HBs Ag A Finalidade prevista

HBs Ag A24291 Finalidade prevista Resumo e explicação do teste Princípios do teste Informações sobre o produto O teste Access HBs Ag é um imunoensaio quimioluminescente com partículas paramagnéticas para a determinação qualitativa do antigénio de superfície do vírus da hepatite B (HBs Ag) no soro e no plasma humanos utilizando os Sistemas de Imunoensaio Access. O vírus da hepatite B é responsável por algumas lesões hepáticas, tais como a hepatite aguda, que pode ser fulminante, e a hepatite crónica, que pode evoluir em cirrose hepática com um alto risco de carcinoma hepatocelular. A detecção do antigénio de superfície do vírus (HBs Ag) no soro ou no plasma indica uma infecção causada pelo vírus da hepatite B. É o primeiro marcador a aparecer no decorrer da doença e pode estar presente no sangue duas-três semanas antes do aparecimento dos sintomas clínicos e biológicos da doença. A presença do HBs Ag pode durar por um período muito curto (poucos dias) ou muito longo (vários anos). Quando o HBs Ag persiste por mais de seis meses, a hepatite é classificada como crónica. Considerada a existência de inúmeros portadores crónicos assintomáticos, o rastreio do antigénio HBs é necessário a cada dádiva de sangue a fim de prevenir a transmissão da hepatite por transfusão. Para além disso, o rastreio pré-natal de mulheres grávidas tem sido recomendado pelos órgãos sanitários, para que os recém-nascidos de mães portadoras de HBV possam receber o tratamento profilático. 1,2 O teste Access HBs Ag é um ensaio imunoenzimático de fase única (tipo sandwich ). Uma amostra pura é adicionada a um recipiente de reacção contendo uma solução diluente de amostras. Em seguida, são adicionados à mistura partículas paramagnéticas revestidas com anticorpos monoclonais específicos do antigénio HBs e, depois, conjugado de fosfatase alcalina recombinante e um outro anticorpo monoclonal específico do antigénio HBs. Os anticorpos monoclonais específicos do antigénio HBs foram seleccionados pela sua capacidade em reconhecer os diferentes subtipos e mutantes do HBs Ag. 3,4,5,6,7,8,9,10 Durante a incubação, o antigénio HBs presente na amostra é capturado quer pela fase sólida, quer pelo conjugado. Após a incubação num recipiente de reacção, os materiais ligados à fase sólida são retidos num campo magnético, enquanto os materiais não ligados são removidos por lavagem. Em seguida, um substrato quimioluminescente (Lumi-Phos* 530) é adicionado e as unidades relativas de luz (URL) geradas pela reacção enzimática são medidas com um luminómetro. A produção de fotões depende da quantidade de conjugado enzimático presente no final da reacção. A quantidade de luz medida para uma amostra indica a presença ou a ausência de HBs Ag em comparação com o valor de cut-off determinado durante a calibração do ensaio no aparelho. Se a produção de fotões for igual ou maior que o valor de cut-off, a amostra é considerada reactiva ao HBs Ag. Uma amostra reactiva deve ser processada como descrito na secção Resultados. Kit de reagentes Access HBs Ag Nº Cat. A24291: 100 determinações, 2 embalagens, 50 testes/embalagem Fornecido pronto para utilizar. Armazenar em posição vertical e refrigerar a 2 10 C. 2007 Beckman Coulter, Inc. WB A44132B Access HBs Ag Página 1

Manter refrigerado a 2 10 C por no mínimo duas horas antes de usar no equipamento. Estável até ao vencimento do prazo de validade marcado no rótulo quando armazenado a 2 10 C. Não utilizar os reagentes do kit que estiverem expirados. Estável a 2 10 C por 56 dias após utilização inicial. Uma possível degradação pode ser indicada pela ruptura da camada de elastómero da embalagem ou por valores de controlo fora do intervalo de variação. Abrir a embalagem de reagente caso tenha sofrido prejuízos (p.ex. ruptura da camada elastomérica). R1a: R1b: R1c: Partículas paramagnéticas Dynabeads** revestidas com estreptavidina e ligadas a anticorpos monoclonais (de rato) biotinilados específicos do antigénio HBs em tampão TRIS com albumina sérica bovina (BSA), < 0,1% de azida sódica e 0,25% de ProClin*** 300. Tampão TRIS com surfactante, proteínas (murina, bovina), < 0,1% de azida sódica e 0,25% de ProClin 300. Conjugado fosfatase alcalina (recombinante) anticorpo monoclonal (de rato) específico do antigénio HBs em tampão fosfato com surfactante, BSA, < 0,1% de azida sódica e 0,25% de ProClin 300. Avisos e precauções Para utilização em diagnóstico in vitro. As amostras dos doentes e os produtos hemoderivados podem ser analisados rotineiramente com riscos mínimos utilizando o procedimento descrito. Contudo, deve manusear estes produtos como potencialmente infecciosos de acordo com as precauções gerais e os métodos adequados de laboratórios clínicos, independentemente da origem, tratamento ou certificação anterior. Usar um desinfectante apropriado para a descontaminação. Armazenar e eliminar estes materiais e os respectivos contentores segundo o regulamento e as normas locais. A azida sódica pode reagir com as canalizações de chumbo ou cobre formando azidas metálicas altamente explosivas. Portanto, deixar fluir água em abundância nos tubos durante a eliminação de líquidos para prevenir a acumulação de azidas. 11 Xi. Irritante: 0,25% ProClin 300. R 43: Pode causar sensibilização em contacto com a pele. S 28-37: Após contacto com a pele, lavar imediata e abundantemente com água e sabão. Usar luvas adequadas. A Folha dos Dados de Segurança do Material (MSDS) está disponível a pedido. Colheita e preparação da amostra 1. Soro e plasma (heparina, EDTA, ACD e citrato de sódio) são as amostras aconselhadas. 2. Seguir as recomendações abaixo para manipular, analisar e armazenar amostras de sangue: 12 Colher todas as amostras de sangue tomando as precauções habituais para a colheita venosa. Deixar as amostras de soro coagularem completamente antes da centrifugação. Centrifugar as amostras. Manter as provetas sempre fechadas. Armazenar as amostras hermeticamente fechadas à temperatura ambiente (a 20 25 C) durante o máximo de oito horas. Se o ensaio não estiver pronto dentro de oito horas, refrigerar as amostra a 2 8 C. 3. Se o ensaio não for concluído dentro de 4 dias ou no caso de amostras a serem expedidas, congelar a -20 C ou a temperatura mais baixa. 4. Seguir as instruções abaixo para preparar as amostras: Em geral, as amostras de soro necessitam de 1 hora para coagularem completamente. Access HBs Ag WB A44132B 2007 Beckman Coulter, Inc. Página 2

Todas as amostras armazenadas por mais de 8 horas devem ser centrifugadas a 3000 g por 15 minutos antes do teste. Para a centrifugação, seguir as recomendações do fabricante das provetas de colheita do sangue ou os procedimentos validados pelo laboratório. 5. Certificar-se de que os resíduos de fibrina e de substâncias celulares foram removidos antes da análise. Amostras turvas de soro ou plasma contendo partículas devem ser transferidas da proveta original e centrifugadas novamente antes do teste. Uma amostra (proveta original) que contiver um agente de separação (barreira de gel) nunca deve ser centrifugada novamente. 6. Se uma amostra não for analisada dentro de 2 horas após a centrifugação, transferir a amostra isenta de células para uma proveta de armazenamento (é necessário pelo menos um volume de amostra de 550 µl, além dos volumes mortos do contentor da amostra e do sistema, para se obter um volume suficiente para o algoritmo da análise de confirmação, se preciso). Tapar bem a proveta imediatamente. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou sistema de Ajuda para uma descrição específica dos requisitos de volume morto de cada aparelho. 7. As amostras devem ser misturadas completamente após a descongelação. Remover, por centrifugação a 3000 g por 15 minutos, as partículas ou os agregados de fibrina suspensos. Transferir a amostra para um recipiente de amostragem para a execução do teste. 8. Manusear as amostras dos doentes com cuidado para evitar contaminação cruzada. 9. As amostras podem ser descongeladas no máximo 5 vezes. 