ARS VETERINARIA, Jaboticabal, SP, Vol. 22, nº3, , ISSN

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1 ARS VETERINARIA, Jaboticabal, SP, Vol. 22, nº3, , ISSN PROTEINOGRAMA E TEORES SÉRICOS DE CÁLCIO, FÓSFORO, MAGNÉSIO E FERRO DE BEZERROS RECÉM-NASCIDOS QUE MAMARAM COLOSTRO DIRETAMENTE NA VACA OU EM MAMADEIRA (PROTEINOGRAM AND SERUM LEVELS OF CALCIUM, PHOSPHORUS, MAGNESIUM AND IRON IN NEWBORN CALVES SUCKLING COLOSTRUM FROM THE COW OR NIPPLE BOTTLE) (PROTEINOGRAMA Y CONCENTRACIONES SÉRICAS DE CALCIO, FÓSFORO, MAGNESIO Y HIERRO EN BECERROS RECIÉN NACIDOS QUE MAMARON CALOSTRO DIRECTAMENTE EN LA VACA O EN MAMADERA) F.W. RIZZOLI 1, J.J. FAGLIARI 2, D.G. SILVA 3, S.L. SILVA 3, R.L.N.JORGE 4 RESUMO Foram examinados 100 bezerros recém-nascidos da raça Holandesa, distribuídos em dois grupos de 50 animais, os quais mamaram colostro diretamente na mãe (grupo 1) e colostro materno em mamadeira (grupo 2). Após o nascimento, foram colhidas amostras de sangue em sete momentos 1 a 2 h; 24 h; 48 h; 72 h; 96 h; 15 dias e 30 dias após o nascimento - para obtenção dos proteinogramas e dos teores séricos de Ca, P, Mg e Fe. Notou-se que os bezerros do grupo 1 apresentaram concentrações de proteína total (58,7±8,9 g/l a 69,5±10,5 g/l) e de gamaglobulina (13,2±6,1 g/l a 22,7±8,9 g/ L) superiores às do grupo 2 (54,7±9,1 g/l a 67,9±9,7 g/l e 1,19±0,62 g/l a 2,07±0,93 g/l, respectivamente), porém sem diferença significativa (P<0,05). Em ambos os grupos os teores séricos de gamaglobulinas foram estatisticamente (P<0,05) superiores às 24 horas (grupo 1: 22,7±8,9 g/l; grupo 2: 20,7±9,3 g/l) e às 48 horas de vida (grupo 1: 20,8±6,7 g/l; grupo 2: 19,2±8,8 g/l), quando comparados aos valores obtidos 1 a 2 horas após o nascimento (grupo 1: 14,1±5,1 g/l; grupo 2: 11,9±9,3 g/l). A partir de 72 horas de idade notou-se decréscimo gradativo da gamaglobulinemia até alcançar valores de 13,2±6,1 g/l, no grupo 1, e de 12,3±5,8 g/l, no grupo 2. Os teores séricos de albumina, alfaglobulina, betaglobulina, cálcio, fósforo e magnésio foram semelhantes em ambos os grupos. Contudo, nos dois grupos houve aumento do teor de fósforo (P<0,05) a partir de 24 horas após o nascimento, com valor máximo aos 15 dias de idade. A partir de 24 horas os bezerros amamentados pelas mães apresentaram teores de ferro (143,21±16,32 μg/dl a 210,14±19,86 μg/dl) significativamente maiores (P<0,05) que os dos animais alimentados em mamadeira (146,32±22,06 μg/dl a 186,11±30,10 μg/dl). PALAVRAS-CHAVE: Bezerro. Colostro. Proteinograma. Minerais. SUMMARY According to the way that maternal colostrum was fed 100 newborn Holstein calves were randomly allocated into two equal groups: sucking directly from their mothers (group 1) or fed through a nipple botlle (group 2). Blood samples were obtained 1 to 2 h, 24 h, 48 h, 72 h, 96 h, 15 days, and 30 days after birth for proteinogram and serum levels of Ca, P, Mg, 1 Médica veterinária autônoma. 2 Docente do Departamento de Clínica e Cirurgia Veterinária/FCAV/Unesp/Campus de Jaboticabal - E.mail: fagliari@fcav.unesp.br 3 Pós-Graduandos da FCAV/Unesp/Campus de Jaboticabal. 4 Laboratório de Apoio à Pesquisa do DCCV/FCAV/Unesp/Campus de Jaboticabal. 198

2 and Fe determinations. Calves from group 1 showed total serum protein (58.7±8.9 to 69.5±10.5 g/l) and gammaglobulin levels (13.2±6.1 to 22.7±8.9 g/l) higher than calves from group 2 (54.7±4.1 to 67.9±9.7 g/l and 11.9±6.2 to 20.7±9.3 g/l, respectively), although no statistical difference were attained (P<0.05). Serum gammaglobulin levels in both groups were statistically (P<0.05) higher at 24 hours after birth (group 1: 22.7±8.9 g/l; group 2: 20.7±9.3 g/l) and at 48 hours after birth (group 1: 20.8±6.7 g/l; group 2: 19.2±8.8 g/l), compared to values obtained at 1 to 2 hours after birth (group 1: 14.1±5.1 g/l; group 2: 11.9±9.3 g/l). From 72 hours after birth a gradual decrease in gammaglobulinemia until 13.2±6.1 g/l in group 1, and 