RELATÓRIO TÉCNICO-CIENTÍFICO FINAL (Observação: as informações prestadas neste relatório poderão, no todo ou em parte, ser publicadas pela FAPESC.) 1. IDENTIFICAÇÃO DO PROJETO (item a ser preenchido pela FAPESC) 1.1. N do Contrato: 12.742/2007-6 Nº Convênio: Nº FCTP: Chamada Pública a que se refere: Pesquisa Universal CT&I FAPESC 03/2006 1.2. Título do Projeto: Análise fitoquímica, farmacológica e controle de qualidade de espécies de Bauhinia originárias da Mata Atlântica 1.3 Grande Área do Conhecimento (usar a nomenclatura do CNPq): 1.06.01.05-8 1.4. Coordenador(a) do Projeto: Christiane Meyre da Silva Bittencourt 1.5. Localização do projeto (Cidade/Região/SDR): Itajaí-SC 1.5.1. Instituição: Universidade do vale do Itajaí-UNIVALI 1.6.1. Valor total do projeto (incluindo todos os intervenientes): R$84.371,00 1.6.2. Participação da FAPESC: R$ 14.371,00 Custeio : R$ 5.915,00 Capital: R$ 8.456,00 1.6.3. Outras instituições participantes (nomear): 1.7. Início do Projeto: 17/03/2008 Término: 31/12/2008 1.8 Equipe Executora Nome Titulação Instituição Função no projeto Christiane Meyre da Silva Bittencourt Márcia Maria de Souza Tania Mari Bellé Bresolin Doutora em Química Ogânica Doutora em Ciências Biológicas Doutora Bioquímica em UNIVALI UNIVALI UNIVALI Coordenador Colaborador Colaborador
2 DESCRIÇÃO DA PESQUISA, RESULTADOS E IMPACTOS 2.1 Resumo da pesquisa (até 500 palavras, espaço simples, fonte times new roman, tamanho 10). Neste estudo pretendeu-se dar continuidade aos estudos iniciados com a espécie botânica Bauhinia e analisar outras espécies que fazem parte da flora da Mata Atlântica. Além da análise fitoquímica e avaliação da ação analgésica o presente projeto teve como objetivo a realização de um controle de qualidade com amostras comercializadas de B. forficata através da análise das características organolépticas, análise cromatográfica por cromatografia em camada delgada (CCD) e cromatografia de alta eficiência (CLAE), além de análise microscópica. Para a investigação de espécies de Bauhinia inicialmente foram adquiridas pequenas amostras de Bauhinia sp Vila Olimp. (folhas frescas e secas), Bauhinia sp Nov., B. cf guianensis Var. splendens, B. coronata e B. forficata sementes. As amostras foram submetidas à extração em metanol sob agitação por 2 horas e posteriormente concentradas em evaporador rotatório e avaliados através de CCD. Pode-se evidenciar a semelhança no perfil cromatográfico de Bauhinia sp Vila Olimp. Fresca e seca, sendo que no material vegetal seco pôde-se observar concentrações maiores de duas substâncias com fator de retenção (Rf) de 0,83 e 0,55. A Bauhinia sp nov apresenta compostos fenólicos e revela a presença de várias substâncias terpênicas, porém em pequenas quantidades. A B. guianensis não apresentou perfil cromatográfico interessante do ponto de vista fitoquímico já a B. coronata apresenta compostos fenólicos além de várias substâncias terpenóicas ou esteroidal em grandes quantidades. Nesta análise preliminar a planta que tem maior importância fitoquímica seria a B. coronata. Infelizmente não pode-se dar continuidade aos estudos fitoquímicos com esta espécie uma vez que o fornecedor não pode viabilizar o material vegetal. Considerando a facilidade na coleta das sementes de B. forficata, iniciou-se uma investigação fitoquímica e farmacológica com esta espécie. Através de procedimentos cromatográficos com a fração apolar pode-se isolar e identificar um esteróide, β-sitosterol e uma mistura de α,β-amirina. Por CCD utilizando cloreto férrico não foi observado a presença de kaempferitrina na fração polar e por CLAE pôde-se evidenciar um composto com o mesmo tempo de retenção do padrão kaempferitrina. Sugere-se a continuidade dos estudos fitoquímicos com esta fração com o intuito de isolar substâncias fenólicas uma vez que apresentou uma inibição de 59,1% no modelo de contorções abdominais induzidas pela administração de ácido acético (0,6%) em camundongos frente a 15,3% para fração de hexano e 21,3 % para a fração de diclorometano. Para o estudo de controle de qualidade de amostras comerciais à base de B. forficata folhas foram analisadas 10 amostras que inicialmente foram identificadas através de siglas de A-J. Todas as amostras foram reprovadas quanto à presença de material estranho, ficando bem acima do permitido que é no máximo de 2%. Por CCD verificou-se que a amostra G apresenta três compostos com R f de 0,33, de 0,48 e 0,57, não apresentando o marcador químico kaempferitrina o qual apresenta R f de 0,43; por CLAE observou-se um pico dentro dos limites estabelecidos para tempo de retenção referente ao marcador químico. O perfil cromatográfico por CCD desenvolvido pela amostra I foi diferente do perfil da amostra autêntica de B. forficata, sendo que por CLAE observou-se a presença do marcador químico. As demais amostras analisadas apresentaram por CCD e CLAE a presença da kaempferitrina. Na análise microscópica observou-se que apenas a amostra H e J apresentam-se iguais a B. forficata autêntica, sendo que as amostras E e F, G e I aparentam ser outra espécie de Bauhinia.