10.Não foi encontrada nenhuma diferença qualitativa nos resultados depois que 25 amostras não reactivas e 25 amostras reactivas foram aquecidas a 56 C por 30 minutos. Materiais fornecidos R1 Kits de reagentes Access HBs Ag Materiais necessários mas não fornecidos Comentários sobre o procedimento 1. Calibradores: Access HBs Ag Calibrators Negativa e positiva ao HBs Ag Nº Cat. A24292 2. Materiais do Controlo de Qualidade (QC): Access HBs Ag QC ou outro material de controlo disponível no mercado. N Cat. A24294 3. Substrato: Access Substrate Nº Cat. 81906 4. Access, Access 2: Tampão de lavagem: Access Wash Buffer II, Nº Cat. A16792 UniCel DxI: Tampão de lavagem: UniCel DxI Wash Buffer II, Nº Cat. A16793 1. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para uma descrição específica da instalação, inicialização, princípios de funcionamento, características de desempenho do sistema, instruções de funcionamento, procedimentos de calibração, limitações operacionais e precauções, riscos, manutenção e solução de problemas. 2. Misturar o conteúdo das embalagens novas (vedadas) de reagentes invertendo delicadamente a embalagem várias vezes antes de carregá-la no equipamento. Não inverter embalagens abertas (perfuradas). 3. Usar cento e dez (110) µl de amostra para cada determinação além dos volumes mortos do recipiente da amostra e do sistema. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para o volume mínimo de amostra necessário. 4. A unidade de medida padrão do sistema para registar os resultados das amostras é a relação Sinal/Cut-off (S/CO). 2007 Beckman Coulter, Inc. WB A44132B Access HBs Ag Página 3

5. O tempo aproximado para o primeiro resultado é 55 minutos. Procedimento Detalhes de calibração Controlo de qualidade Resultados Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre a gestão das amostras, a configuração dos testes, a solicitação de testes e a visualização dos resultados dos testes. Os resultados dos calibradores HBs Ag são verificados automaticamente pelo sistema Access em relação a limites de URL predefinidos. Se as URL satisfizerem as especificações predefinidas, o sistema calculará o valor de cut-off da calibração. Para todos os testes, é necessário ter uma curva de calibração activa. Para o teste Access HBs Ag, é necessária uma calibração a cada 56 dias ou para cada novo lote do kit de reagentes. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre os métodos de calibração, a configuração de calibradores, a introdução de solicitações de testes dos calibradores e a visualização de dados de calibração. Os materiais de controlo de qualidade simulam as características das amostras dos doentes e são fundamentais para a monitorização do desempenho do sistema de análises imunoquímicas. Dado que as amostras podem ser analisadas a qualquer momento utilizando um formato de acesso aleatório em vez dum formato por lote, é aconselhável utilizar os materiais de controlo de qualidade a cada 24 horas. 13 Utilizar controlos de qualidade Access HBs Ag QC ou outros materiais de controlo de qualidade disponíveis no mercado que cubram pelo menos dois níveis de analito. Seguir as instruções do fabricante para a reconstituição e o armazenamento. Cada laboratório deve estabelecer os seus próprios valores médios e limites aceitáveis para garantir um desempenho adequado dos testes. Os resultados do controlo de qualidade que não estiverem dentro dos limites aceitáveis, podem indicar resultados de testes não válidos. Examinar todos os resultados dos testes obtidos desde o último ponto de teste de controlo de qualidade aceitável para este analito. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para informações sobre como visualizar os resultados do controlo de qualidade. A presença ou a ausência do antigénio HBs é determinada pela comparação do sinal URL de cada amostra do doente com o valor de cut-off da calibração. Relação sinal/cut-off (S/CO) = URL da amostra / URL do valor de cut-off da calibração. Os resultados são indicados como reactivos ou não reactivos de acordo com a relação dos mesmos com o valor de cut-off (sinal maior ou igual ou menor que o valor de cut-off, respectivamente). Contudo, os resultados ~ 10% menores que o valor de cut-off devem ser interpretados com prudência e testados novamente em duplicado. Esta zona cinzenta (de 0,9 a menos de 1,0) deve ser armazenada pelo utilizador (consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para informações completas sobre a zona cinzenta de um ensaio qualitativo). Desta maneira, os resultados situados na zona cinzenta serão automaticamente marcados, permitindo uma rápida identificação dos mesmos. Os resultados dos testes dos doentes podem ser visualizados através do ecrã apropriado. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para as instruções completas sobre como visualizar os resultados das amostras. Todas as amostras que resultarem reactivas no primeiro teste devem ser testadas novamente em duplicado após a transferência do soro ou do plasma para uma proveta (não centrifugar a proveta primária). Centrifugar a proveta contendo a amostra por 15 minutos a 3000 g e, depois, transferir o sobrenadante da amostra para um recipiente de amostragem. Todas as amostras inicialmente reactivas ou com resultados na zona cinzenta devem ser testadas novamente em duplicado utilizando o teste Access HBs Ag. Se de 3 resultados, 2 forem < 1,0 S/CO, a amostra deve ser considerada não reactiva (negativa) para o HBs Ag. Se de 3 resultados, 2 forem 1,0 S/CO, a amostra deve ser considerada repetidamente reactiva. Access HBs Ag WB A44132B 2007 Beckman Coulter, Inc. Página 4

As amostras repetidamente reactivas devem ser confirmadas pelo teste de confirmação Access HBs Ag Confirmatory. As amostras que são confirmadas com o reagente de neutralização (contendo IgG humana específica do antigénio HBs), devem ser consideradas positivas para o HBs Ag. Limitações do procedimento 1. O ensaio Access HBs Ag está estritamente limitado à detecção do antigénio de superfície do vírus da hepatite B no soro ou no plasma humanos (heparina, EDTA, ACD e citrato de sódio). Os resultados obtidos com este ensaio devem ser coerentes com os sintomas e a anamnese do doente. Um resultado reactivo obtido com o teste Access HBs Ag deve se validado pelo teste de confirmação Access HBs Ag Confirmatory antes de se declarar a existência duma infecção. Para além disso, diversos autores descreveram na literatura casos de hepatite viral B (aguda ou crónica) nos quais o ADN viral foi detectado na ausência do antigénio de superfície (doentes negativos ao HBs Ag). Estes perfis anormais, apesar de raros, são a consequência de possíveis mutações genéticas, quer a nível do gene S, quer do pré-s (impedindo o reconhecimento do antigénio por alguns reagentes imunológicos) ou, em geral, a nível dos genes X e pol, que induzem uma replicação viral baixa. Nesses casos específicos, recomenda-se o teste de marcadores adicionais (anticorpo específico do antigénio HBs ou, se possível, ADN viral amplificado) para o diagnóstico final da infecção. 14,15 2. Nos ensaios que utilizam anticorpos, existe a possibilidade de interferência dos anticorpos heterófilos contidos na amostra do doente. Os doentes que estão regularmente em contacto com animais ou que tenham sido submetidos a imunoterapia ou a técnicas de diagnóstico que utilizam imunoglobulinas ou fragmentos de imunoglobulinas podem produzir anticorpos, por ex. HAMA, que interferem com os imunoensaios. Para além disso, outros anticorpos heterófilos, tais como os anticorpos humanos anti-cabra, podem estar presentes nas amostras dos doentes. 16,17 Tais anticorpos interferentes podem produzir resultados errados. Os resultados de doentes suspeitos de ter estes anticorpos devem ser avaliados com cuidado. 3. Os resultados do Access HBs Ag devem ser interpretados baseando-se no quadro clínico geral do doente, incluindo: os sintomas, a anamnese clínica, os dados de outros testes e outras informações apropriadas. 4. O ensaio Access HBs Ag não apresenta algum efeito gancho (hook) até a 5 mg/ml. Características específicas de desempenho Precisão intra-ensaio A precisão intra-ensaio foi determinada testando cinco amostras diferentes 30 vezes no mesmo ensaio durante um dia. Os resultados deste estudo são mostrados abaixo: Tabela 1: Precisão intra-ensaio do teste Access HBs Ag Amostra Média (S/CO) DP %CV 1 (Neg) 0,16 0,01 N/A* 2 0,97 0,02 1,8 3 2,73 0,07 2,4 4 8,31 0,20 2,4 5 27,07 0,41 1,5 2007 Beckman Coulter, Inc. WB A44132B Access HBs Ag Página 5