12.3±5.8 g/l in group 2 were seen. Albumin, alphaglobulin, betaglobulin, Ca, P, and Mg serum levels were similar in both groups. However, in both groups phosphorus serum levels increased from 24 h after birth, with highest value at 15 days age. Group 1 calves had iron serum levels (143.21±16.32 to ±19.86 mg/dl) higher than group 2 calves (146.32±22.06 to ±30.10mg/dL). KEY-WORDS: Calf. Colostrum. Proteinogram. Minerals. RESUMEN Fueron examinados 100 becerros recién nacidos de lar raza Holstein, distribuidos en dos grupos de 50 animales: los que mamaron calostro directamente de la madre (grupo 1) y los que tomaron el calostro materno en mamadera (grupo 2). Después del nacimiento fueron colectadas muestras de sangre en siete momentos 1 a 2 h; 24 h; 48 h; 72 h; 96 h; 15 días y 30 días luego del nacimiento, para la obtención de los proteinogramas y de las concentraciones séricas de Ca, P, Mg y Fe. Se notó que los becerros del grupo 1 presentaron concentraciones de proteína total (58,7±8,9 g/l a 69,5±10,5 g/l) y de gamaglobulina (13,2±6,1 g/l a 22,7±8,9 g/l) superiores a las del grupo 2 (54,7±9,1 g/l a 67,9±9,7 g/l y 1,19±0,62 g/l a 2,07±0,93 g/l, respectivamente), sin embargo no hubo diferencia significativa (p<0,05). En los dos grupos los niveles séricos de gamaglobulinas fueron estadísticamente (p<0,05) superiores a los observados a las 24 horas (grupo 1: 22,7±8,9 g/l; grupo 2: 20,7±9,3 g/l) y a las 48 horas de vida (grupo 1: 20,8±6,7 g/l; grupo 2: 19,2±8,8 g/l), cuando comparados con los valores obtenidos 1 a 2 horas después del nacimiento (grupo 1: 14,1±5,1 g/l; grupo 2: 11,9±9,3 g/l). A partir de las 72 horas de edad se notó disminución gradual de la gamaglobulinemia, hasta alcanzar valores de 13,2±6,1 g/l en el grupo 1 y de 12,3±5,8 g/l en el grupo 2. Las concentraciones séricas de albúmina, alfaglobulina, calcio, fósforo y magnesio fueron semejantes en ambos grupos. No obstante, en los dos grupos hubo aumento de las concentraciones de fósforo (p<0,05) a partir de las 24 horas después del nacimiento, con valor máximo a los 15 días de edad. A partir de las 24 horas los becerros amamantados por las madres presentaron concentraciones de hierro de (143,21±16,32 μg/dl a 210,14±19,86 μg/dl), significativamente mayores (p<0,05) que las de los animales alimentados en mamadera (146,32±22,06 μg/dl a 186,11±30,10 μg/dl). PALABRAS-CLAVE: Becerro. Calostro. Proteinograma. Minerales. INTRODUÇÃO O tipo de placenta das vacas dificulta a passagem de anticorpos da mãe ao feto e implica o nascimento de bezerros hipogamaglobulinêmicos (FAGLIARI et al., 1986), chegando tal distúrbio a acometer 25% dos neonatos (STOTT, 1979). Por isso, é de fundamental importância a transferência de imunoglobulinas colostrais aos bezerros. Entretanto, a absorção intestinal de imunoglobulinas persiste por 24 a 48 horas após o nascimento (QUIROZ, 1998). Diversos fatores impedem os bezerros neonatos de obter uma eficiente imunidade passiva. Ingestão de quantidade insuficiente de colostro (BORGES et al., 2001), baixa concentração de imunoglobulinas colostrais, atraso na primeira mamada, perda precoce da capacidade de absorção intestinal do neonato (ABEL-FRANCISCO e QUIGLEY, 1993, QUIROZ, 1998), método de fornecimento do colostro e idade da vaca são fatores adicionais (WEAVER, 2000). A falha na transferência de imunidade passiva predispõe a infecções neonatais, aumentando sobremaneira a taxa de mortalidade de bezerros, constituindo-se, assim, em obstáculo adicional à criação de bezerros em rebanhos leiteiros. Perino et al. (1993) consideram falha na transferência de imunidade passiva quando o bezerro recém-nascido apresenta teor sérico de proteína total abaixo de 42,0 g/l, 48 horas após o nascimento. Depois desse período, os neonatos que apresentam concentração sangüínea de imunoglobulinas acima de 16,0 g/l mantêm bom estado de saúde no primeiro mês de vida (ADAMS, 1993). Tyler (1999) constatou que 39% das mortes observadas em bezerros com idade inferior a 16 semanas foram atribuídas a enfermidades secundárias à inadequada transferência de anticorpos maternais, como síndrome diarréia e 199

