Bolsista PIBIC FAPEMIG/EPAMIG - EcoCentro, Lavras, MG,

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1 EFEITOS DOS PRINCÍPIOS ATIVOS VOLÁTEIS DE ÓLEOS ESSENCIAIS DE CONDIMENTOS NA INIBIÇÃO DO DESENVOLVIMENTO MICELIAL E ESPORULAÇÃO DE FUNGOS ASSOCIADOS A PRODUTOS DE PANIFICAÇÃO Dallyane Flávia Alves Soares (1), Sara Maria Chalfoun (2), Marcelo Cláudio Pereira (3), Virgínia Guerra Elizei (4) (1) Bolsista PIBIC FAPEMIG/EPAMIG - EcoCentro, Lavras, MG, dallyeu@hotmail.com; (2) Pesquisadora EPAMIG EcoCentro, Lavras, MG, chalfoun@ufla.br; (3) Doutorando UFLA, Lavras, MG, marcelo.claudio@posgrad.ufla.br; (4) Graduanda Ciências Biológicas - UNILAVRAS, Lavras, MG, vi_elizei@yahoo.com.br Introdução As plantas condimentares vêm acompanhando a civilização há mais de anos. O uso de condimentos como conservante alimentício é evidente. Substâncias naturais adicionadas aos alimentos tornam-os mais atrativos, não sendo tóxicos mesmo quando usados em quantidades elevadas. A ação preventiva de ervas e temperos, como canela, cravo, hortelã, tomilho, alecrim, entre outros tem recebido atenção especial no mundo científico no processo de conservação de alimentos. É crescente a preocupação com a qualidade de alimentos, em relação a fungos e seus metabólitos como as micotoxinas que são substâncias tóxicas e potencialmente cancerígenas produzidas por fungo. (PEREIRA, 2001). Os princípios ativos dos condimentos localizam-se principalmente na fração de óleo essencial, que são misturas complexas de diferentes compostos que contribuem com propriedades antimicrobianas. (PARRY, 1962; FARAG, et al., 1989;). Material e Métodos O presente trabalho foi desenvolvido no laboratório de fitopatologia do Centro Tecnológico do Sul de Minas (CTSM) - EcoCentro da EPAMIG, em Lavras, MG. Foram utilizados para os testes, isolados de espécies de fungos

2 2 Aspergillus ochraceus Wilhelm e Penicillium roqueforti Thompsom, obtidos de pães que apresentavam contaminações visíveis a olho nu, sendo portanto impróprios para o consumo. Os isolados foram obtidos com o auxilio de um palito de madeira para retirar os esporos das colônias visíveis do pão. Cada isolado foi transferido para placas de Petri de 9 cm de diâmetro contendo meio de cultura batata, dextrose e agar (BDA) mais cloranfenicol. As placas foram incubadas em BOD a 25 C por sete dias. A extração dos óleos de alho, canela, cravo e tomilho basearam-se no método mais comum e empregado para extrair óleo essencial de folhas e ervas, a destilação por arraste a vapor descrita por Koketsu e Gonçalves (1991). Os fungos foram inoculados diretamente no meio de cultura BDA. Utilizou-se de pequenos discos de papel de filtro, de 5 mm de diâmetro, que foram embebidos nas soluções de óleo essencial diluído nas concentrações citadas, e colocados na tampa das placas de Petri. Depois de tampadas, as placas foram vedadas por um filme plástico para impedir que os princípios voláteis dos óleos fossem perdidos. As placas foram incubadas em BOD a uma temperatura de 25 com fotoperíodo de 12 horas por sete dias. Após o sétimo dia de incubação foi observado o desenvolvimento micelial, sendo avaliada a porcentagem da placa que foi tomada pelo fungo. A contagem de esporos também foi realizada no mesmo dia. Os dados foram analisados utilizando-se um pacote estatístico Sistema de Análise de Variância para Dados Balanceados (Sisvar) (FERREIRA, 2000) e as médias foram comparadas pelo teste Scott e Knott (1974). Resultados e Discussão No tratamento do fungo Aspergillus ochraceus, não houve a inibição do crescimento micelial por nenhum dos óleos essenciais testados. O fungo tomou toda a placa, demonstrando que os princípios voláteis dos óleos essenciais dos condimentos testados não são eficientes para inibir o desenvolvimento micelial do A. ochraceus. Pereira (2001), observou que o cravo e a canela, quando adicionados ao meio de cultura, apresentaram uma inibição total do desenvolvimento micelial e esporulação do A. niger. O alho apresentou um efeito a partir de concentrações menores que o tomilho e erva-doce e menta (Tabela 1).