Precisão inter-ensaio A precisão inter-ensaio foi determinada testando cinco amostras diferentes em duplicado durante 20 dias, 2 execuções por dia. Os resultados deste estudo são mostrados abaixo: Tabela 2: Precisão inter-ensaio do teste Access HBs Ag Amostra Média (S/CO) DP %CV 1 (Neg) 0,17 0,02 N/A* 2 1,01 0,07 7,5 3 2,82 0,16 5,9 4 8,54 0,43 5,4 5 27,36 1,16 4,3 O ensaio Access HBs Ag apresenta uma imprecisão total 10% com as amostras reactivas. * Devido a um baixo valor S/CO, a % do CV não é aplicável. Especificidade A especificidade foi determinada testando amostras, consideradas negativas num ensaio de referência, no ensaio Access HBs Ag. Todas as amostras consideradas repetidamente reactivas no teste Access foram analisadas no teste HBs Ag Confirmatory. Num estudo, foi testado um total de 5020 amostras. Estas amostras eram provenientes de dadores de sangue voluntários de 2 sítios diferentes. A especificidade para a população de dadores de sangue voluntários foi de 99,96%. Os resultados deste estudo são mostrados abaixo. Tabela 3: Especificidade do teste Access HBs Ag para amostras provenientes de dadores de sangue voluntários Categoria de amostras Dadores de sangue voluntários Número de amostras testadas Número de amostras repetidamente reactivas Especificidade (%) 5020 2 (0,04%) 99,96 (95% CI: 99,86 100) Num outro estudo, foram testadas 565 amostras provenientes duma população hospitalizada. Essas amostras provinham de indivíduos que tinham sido submetidos ao teste do HBs Ag como parte do seu tratamento médico rotineiro (ou seja, amostras submetidas ao laboratório do hospital para análises de diagnóstico). Este estudo incluiu amostras provenientes de indivíduos com sinais e sintomas de hepatite, indivíduos em risco de infecção por HBV ou com suspeita de exposição ao HBV. A especificidade na população hospitalizada foi de 99,47%. Os resultados deste estudo são mostrados abaixo. Categoria de amostras Tabela 4: Especificidade do teste Access HBs Ag para amostras provenientes de uma população hospitalar Número de amostras testadas Número de amostras repetidamente reactivas Especificidade (%) População hospitalar 565 3 (0,5%) 99,47 (95% CI: 98,45 99,82) Sensibilidade analítica A sensibilidade analítica do teste Access HBs Ag foi avaliada com um painel interno titulado em relação ao painel da Sociedade Francesa de Transfusão de Sangue (SFTS) de 2005 e resultou ser 0,1 ng/ml. A sensibilidade analítica também foi avaliada com os padrões internacionais da OMS NIBSC 80/549 (primeiro) e 00/588 (segundo) e o painel de subtipos (ad e ay) do PEI. A sensibilidade analítica a partir de estudos individuais com cada um desses padrões está indicada na tabela abaixo. Access HBs Ag WB A44132B 2007 Beckman Coulter, Inc. Página 6

Tabela 5: Sensibilidade Analítica do teste Access HBs Ag Sensibilidade A sensibilidade foi determinada testando amostras, consideradas positivas com um teste de referência, com o teste Access HBs Ag. Todas as amostras consideradas repetidamente reactivas foram analisadas com o respectivo teste de confirmação HBs Ag. Foi testado um total de 410 amostras, provenientes também de indivíduos com hepatite aguda e hepatite crónica. A sensibilidade nesta população foi de 100% (95% CI: 99,27 100). Os resultados do estudo são mostrados abaixo. Categoria de amostras Padrão Sensibilidade analítica OMS NIBSC 80/549 0,092 IU/mL (95% CI: 0,083 0,103) OMS NIBSC 00/588 0,056 IU/mL (95% CI: 0,054 0,059) PEI ad 0,020 PEI Units/mL (95% CI: 0,011 0,030) PEI ay 0,024 PEI Units/mL (95% CI: 0,013 0,038) Tabela 6: Sensibilidade do teste Access HBs Ag Número de amostras testadas Número de Amostras Reactivas Sensibilidade (%) Positiva ao HBs Ag 410 410 100% (95% CI: 99,27 100) Trinta painéis de seroconversão para o HBV bem documentados disponíveis no comércio foram analisados com o teste Access HBs Ag e com um teste de referência. O teste Access HBs Ag demonstrou uma sensibilidade mais elevada com 10 painéis, uma sensibilidade equivalente com 18 painéis e uma sensibilidade mais baixa com 2 painéis. Para avaliar a capacidade de reconhecimento