3 pneumonia. Fagliari et al. (1998) notaram que o teor sérico de ferro de bezerros diminui nos primeiros 45 dias de idade, enquanto a concentração de magnésio tende a aumentar e os teores de cálcio e fósforo oscilam discretamente. O objetivo do estudo foi investigar a influência do método de fornecimento de colostro no proteinograma e nos teores séricos de cálcio, fósforo, magnésio e ferro de bezerros recém-nascidos sadios da raça Holandesa, visto que o aleitamento em mamadeira é uma prática utilizada rotineiramente nas propriedades leiteiras e que tal procedimento requer o manuseio do colostro, diferentemente da mamada diretamente na vaca, podendo alterar a qualidade desse alimento; ademais, o volume fornecido no aleitamento artificial pode não ser o adequado para o neonato. Conseqüentemente, aventa-se a possibilidade de ocorrer alterações nos teores séricos de proteínas e de macro e microelementos transferidos do colostro materno para o sangue dos bezerros recémnascidos. MATERIAIS E MÉTODOS Foram examinados 100 bezerros recém-nascidos da raça Holandesa, distribuídos em dois grupos iguais de 50 animais, submetidos aos seguintes procedimentos: Grupo 1- ingestão de colostro à vontade mediante aleitamento diretamente na vaca uma hora após o nascimento, permanecendo os bezerros junto às mães até completarem três dias de idade. A partir daí e até o 30 dia recebiam volume de leite equivalente a 10% do peso corporal, diariamente e em mamadeira, em duas mamadas; e Grupo 2- fornecimento de volume de colostro materno correspondente a 10% do peso corporal a partir de uma hora após o nascimento, em mamadeira, em três mamadas, nos primeiros três dias de vida. A partir daí recebiam a mesma dieta dos animais do grupo 1. Logo após o nascimento, realizava-se a desinfecção do umbigo de todos os bezerros, de ambos os grupos, com solução de iodo glicerinado 1%. Ao longo dos 30 dias de estudo, os bezerros foram submetidos ao exame físico (ROSENBERGER, 1993), diariamente. As amostras de sangue foram obtidas mediante punção da veia jugular, em sete momentos após o nascimento: 1 a 2 h, 24 h, 48 h, 72 h, 96 h, 15 dias e 30 dias. Antes do primeiro momento de coleta de sangue (1 a 2 h), alguns bezerros de ambos os grupos tiveram acesso acidental à mãe por alguns minutos, podendo, nesse momento, ter ingerido pequena quantidade de colostro. Para a determinação dos teores séricos de proteína total (método do biureto), cálcio (método Labtest), fósforo (método Basques-Lustosa), magnésio (método Labtest) e ferro (método de Zak modificado) foram utilizados conjuntos de reagentes 5 e leitura das amostras em espectrofotômetro 6. As frações albumina, alfaglobulina, betaglobulina e gamaglobulina foram obtidas por fracionamento eletroforético de amostras de 0,6 ml de soro sangüíneo, conduzido em cuba horizontal contendo tampão Tris ph 9,5, utilizando-se como matriz gel de agarose 7 e leitura das frações em densitômetro 8. Para a análise estatística dos resultados, utilizouse um esquema de parcelas subdivididas, em um delineamento em blocos inteiramente casualizados. Quando se constatava significância entre grupos ou momentos, aplicava-se o teste Tukey para a comparação das médias. Para a realização das análises, utilizou-se o Statistical Analysis System-SAS (1995). Os valores foram expressos como média e desvio-padrão. RESULTADOS E DISCUSSÃO Os valores do proteinograma estão apresentados na Tabela 1. Os teores séricos de proteína total de bezerros submetidos à amamentação natural de colostro nas próprias mães (grupo 1) foram superiores a de bezerros alimentados com colostro materno em mamadeira (grupo 2), porém sem diferença significativa (P<0,05). Ao contrário, Borges et al. (2001) constataram