2.2 Caracterização da Pesquisa: PESQUISA BÁSICA (PB): PB visando o avanço do conhecimento sobre o tema em estudo (BAC): X PB para avançar conhecimento, com potencial de aplicação tecnológica (BT) PB para o avanço do conhecimento, com potencial para contribuir em políticas públicas (BP) PB visando avançar o conhecimento, com potencial de aplicação pública ou privada (BPP) PESQUISA TECNOLÓGICA (PT) PESQUISA EM POLÍTICAS PÚBLICAS (PP) PESQUISA TECNOLÓGICA E POLÍTICAS PÚBLICAS (TPP) 2.3 Síntese de resultados e impactos da pesquisa - cumprimento dos objetivos; impactos dos resultados da pesquisa: avanço do conhecimento; inovação tecnológica; benefícios sociais, econômicos, ambientais, culturais e regionais, efetivos ou esperados; contribuição à formulação de políticas públicas; outros impactos ou efeitos observados ou potenciais (até 500 palavras, espaço simples, fonte times new roman, tamanho 10) A utilização de plantas medicinais com fins medicinais, para o tratamento, cura e prevenção de distúrbios vem ao longo dos anos ganhando prestígio e estimulando os pesquisadores a buscarem a comprovação de seu uso na medicina através de estudos multidisciplinares. Considerando que estudos realizados no Núcleo de Investigações Químico-Farmacêutico (NIQFAR), do curso de Farmácia da Univali, vêm contribuindo significativamente na elucidação da composição química e atividade farmacológica de produtos naturais, com maior ênfase para espécies vegetais da flora catarinense, este projeto envolveu o gênero Bauhinia e o controle de qualidade de drogas vegetais a base da espécie B. forficata. Pode-se observar diferenças significativas, em relação ao perfil cromatográfico, entre as distintas espécies avaliadas, sendo que neste trabalho deu-se maior ênfase a espécie B. forficata sementes onde pode-se verificar uma atividade analgésica maior na fração polar responsável pelo acúmulo principalmente de compostos fenólicos sugerindo a continuidade dos estudos com o objetivo de isolar os compostos majoritários. Visto que no mercado farmacêutico há uma grande variedade de chás, aos quais se atribui às propriedades da B. forficata folhas, e considerando à similaridade desta espécie com outras do mesmo gênero, neste trabalho realizou-se um controle de qualidade destas preparações utilizando a kaempferitrina como um marcador químico, uma vez que o mesmo apresenta propriedades hipoglicemiantes. Os critérios utilizados como parâmetros de qualidade para fins farmacêuticos podem ser encontrados nas Farmacopéias, os quais incluem análises de identidade, pureza e teor dos constituintes químicos, mas monografias com drogas vegetais são bastante escassas, tornando-se necessário criar critérios de qualidade para as mesmas. Neste sentido foram utilizadas técnicas cromatográficas, como cromatografia em camada delgada (CCD) e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), além de análise de material estranho, características organolépticas e microscopia possibilitando no futuro sua utilização para implementação do controle de qualidade com esta espécie. Pode-se observar que a maioria das amostras avaliadas apresentam-se contaminadas ou por material inorgânico ou material orgânico. Por existir uma similiaridade macroscópica entre as diversas espécies de Bauhinia a adulteração das preparações vegetais é muito comum e, aliado a isto, as condições pelas quais as plantas se desenvolvem podem alterar a composição química. No Brasil a regulamentação e controle de fitoterápicos são regidos por legislações e monografias oficias, respectivamente. Infelizmente são poucas as espécies vegetais que possuem critérios de identificação, autenticidade e pureza claramente definidos. A ausência de parâmetros específicos para a produção e comercialização de plantas medicinais, bem como análises que garantam a qualidade, segurança e eficácia pode vir a contribuir para as fraudes. Os resultados do presente projeto revelam a importância de se estabelecer normas para o cumprimento de técnicas de controle de qualidade de preparações vegetais comercializadas e a necessidade de implementação na fiscalização destes produtos.
