Universidade Federal de Pelotas Núcleo de Pesquisa, Ensino e Extensão em Pecuária. Pelotas, 11 de novembro de 2015

Transcrição

1 Universidade Federal de Pelotas Núcleo de Pesquisa, Ensino e Extensão em Pecuária Pelotas, 11 de novembro de 2015 Carlos Loures Pires Josiane de Oliveira Feijó

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3 Escolha do artigo Cálcio Homeostase Hormônios Prevenção Diminuição do cálcio pré-parto Cálcio oral no pós parto DCAD Outros

4 Escolha do artigo TCO 2 pco 2 so 2 BE HCO - 3 po 2 ph

5 Alterações no ph Acúmulo de ácidos Perda de bases Aumento da [H + ] Acidose Queda do ph Escala de ph 7,4 Aumento do ph Alcalose Perda de ácidos Diminuição da [H + ] Acúmulo de bases Felsenfeld et al., 2007

6 Fontes de H + decorrentes dos processos metabólicos Metabolismo aeróbico da glicose Metabolismo Ruminal Metabolismo anaeróbico da glicose Ácido Carbônico Ácido Sulfúrico H + Ácido Lático Corpos Cetônicos Ácidos Oxidação de Amino ácidos Sulfurados Ácido Fosfórico Oxidação incompleta de ácidos graxos Hidrólise das fosfoproteínas e nucleoproteínas Powers,S.K. e Howley, E.T., Fisiologia do Exercício, (2000), pg207 Fig11.3

7 ph dos Líquidos Corporais ph- 7,35-7,45 ph- 6,8-7,4 6,2-7,2

8 REGULAÇÃO ALCALOSE ACIDOSE ph= 7,35-7,45 pco 2 = 35,0 a 45,0 mmhg HCO 3 - = 20,0 a 30,0 mmol/l H 2 O Aumento da [H + ] Diminuição da [H + ] CO 2 H 2 CO 3 H 2 0+CO 2 HCO 3 - H + H + URINA H + HCO - METABOLISMO

9 Efeito do equilíbrio ácido base na ligação do Ca +2 às proteínas Ca +2 Dietas Catiônicas H + Ca +2 Ca +2 Dietas Aniônicas H + H + H + Albumina Ca +2 H + Albumina H + Ca +2 H + Ca +2 Cálcio Total Cálcio Ionizado Alcalose Ca +2 H + H + Cálcio Total Cálcio Ionizado Acidose 9

10 Homeostase do Cálcio Ca PTH Vitamina D Calcitonina PTH 25 (OH)D Ação osteoclástica Ca +2 e HPO 4 Absorção do Ca +2 da Dieta 1 α- hidroxilase Ca PTH Calcitonina 1,25 (OH) 2 D3 10

11 DIETA ANIÔNICA Induz uma leve queda do ph sanguíneo levando a uma aborção ativa de cálcio Baixa palatabilidade acentuando o BEN Porém, a baixa palatabilidade da dieta fornecida próximo ao parto pode reduzir a ingesta alimentar e contribuir para acentuar o balanço energético negativo, aumentando ainda mais a possibilidade de ocorrência de doenças relacionadas a desordens metabólicas REINHARDT et al.,

12 Cálcio Cálcio (mmol/l) Total (mg/dl) Número de lactações REINHARDT et al.,

13 HOMEOSTASE Vitamina D3 Goff,

14 Avaliar se mudanças no ph extracelular alteram os receptores sensíveis ao Ca +2 nas células renais e paratireióides 14

15 MATERIAIS E MÉTODOS Análise do Ca +2 i Secreção do PTH Fosforilação e polimerização Mobilização do Ca +2 i em meio de albumina 15

16 MATERIAIS E MÉTODOS 1º Ensaio: Análise da [Ca +2 i ] em células HEK-293 e células da paratireóide bovina por fluorometria Células HEK 293 ( células renais) Células da paratireóide bovina 16

17 MATERIAIS E MÉTODOS As células foram embebias em solução nutritiva contendo marcadores fluorescentes e analisadas por fluorometria Células embebidas com marcador FURA 2 / AM DMEM: nutriente específico para cultura de células 17

18 RESULTADOS E DISCUSSÃO * P< 0,05; +++ P<0,001; *** P<0,001 Tempo (min) Figura 1: Resposta dos receptores de Cálcio das HEK 293, à variação do ph (7,4 7,6). 18