proteinemia menor em bezerros que mamaram em suas próprias mães. Em ambos os grupos, as concentrações séricas de proteína total foram superiores àquela considerada por Perino et al. (1993), de 42,0 g/l, como sinal de falha na transferência de imunidade passiva. Comportamento semelhante foi notado em relação à albumina e à gamaglobulina. Notouse maior valor de gamaglobulina 24 e 48 horas após o nascimento, fato também relatado por Weaver (2000). A partir daí ocorreu diminuição gradativa da gamaglobulinemia e, ao final do experimento, os valores foram semelhantes aos verificados 1 a 2 horas após o nascimento, concordantes com os resultados obtidos por Fagliari et al. (1986), em bezerros da raça Guzerá, Abel- Francisco e Quigley (1993) e Fagliari et al. (1998), em bezerros da raça Holandesa. Ao longo de 30 dias após o nascimento, não se constatou influência do método de fornecimento de colostro nos teores séricos de albumina, á-globulina e â globulina, à semelhança dos achados descritos por Borges et al. (2001). Pelos dados obtidos, pode-se considerar que os métodos de fornecimento de colostro materno, com amamentação direta na mãe ou em mamadeira, não influenciaram a transferência passiva de gamaglobulinas colostrais. Em ambos os grupos, os teores séricos de gamaglobulinas foram estatisticamente (P<0,05) superiores às 24 horas (grupo 1: 22,7±8,9 g/l; grupo 2: 20,7±9,3 g/l) e às 48 horas de vida (grupo 1: 20,8±6,7 g/l; grupo 2: 19,2±8,8 g/l), quando comparados aos valores obtidos 1 a 2 horas após o nascimento (grupo 1: 14,1±5,1 g/l; grupo 2: 11,9±6,2 g/l). A partir de 72 horas de idade, notou-se decréscimo gradativo da gamaglobulinemia até 200

4 alcançarem valores de 13,2±6,1 g/l, no grupo 1, e de 12,3±5,8 g/l, no grupo 2, possivelmente devido ao catabolismo dos anticorpos colostrais e a ineficiência do sistema imune de bezerros nessa faixa etária. Essa cinética da fração gamaglobulina também foi constatada por Fagliari et al. (1998) e Borges et al. (2001). Ao longo dos 30 dias de estudo, notou-se onfalite/onfaloflebite em sete animais do grupo 1 e cinco bezerros do grupo 2, nos primeiros seis dias de vida, indicando falha no ato de desinfecção do umbigo. Neste período, verificou-se que oito bezerros do grupo 1 manifestaram diarréia; dois deles morreram mesmo medicados com antimicrobiano e fluidoterapia. Dez animais do grupo 2 apresentaram quadro diarréico, também com dois casos de óbito mesmo após o tratamento. Dois bezerros do grupo 2 apresentaram sinais clínicos de pneumonia, foram tratados com antimicrobiano e se recuperaram. A síndrome diarréia/pneumonia acometeu dois bezerros do grupo 1 e quatro bezerros do grupo 2, cujos quadros clínicos mais graves foram constatados a partir do 22º dia de idade, coincidindo com a diminuição dos teores séricos de imunoglobulinas colostrais, inferiores ao valor de 16,0 g/l, considerado por Adams (1993) como gamaglobulinemia adequada. Em relação aos teores séricos dos micro e macroelementos analisados (Tabela 2), notou-se que o método de fornecimento de colostro não influenciou a calcemia, a fosfatemia e a magnesemia ao longo dos 30 dias de estudo. Entretanto, nos dois grupos houve aumento dos teores de fósforo a partir de 24 horas após o nascimento, até o 30º dia de idade, com valor máximo aos 15 dias. A partir de 24 horas do nascimento, os bezerros amamentados pelas mães (grupo 1) apresentaram teores de ferro significativamente superiores aos daqueles alimentados em mamadeira. Nos 2 grupos experimentais, os maiores valores foram constatados 72 horas após o nascimento, coincidindo com os resultados obtidos por Fagliari et al. (1998). Tabela 1 - Média e desvio-padrão dos teores séricos (g/l) de proteína total, albumina, alfaglobulina, betaglobulina e gamaglobulina de bezerros da raça Holandesa alimentados com colostro diretamente na mãe (Grupo 1) e em mamadeira (Grupo 2), ao longo de 30 dias após o nascimento. Letras