3 3 A literatura relata que a ação do extrato de alho, óleo essencial de manjericão e capim-limão a ppm e de rizomas de Nardostachys jatamasi foram eficientes no controle de A. flavus. E a citronela, citral e ulgenol inibiram o crescimento e a produção de aflotoxina. Em relação a outros fungos, o óleo essencial de capim-limão a ppm foi o mais eficiente para os fungos do gênero Penicillium, Alternaria e Fusarium (ROSSETO et al., 2003). Araújo (2005) obteve resultados apontando que o efeito inibitório do extrato aquoso de gengibre sobre a esporulação de A. ochraceus foi maior que a testemunha, e o extrato de aquoso de alho inibiu totalmente a esporulação do fungo. O comportamento dos extratos alcoólicos de cravo, canela e tomilho tiveram uma inibição total do fungo, indicando um efeito positivo dos condimentos na inibição da esporulação, com diferenças significativas dos tratamentos. Os resultados obtidos da atuação dos óleos essenciais sobre o desenvolvimento micelial do Penicillium roqueforti demonstraram que o óleo do tomilho foi o que teve melhor desempenho, apresentando uma inibição de 90% do desenvolvimento micelial do fungo, na sua maior concentração ppm. Os óleos essenciais dos demais condimentos, alho, canela e cravo não apresentaram nenhum efeito inibitório, permitindo uma ocupação total (100%) do fungo na placa de Petri. Araújo (2005) observou que efeitos benéficos obtidos através da adição de condimentos aos produtos de panificação, aliados às práticas e medidas preventivas, têm possibilitado um tempo maior de prateleira sem que apresentem sinais visíveis de contaminação por fungos. Este mesmo autor verificou que os extratos alcoólicos de cravo, canela, gengibre e tomilho tiveram um significativo ou, às vezes, total efeito inibitório sobre o desenvolvimento micelial e esporulação do fungo P. roqueforti. Em se tratando de extrato alcoólico de alho, não observou um efeito inibitório, indicando que o alho pode promover um crescimento dos fungos devido aos seus componentes nutricionais. O presente trabalho apresentou um resultado diferente do que é relatado na literatura por Campos (2004), que encontrou um efeito inibidor dos condimentos de cravo e canela nas concentrações de 10% e 20%. O extrato de

4 4 alho e orégano também exerceram um significativo efeito no crescimento micelial dos fungos. Parry (1962) e Farag et al., (1989) constataram um elevado controle de fungos apresentado pelos óleos essenciais dos condimentos de alho, canela, cravo e tomilho sobre a inibição do desenvolvimento micelial e esporulação, quando misturados ao meio de cultura, confirmando o fato de que grande parte dos princípios ativos destes condimentos encontra-se na fração de óleo essencial. Ao contrário de Campos (2004), os condimentos cravo, canela e tomilho, não tiveram uma ação inibitória do desenvolvimento micelial do fungo, podendo ser atribuída pela utilização de extratos, uma vez que os princípios ativos se concentram em grande parte na fração de óleo essencial. De acordo com Araújo (2005), obteve-se um efeito semelhante à testemunha para o fungo P. roqueforti, na atuação do óleo de alho sobre a esporulação, demonstrando quase nenhum efeito na redução da esporulação (Tabela 2). Segundo Pereira (2001) e Araújo (2005), o óleo essencial de cravo têm significantes efeitos antifúngicos, o que não foi comprovado neste trabalho, podendo ser atribuído a diversos fatores, tais como: diferença do lote, tipo de substrato, onde foi cultivado, hora da coleta ou por não ser volátil os princípios ativos que inibem a esporulação. Conclusões Os princípios ativos voláteis dos óleos essenciais de alho, canela, cravo e tomilho não apresentaram efeitos inibidores do desenvolvimento micelial do Aspergillus ochraceus. Houve uma redução da esporulação pelos óleos de canela, cravo e tomilho nas maiores concentrações (2.000ppm). O óleo essencial de tomilho na maior concentração inibiu o desenvolvimento micelial do Penicillium roqueforti. A esporulação foi reduzida pelos óleos de alho, canela e tomilho também nas maiores concentrações. Apenas o tomilho apresentou um principio volátil capaz de inibir o crescimento micelial e a esporulação do fungo Penicillium roqueforti.

