de animais submetidos a variadas condições e exigências (CARLSON, 1997). Todavia, não existem estudos semelhantes na espécie bovina, razão pela qual desenvolveu-se este estudo e não foi possível a comparação e confronto de dados de outros autores nesta discussão. Conforme já citado anteriormente, para o cálculo do anion-gap, foram utilizados as determinações séricas de sódio, potássio e cloreto e a determinação de bicarbonato, ao longo dos primeiros 30 dias de vida das bezerras da raça Holandesa. Segundo COELHO (2002), com exceção do cloreto sérico, os outros eletrólitos séricos sofrem a influência do fator etário e o comportamento descrito para o sódio sérico é muito semelhante ao observado no presente estudo para o anion-gap, sugerindo a hipótese deste cátion ser o influenciador dos valores encontrados para o mesmo. Estabeleceu-se ainda, que o valor médio e desvio 294

5 Tabela 1 - Valores médios das determinações de sódio, potássio, cloreto e bicarbonato utilizados e valores médios e desvios padrão do anion-gap e glicose obtidos em bezerras sadias da raça Holandesa, no primeiro mês de vida, conforme distribuição pelos grupos etários. Estado de São Paulo, a,b,c,d,e médias na mesma coluna com uma letra em comum são estatisticamente diferentes ( αdš0,05) pelo teste de Duncan Gráfico 1 Valores médios e desvios padrão do aniongap, de bezerras sadias da raça Holandesa, conforme a distribuição pelos grupos etários no primeiro mês de vida. Estado de São Paulo Gráfico 2 Glicemia, médias e desvios-padrão obtidos em bezerras sadias da raça Holandesa, no primeiro mês de vida, conforme a distribuição pelos grupos etários. Estado de São Paulo

6 padrão do anion-gap no primeiro mês de vida de bezerros foi de 11,00 ± 2,69. Glicose A avaliação das concentrações de glicose plasmática pela análise de variância (ANOVA) permitiu determinar que a glicemia das bezerras sofreu influência do fator etário (p < 0,0001) (Tabela 1). Valores menores foram detectados (70,00 mg/dl) imediatamente após o nascimento (grupo 1). Estes apresentaram elevação progressiva até atingir um valor máximo (118,80 mg/dl) às 48 horas de vida (grupo 4). Após as primeiras 48 horas pós-nascimento, os valores da glicemia dos animais estudados diminuíram, passando a sofrer pequenas oscilações durante o período estudado, permanecendo o resultado no intervalo de 82,07 e 101,80 mg/dl, sem retornar ao valor observado imediatamente ao nascimento, com exceção dos 10 a 11 dias. O comportamento observado no presente estudo para glicemia foi semelhante ao descrito por KURZ & WILLETT (1991) e EGLI & BLUM (1998), com as concentrações de glicose apresentando-se baixas ao nascimento e evoluindo com aumento nas primeiras 18 horas de vida para ambos os grupos estudados. A influência da ingestão de nutrientes sobre esta variável bioquímica também foi citada por JENKINS et al.(1982), KURZ & WILLETT (1991) e MIN et al. (1993), porém o aumento logo ao nascimento, mesmo na ausência de ingestão de nutrientes, pode estar associada com aumento da atividade simpática eferente (KURZ & WILLETT, 1991). CHAN et al. (1993) atestaram que o aumento dos teores de glicose logo após o nascimento está provavelmente relacionada ao metabolismo hepático e glicogênio muscular, os quais respondem principalmente a ação de catecolaminas (noradrenalina e adrenalina). Segundo MASSIP (1980), esse comportamento da glicose com elevação logo após o nascimento pode ser conseqüência das altas concentrações de cortisol no momento imediato ao nascimento, conforme também relatado por KNOWLES et al. (2000), e ser decorrente, também, do aporte de glicose proveniente do colostro. Em relação à posterior redução das concentrações de glicose plasmática foi semelhantes à relatada por ANGELOV et al. (1996), que observaram a manutenção da glicemia até o terceiro dia quando, então, observaram uma redução dos valores até o 30 o dia de vida dos bezerros. CONCLUSÕES Os resultados obtidos a partir das análises dos constituintes sangüíneos permitiram estabelecer os valores de referência de glicemia e anion-gap em bezerras sadias do nascimento até os 30 dias de vida. Demonstrou-se que esses valores variam, sendo significativa a influência etária. AGRADECIMENTO À Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo, FAPESP, pelo apoio financeiro ARTIGO RECEBIDO: Dezembro/2003 APROVADO: Setembro/2004 REFERÊNCIAS ANGELOV, G., ANGELOV, A., SLAVOV, E., SPASSOVA, V. Age dynamics of acid-base balance and some biochemical indices in calves. Veterinorski Arhiv, v.66, n.5, p , BARHAM, D., TRINDER, P. An improved colour reagent for the determination of blood glucose by the oxidase system. Analyst, v.97, p , BENESI, F.J. Hematologia de bezerros recém-nascidos. Influência da asfixia neonatal, do tipo de parto e da ingestão de colostro sobre a crase sangüínea f. Tese (Livre-Docência) - Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, São Paulo, BENESI, F.J. Síndrome asfixia neonatal dos bezerros. Importância e avaliação crítica. Arquivos da Escola de Medicina Veterinária da Universidade Federal da Bahia, v.16, n.1, p.38-48, BRUGÈRE, H. Physiologie perinatalle du veau. I circulation et respiration. Bulletin Society Véterinaire Pratice De France, v.73, n.3, p , CARLSON, G.P. Fluid, Electrolyte, and acid-base balance. In: KANEKO, J.J., HARVEY, J.W., BRUSS, M.L. Clinical biochemistry of domestic animals. 5 ed. San Diego. Academic Press, p CHAN, W. W., JONKER, F. H., RAUSCH, W. D., TAVERNE, M. A. M. Plasma catecholamines and blood chemistry in newborn calves in relation to different obstetrical procedures and to neonatal outcome. Animal Reproduction Science., v. 34, n.1, p ,

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