maiúsculas diferentes nas linhas indicam diferenças entre momentos, pelo teste Tukey (P<0,05) Letras minúsculas diferentes nas colunas indicam diferenças entre grupos, pelo teste Tukey (P<0,05) Tabela 2 - Média e desvio-padrão dos teores séricos de cálcio (mg/dl), fósforo (mg/dl), magnésio (mg/dl) e ferro (μg/dl) de bezerros da raça Holandesa alimentados com colostro diretamente nas mães (Grupo 1) e em mamadeira (Grupo 2), ao longo de 30 dias após o nascimento. Letras maiúsculas diferentes nas linhas indicam diferenças entre momentos, pelo teste Tukey (P<0,05) Letras minúsculas diferentes nas colunas indicam diferenças entre grupos, pelo teste Tukey (P<0,05) 201

5 CONCLUSÃO Os teores séricos de proteína total e das frações obtidas por fracionamento eletroforético em gel de agarose, inclusive da gamaglobulina, não foram influenciados significativamente pela forma de administração de colostro, ou seja, aleitamento diretamente na vaca ou em mamadeira. Em ambos os grupos, os teores séricos de gamaglobulina foram estatisticamente superiores às 24 horas e às 48 horas de vida, quando comparados aos valores obtidos 1 a 2 horas após o nascimento. A partir de 72 horas de idade, notouse decréscimo gradativo da gamaglobulinemia ao longo dos 30 dias de estudo. A calcemia, a fosfatemia e a magnesemia também não foram influenciadas pelo tipo de aleitamento; no entanto, os bezerros amamentados pelas mães apresentaram teores séricos de ferro significativamente maiores que os que receberam colostro em mamadeira. AGRADECIMENTO Agradecemos à Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) pelo auxílio concedido para a execução desse trabalho. ARTIGO RECEBIDO: Outubro/2004 APROVADO: Abril/2005 REFERÊNCIAS ABEL-FRANCISCO, S. F., QUIGLEY, J. D. Serum immunoglobulin concentrations after feeding maternal colostrum or maternal plus colostral supplement to dairy calves. American Journal of Veterinary Research, v.54, n.7, p , FAGLIARI, J. J., SANTANA, A. E., LUCAS, F. A., CAMPOS FILHOS, E., CURI, P. R. Constituintes sangüíneos de bovinos recém-nascidos das raças Nelore (Bos indicus), Holandesa (Bos taurus) e de bubalinos (Bubalus bubalis) da raça Murrah. Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia, v.50, n.3, p , PERINO, L. J., SUTHERLAND, R. L., WOLLEN, N. E. Serum gammaglutamytransferase activity and protein concentration at birth and after suckling in calves with adequate and inadequate passive transfer immunoglobulin G. American Journal of Veterinary Reasearch, v.54, n.1, p.56-59, QUIROZ, R.G. Impact of colostrum management and quality serum immunoglobulin level in calves. Veterinaria Mexico, v.29, n.2, p , ROSENBERGER, G. Exame Clínico dos Bovinos. Rio de Janeiro: Guanabara-Koogan, p. SAS Institute Inc. User s Guide: Statistics. Version 6.12, Cary, STOTT, G. H. Colostral immunoglobulin transfer in calves. I-Period of absortion. Journal of Dairy Science, v.62, n.10, p , TYLER, J. W. Partitioning the mortality risk associated with inadequate passive transfer of colostral immunoglobulins in dairy calves. Journal of Veterinary Internal Medicine, v.13, n.4, p , WEAVER, D. M. Passive transfer of colostral immunoglobulins in calves. Journal of Veterinary Internal Medicine, v.14, n.6, p , ADAMS, R. Physiologic differences between twin and single born beef calves in the first two days of life. Cornell Veterinary, v.83, p.13-29, BORGES, A. S., FEITOSA, F. L. F., BENESI, F. J.. Influência da forma de administração e da quantidade fornecida de colostro sobre a concentração de proteína total e de suas frações eletroforétidas no soro sangüíneo de bezerros da raça Holandesa. Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia, v.53, n.5, p , FAGLIARI, J. J., LUCAS, A., OLIVEIRA. J. A., FERREIRA NETO, J. M. Quadro seroprotéico de bezerros submetidos a três sistemas de imunização contra paratifo. Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia, v.38, p ,