5 5 Os demais condimentos, com exceção do cravo, inibiram a esporulação dos fungos Aspergillus ochraceus e Penicillium roqueforti proporcionalmente à elevação das concentrações. Agradecimentos Os autores agradecem à Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais (Fapemig), pelo auxílio financeiro e pela bolsa de iniciação científica. Referências ARAÚJO, R. C. Z. Embalagens ativas com ervas aromáticas e condimentos na conservação de pães artesanais p. Dissertação (Mestrado em Ciência dos Alimentos) UFLA, Lavras. CAMPOS, C. C. F. Efeito inibidor da adição de condimentos e combinados no controle de microrganismos associados a produtos de panificação p. Monografia (Graduação em Ciências Biológicas) Centro Universitário de Lavras, Lavras. FARAG, R. S.; DAW, Z. Y.; ABO-RAYA, S. H. Influrnce of somo spice essencial oils on Aspergillus parasiticus greowth and production of aflotoxinas in a synthetic medium. Journal of Food Science, v. 54, n.1, p , FERREIRA, D. F. Análise estatística por meio do Sisvar para Windows versão 4.0 In: REUNIÃO ANUAL DA REGIÃO BRASILEIRA DA SOCIEDADE INTERNACIONAL DE BIOMETRIA, 45, 2000, São Paulo. Anais... São Paulo, SIB, p

6 6 KOKETSU, M.; GONÇALVES, S. L. Óleos essenciais e sua extração por arraste a vapor. Rio de Janeiro: EMBRAPA CTAA, p. (EMBRAPA CTAA. Documentos, 8). PARRY, J. W. Spice: morphology of histology, chemistry. New York: Chemical Publishing Company, 1962, v. 2, 183p. PEREIRA, M. C. Efeitos da adição de condimentos no controle de microrganismos, na conservação de produtos de panificação e inibição de metabólitos produzidos por fungos associados ao café p. Dissertação (Mestrado em Ciências dos Alimentos) UFLA, Lavras. ROSSETO, C. A. V.; CARMO, M. G. F.; SOARES A. Toxicidade de óleos essenciais de alho e casca de canela contra fungos do grupo Aspergillus flavus. Revista de Saúde Pública, São Paulo, v. 38, n. 2, p. Tabela 1 - Esporulação in vitro do fungo Aspergillus ochraceus submetidos a diferentes concentrações de óleo de alho, canela, cravo e tomilho - Lavras, MG Tratamento R1 R2 R3 Média Água d Álcool etílico c Alho I b Alho II b Alho III c Alho IV c Canela I a Canela II a Canela III a Canela IV a Cravo I a Cravo II a Cravo III a Cravo IV a Tomilho I a Tomilho II a Tomilho III a Tomilho IV a CV % 14,94 NOTA: Médias seguidas pela mesma letra na coluna não diferem entre si, pelo teste Scott Knott a 5%. CV Coeficiente de variação

7 7 Tabela 2 - Esporulação in vitro do fungo de Penicillium roqueforti submetidos a diferentes concentrações de óleo de alho, canela, cravo e tomilho - Lavras, MG Tratamento R1 R2 R3 Média Álcool etílico a Água b Alho I a Alho II a Alho III a Alho IV a Canela I a Canela II a Canela III a Canela IV a Cravo I d Cravo II d Cravo III d Cravo IV c Tomilho I a Tomilho II a Tomilho III a Tomilho IV a CV % 28,11 NOTA: Médias seguidas pela mesma letra na coluna não diferem entre si, pelo teste Scott Knott a 5%. CV Coeficiente de variação