19 RESULTADOS E DISCUSSÃO Tempo (min) Figura 2: Resposta dos receptores de Cálcio das HEK 293, à variação do ph (7,4 7,2). * P< 0,05; +++ P<0,001; *** P<0,001 19

20 RESULTADOS E DISCUSSÃO Tempo (min) Figura 1: Resposta dos receptores de Cálcio das HEK 293, à variação do ph (7,4 7,6). Tempo (min) Figura 2: Resposta dos receptores de Cálcio das HEK 293, à variação do ph (7,4 7,2). * P< 0,05; +++ P<0,001; *** P<0,001 20

21 Cálcio total plasmático (mg/dl) RESULTADOS E DISCUSSÃO Células imunes Dias Dias referentes referentes ao parto ao parto Dias referentes ao parto n= 8 hipocalcemia clínica n=19 normocalcemicas Kimura et al., 2006

22 MATERIAIS E MÉTODOS 2º Ensaio: Quantificação de PTH secretado por células da paratireóide bovina, pelo método ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay); 22

23 RESULTADOS E DISCUSSÃO * * Figura 4: Células de paratireóide humana em solução com 1,2 mm de Ca, contendo soluções tampões para ph de 7,0 a 7,8, substituídas a cada 5 minutos, com o PTH quantificado em fentograma por minuto por célula. 23

24 PTH x Ca +2 x ph Alta Baixa A ativação do receptor, faz com que iniba e secreção de PTH PTH é secretado pela diminuição de Ca +2 intracelular

25 PTH x Ca +2 x ph Alta Baixa A ativação do receptor, faz com que iniba e secreção de PTH Acidose PTH é secretado pela diminuição de Ca +2 intracelular

26 PTH x Ca +2 x ph Alta Baixa A ativação do receptor, faz com que iniba e secreção de PTH Alcalose PTH é secretado pela diminuição de Ca +2 intracelular

27 RESULTADOS E DISCUSSÃO 3º Ensaio: Verificação da atuação dos CaR, por medição da atividade de fosforilação da enzima ERK (extracellular-signalregulated kinases), por immunoblotting, e a atividade de polimerização de actina, sob diferentes concentrações de Ca +2 o, por intermédio da fluorometria. 27

28 Polimerização da actina RESULTADOS E DISCUSSÃO Figura 05: Fosforilação da ERK, detectada por immunoblotting, após tratamento com 3,5 mm de Ca +2 o por 10 minutos, sob diferentes concentrações de ph (7,4 ± 0,2). Figura 06: Medição da atividade de polimerização de actina, em diferentes ph, com concentração de Cálcio extracelular de 1,5 mm.

29 RESULTADOS E DISCUSSÃO 4º Ensaio: Mobilização de Ca +2 i em meio rico em albumina (5% p/v), em diferentes ph o. Figura 07: Resposta aumentada dos receptores de Cálcio, com 3 mm de Ca extracelular (+ 5% de albumina p/v), quando ph alcança 7,6. Figura 08: Resposta diminuída dos receptores de Cálcio, com 3 mm de Ca extracelular (+ 5% de albumina p/v), quando ph alcança 7,2. 29

30 RESULTADOS E DISCUSSÃO Figura 09: Experimento idêntico, com o uso de células da paratireóide bovina. Resposta aumentada dos receptores de Cálcio, com 2,5 mm de Ca extracelular (+ 5% de albumina p/v), quando ph alcança 7,6. 30

31 RESULTADOS E DISCUSSÃO Aumento em 22% o risco de ter metrite Dias pós parto Dias pós parto Martinez et al.,

32 RESULTADOS E DISCUSSÃO Células imunes Martinez et al,

33 CONCLUSÃO Alterações fisiopatológicas do ph o são capazes de modular os CaR, tanto nas células HEK-293 quanto nas da paratireóide. Os resultados in vitro demonstram que, distúrbios ácido-básicos afetam os CaR podendo alterar a função da paratireóide e o metabolismo do cálcio in vivo. 33

34 TESE A administração do produto no pré-parto, estimula maior secreção do PTH tornando a reabsorção de cálcio mais efetiva no pós-parto O produto não interfere no ph sanguíneo, promovendo uma ativação da homeostase do cálcio mais rápida 34

35 Infusão única/ coletas de sangue 18 vacas da raça holandês primíparas

36 ph em diferentes DCAD Feijó et al., Dados não publicados 36

37 RESULTADOS E DISCUSSÃO ph não foi alterado 4 animais= 2C e 2 T 37

38 Obrigada! 38