3. DETALHAMENTO TÉCNICO 3.1. Data: / / Prestação de contas financeira: Finalizada X Em atraso 3.2. Avaliação (feita pelo(a) coordenador(a) da pesquisa): A) O Projeto se desenvolveu segundo a proposta originalmente definida? Sim X Não Se houve mudanças significativas, elas foram especificadas e justificadas? Sim Não Houve solicitação de alteração de rubrica (custeio/capital)? Sim Não Descrever as alterações: B) Equipamentos adquiridos, quando for o caso: Percolador em aço inox para extração Evaporador rotativo a vácuo Coluna para cromatógrafo de alta eficiência e pré coluna Cronômetro digital C) Problemas ou dificuldades na execução do projeto, quando houver: Dificuldade na obtenção de material vegetal para a realização aprofundada dos estudos fitoquímicos com algumas espécies de Bauhinia. D) Objetivos e metas previstas foram atingidas? Totalmente X Parcialmente Comentar:
E) Disseminação do conhecimento e produção gerada pela pesquisa: - Artigos publicados ou encaminhados (quantidade): 01 - Dissertações ou teses originadas ou incorporadas: - Livros publicados ou encaminhados: - Divulgação na Internet: - Participação em Congressos, Simpósios ou Seminários: ENGEL, I. C. ; CECHINEL FILHO, V ; MEYRE- SILVA, C.. Controle de qualidade de droga vegetal à base de Bauhinia forficata. In: VI Jornada Farmacêutica: Formação & Atuação. Ciclo de Atualização em Investigação Químico-Farmacêuticos CAIQFAR, 2005, Itajaí. VI Jornada Farmacêutica: Formação & Atuação. Ciclo de Atualização em Investigação Químico-Farmacêuticos CAIQFAR. Itajaí : UNIVALI, 2005. v. 1. p. 88-88. - Registro de Propriedade Intelectual: - Outros: Descrever a produção e sua repercussão: Os resultados foram apresentados na Revista Brasileira de Farmacognosia, periódico publicado trimestralmente pela Sociedade Brasileira de Farmacognosia, responsável pela divulgação de trabalhos científico originais na área de farmacognosia, a qual proporciona o intercâmbio de informações entre todos os pesquisadores. Controle de qualidade de drogas vegetais a base de Bauhinia forficata Link (Fabaceae). Revista Brasileira de Farmacognosia, v. 18, p. 258-264, 2008. ENGEL, I. C.; FERREIRA, R. A.; CECHINEL FILHO, Valdir; MEYRE-SILVA, C.. F) Principais benefícios efetivos ou potenciais para a sociedade em decorrência da pesquisa, entre os seguintes aspectos, no que couber: Incremento da renda familiar... Aumento da ocupação/emprego... Redução da jornada de trabalho... Melhoria do sist. de transporte... Melhoria do sist. de comunicação... Melhoria do fornec. de energia... Aquisição de bens duráveis... Satisfação do beneficiado... Melhoria do Meio Ambiente... Diretrizes para Políticas Públicas... Avaliação de Políticas Públicas... Avaliação da Tecnologia no setor... Contribuição ao Desenvolvimento Regional.. Possibilidade de obter patente... Agregação de valor a produtos... Redução de resíduos... Outros: Descrever os benefícios assinalados: Melhoria da saúde... Melhoria do saneamento... Melhoria da moradia... Melhoria da alimentação... Alternativa econômica/renda... Melhoria da organização social... Melhoria na educação... Avanço do conhecimento científico... X Inovação tecnológica... Melhoria em Sistema de Gestão... Regulação setorial... Avaliação de condições Socioeconômicas... Contribuição à inserção social... Redução da desigualdade social... Redução de consumo de energias... Apesar dos avanços da química, biologia molecular, pesquisa de genomas, as plantas medicinais permanecem ainda comoomocomo uma importante alternativa de estudos. Seguindo este pensamento, o futuro dos fármacos, oriundos de plantas, requerem a utilização de métodos seguros para o isolamento e caracterização, além de estudos biológicos aprofundados que possam contribuir para uma eficiente descoberta, desenvolvimento e comercialização de fitoterápicos. Neste projeto deu-se ênfase ao gênero
viabilizando seu conhecimento científico e utilização de técnicas que possam ser utilizadas para a realização de controle de qualidade de drogas vegetais. 4. VERIFICAÇÃO TÉCNICA DO PROJETO (campo da FAPESC) 4.1 Mediante as informações apresentadas pelo(a) coordenador(a) do projeto no presente relatório, verifica-se que os objetivos, metas e resultados previstos foram: Plenamente atingidos Parcialmente atingidos Não foram atingidos 4.2 Recomendações e encaminhamentos: Florianópolis, SC, de de Coordenador-de-projetos/FAPESC: