Estudo de associação de polimorfismos no gene 5-HTT (SLC6A4) com a obesidade Licínio Manco, Helena Dias, Magdalena Muc, Cristina Padez Centro de Investigação em Antropologia e Saúde (CIAS), Departamento de Ciências da Vida, Universidade de Coimbra, Portugal
Introdução A prevalência da obesidade tem vindo a aumentar a nível mundial e deve-se essencialmente a fatores ambientais. No entanto, estudos epidemiológicos mostram que a obesidade tem também uma forte componente genética (40-70% da variabilidade inter individual do IMC). Os recentes estudos de associação genómica GWAS (genomewide association studies) identificaram mais de 75 loci associados a pelo menos um parâmetro de obesidade.
A associação entre obesidade e genes candidatos relacionados com as funções serotoninérgicas no sistema nervoso central (SNC) tem vindo a ser também explorada. O gene 5-HTT (SLC6A4; chr: 17q11.2) que codifica o transportador da serotonina tem vindo a ser associado a diversos distúrbios psiquiátricos e comportamentais incluindo depressão, ansiedade e suicídio. Alguns estudos recentes mostram que a modulação do sistema serotoninérgico do SNC por polimorfismos no gene 5-HTT pode ser um fator de suscetibilidade à obesidade.
Rot et al. CMAJ (2009) 180:305. O transportador da serotonina (5-HTT) é uma proteína membranar localizada nos neurónios pré-sinápticos, sendo responsável pela recaptação do neurotransmissor serotonina (5- HT) para ser reciclado ou degradado.
Foram descritos dois polimorfismos no gene 5-HTT que influenciam a sua atividade transcricional : 5-HTTLPR: na região promotora, que consiste numa inserção / deleção de 43 pb com dois alelos comuns, longo (L) e curto (S). STin2: no intrão 2, que consiste num VNTR (variable number of tandem repeat) de 17 pb com dois alelos comuns de 10 ou 12 cópias do elemento de repetição e um alelo raro com 9 cópias. Adaptado de Haddley et al., 2012
Objetivo Investigar a associação dos polimorfismos 5-HTTLPR e STin2 do gene 5-HTT com o excesso de peso e a obesidade numa amostra de jovens adultos de naturalidade Portuguesa.
Metodologia Amostra de 535 indivíduos : 225 sexo masculino; 310 sexo feminino; idades 17-36 anos (média 20,8). Recrutados aleatoriamente entre estudantes da Universidade de Coimbra de setembro de 2013 a fevereiro de 2014.
Exames antropométricos Peso (Kg) e Estatura (cm) para cálculo do IMC (Peso/Estatura 2 ) e utilizados os intervalos da OMS para definir excesso de peso e obesidade. A percentagem de gordura corporal foi determinada por bioimpedância elétrica. Foram utilizados questionários (IPAQ) para avaliar a atividade desportiva.
Genotipagem A extração de DNA foi feita a partir de esfregaço bucal e os polimorfismos foram genotipados por PCR com primers específicos. Os produtos amplificados foram separados por eletroforese em geles de agarose ou acrilamida.
Análise Estatística A associação dos polimorfismos com o excesso de peso / obesidade foi feita segundo um modelo caso-controlo, por regressão logística e por testes de qui-quadrado no estudo de haplótipos. O grupo controlo incluiu os indivíduos com IMC<25 Kg/m2 e no grupo casos foram agrupados os indivíduos com excesso de peso e obesidade (IMC 25 Kg/m2). Análise estatística com o software PLINK version 1.07 (http://pngu.mgh.harvard.edu/~purcell/plink/).
Resultados
Antropometria Características obtidas para a amostra estudada e comparação entre sexos. Atividade física Parâmetros Total Sexo Feminino Sexo Masculino N (%) 535 310 (57.9) 225 (42.1) Idade média (anos) 20.68 (2.65) 20.56 (2.49) 21.09 (2.84) Peso (kg) 64.32 (12.64) 58.44 (9.37) 72.04 (12.23) Altura (m) 1.67 (0.09) 1.61 (0.06) 1.74 (0.07) IMC (kg/m 2 ) 23.00 (3.60) 22.51 (3.42) 23.67 (3.66) Gordura corporal (%) 22.81 (7.50) 27.73 (5.18) 16.36 (4.64) Défice de peso (<18.5 kg/m 2 )* 23 (4.3) 18 (5.7) 5 (2.3) Peso normal ( 18.5 to <25 kg/m 2 ) * 402 (75.1) 242 (78.1) 160 (71.1) Excesso de peso ( 25 kg/m 2 to <30 kg/m 2 ) * 88 (16.5) 38 (12.3) 50 (22.2) Obesidade ( 30 kg/m 2 ) * 22 (4.1) 12 (3.9) 10 (4.4) Pratica desporto * (~300 min AF vigorosa/semana) 146 (27.3) 57 (18.4) 89 (39.6) Não pratica desporto * (~80 min AF vigorosa/semana) 389 (72.7) 253 (81.6) 136 (60.4) Dados: média (SD) para variáveis contínuas e N (%) para variáveis categóricas (*).
Genótipos do polimorfismo 5-HTTLPR 529 pb 465 pb LL LS LL SS LS M 500 pb 300 pb 200 pb Produtos da amplificação por PCR separados por eletroforese em gel de agarose (2%) mostrando os genótipos comuns do polimorfismo 5-HTTLPR.
Genótipos do polimorfismo STin2 500 pb 300 pb 300 pb 266 pb 200 pb 249 pb 12 09 12 10 12 10 12 09 10 10 12 12 M Produtos da amplificação por PCR separados por eletroforese em gel de acrilamida (10%) mostrando os genótipos mais comuns do polimorfismo STin2.
Frequências genotípicas, alélicas e haplotípicas para os dois polimorfismos, 5-HTTLPR e STin2 na amostra estudada. Polimorfismos Genótipos N (freq) Alelos N (freq) P HWE 5-HTTLPR (N=530) LL: 170 (0.321) LS: 249 (0.470) SS: 111 (0.209) L: 0.556 S: 0.444 0.308 STin2 (N=523) 12-12: 197 (0.376) 12-10: 233 (0.446) 10-10: 87 (0.166) 12-09: 5 (0.010) 10-09: 1 (0.002) 12: 0.604 10: 0.390 09: 0.006 0.243 Haplotypes 5-HTTLPR/STin2 (N=518) L 12: 252 (0.243) S 12: 371 (0.358) L 10: 319 (0.308) S 10: 88 (0.085) L 09: 6 (0.006)
Associação dos polimorfismos 5-HTTLPR e STin2 com o risco de excesso de peso / obesidade. Grupos Locus (N) Alelos Normal N (freq) OB/OW N (freq) OR (95% CI) P a P b Amostra total 5-HTTLPR (530) S L 384 (0.46) 456 (0.54) 87 (0.40) 133 (0.60) 0.78 (0.58-1.05) 0.11 0.32 STin2 (517) 10 12 309 (0.38) 507 (0.62) 98 (0.45) 120 (0.55) 1.32 (0.98-1.77) 0.07 0.14 Pratica desporto 5-HTTLPR (146) STin2 (139) S L 10 12 92 (0.41) 134 (0.59) 82 (0.39) 130 (0.61) 32 (0.48) 34 (0.52) 26 (0.39) 40 (0.61) 1.43 (0.79-2.06) 1.03 (0.60-1.77) 0.23 0.27 0.92 0.90 Não pratica desporto 5-HTTLPR (384) S L 292 (0.48) 322 (0.52) 55 (0.36) 99 (0.64) 0.64 (0.45-0.91) 0.01 0.05 STin2 (378) 10 12 227 (0.38) 377 (0.62) 72 (0.47) 80 (0.53) 1.47 (1.03-2.09) 0.03 0.15 Valores de OR estimados para o alelo minor e P-values não-ajustados (P a ) e ajustados para a idade e sexo (P b ).
Associação dos haplótipos combinando os dois polimorfismos 5-HTTLPR/STin2 com o risco de excesso de peso/obesidade. Grupos Haplótipo Groupo Normal Group OB/OW χ 2 P a χ 2 P b Amostra total S10 0.114 0.111 0.01 0.904 0.014 0.90 L10 0.268 0.339 4.2 0.041 S12 0.344 0.284 2.8 0.093 L12 0.274 0.267 0.04 0.837 Pratica desporto S10 0.134 0.129 0.01 0.91 2.062 0.56 Não pratica desporto L10 0.252 0.264 0.04 0.84 S12 0.281 0.355 1.34 0.24 L12 0.333 0.251 0.33 0.21 S10 0.107 0.107 0.0002 0.988 8.786 0.03 L10 0.273 0.367 5.1 0.024 S12 0.366 0.248 7.4 0.006 L12 0.254 0.278 0.4 0.544 P-values obtidos para cada haplótipo (P a ) e para o conjunto dos haplótipos (P b ).
Conclusões Foram encontradas evidências de associação entre polimorfismos do gene 5-HTT e o excesso de peso / obesidade, nomeadamente para os alelos 5-HTTLPR (L) e Stin2 (10). O estudo mostrou que a inatividade física acentua a influência dos fatores genéticos 5-HTT no risco da obesidade, evidenciando interação entre genes e ambiente (GXA) no risco para obesidade.
OBRIGADO!