dos subtipos e dos genotipos, foram testados um painel do subtipo SFTS e um painel do genotipo Teragenix. O teste Access HBs Ag detectou todos os subtipos (adw2, adw4, adr, ayw1, ayw2, ayw3, ayw4 e ayr) e todos os genotipos (A-1, B-6, C-2, D-27, E-23, F-18 e G-50). Para além disso, um painel de 15 proteínas recombinantes representando importantes mutações nas sequências de aminoácidos do antigénio HBs Ag foi testado. Todas as amostras recombinantes do painel foram detectadas com o teste Access HBs Ag. Reactividade cruzada Foi realizado um estudo de 293 amostras provenientes de indivíduos em condições clínicas com potencial reactividade cruzada, incluindo HCV, HSV IgG e IgM, rubéola IgG e IgM, toxoplasmose IgG e IgM, HTLV 1-2, parotidite IgG, CMV IgG, EBV IgG e IgM, sarampo IgG e IgM, factor reumatóide (FR), ANA, HAV IgG e IgM, HIV, doentes com insuficiência renal, doentes submetidos a hemodiálise, mieloma, gripe, HAMA e cirrose alcoólica. Nenhuma das amostras analisadas apresentou reactividade cruzada, com excepção do FR (1 de 17) e ANA (1 de 36) os quais resultaram repetidamente reactivos, mas não foram confirmados com o teste de confirmação Access HBs Ag Confirmatory. Amostras interferentes contendo até a 300 mg/l de bilirrubina (100 mg/l livre e 200 mg/l conjugada), amostras lipémicas contendo 30 g/l de trioleína (triglicéridos), 90 g/l de albumina e amostras hemolisadas contendo até a 5 g/l de hemoglobina não afectam o resultado do teste. 2007 Beckman Coulter, Inc. WB A44132B Access HBs Ag Página 7

. HBs Ag CALIBRATORS A24292 Finalidade prevista Resumo e explicação do produto Informações sobre o produto Os calibradores Access HBs Ag Calibrators são utilizados para calibrar os ensaios Access HBs Ag e HBs Ag Confirmatory para a determinação qualitativa e a confirmação, respectivamente, da presença do antigénio de superfície do vírus da hepatite B (HBs Ag) no soro ou no plasma humanos utilizando os Sistemas de Imunoensaio Access. Os calibradores Access HBs Ag Calibrators são utilizados para estabelecer a calibração (determinar o valor de cut-off) dos ensaios Access HBs Ag e HBs Ag Confirmatory. Através da comparação da intensidade de luz gerada por uma amostra com o valor de cut-off, é determinada a presença ou a ausência do antigénio de superfície do vírus da hepatite B. Calibradores Access HBs Ag Calibrators Nº Cat. A24292: C0 a C1, 2,7 ml/recipiente Fornecidos prontos para utilizar. Armazenar em posição vertical e refrigerar a 2 10 C. Misturar o conteúdo invertendo delicadamente antes da utilização. Evitar a formação de bolhas. Estável até ao vencimento do prazo de validade marcado no rótulo quando armazenado a 2 10 C. Não utilizar os reagentes do kit que estiverem expirados. O recipiente permanece estável a 2 10 C por 90 dias depois da abertura. Uma possível degradação pode ser indicada por valores de controlo fora do intervalo de variação. Consultar o cartão de calibração ou para as concentrações exactas. C0: Calibrador negativo: matriz BSA tamponada, < 0,1% de NaN 3, 0,25% de ProClin*** 300. C1: Calibrador positivo: matriz BSA tamponada, antigénio HBs, < 0,1% de NaN 3, 0,25% de ProClin 300. Cartões de calibração: 2 Nota: O cartão 1 deve ser usado com o código de produto A24291. O cartão 2 deve ser usado com o código de produto A24295. Avisos e precauções Para utilização em diagnóstico in vitro. As amostras dos doentes e os produtos hemoderivados podem ser analisados rotineiramente com riscos mínimos utilizando o procedimento descrito. Contudo, deve manusear estes produtos como potencialmente infecciosos de acordo com as precauções gerais e os métodos adequados de laboratórios clínicos, independentemente da origem, tratamento ou certificação anterior. Usar um desinfectante apropriado para a descontaminação. Armazenar e eliminar estes materiais e os respectivos contentores segundo o regulamento e as normas locais. O antigénio usado para a preparação do reagente é um derivado do soro humano/do Access HBs Ag WB A44132B 2007 Beckman Coulter, Inc. Página 8

plasma humano. Manusear estes produtos como potencialmente infecciosos de acordo com as precauções gerais e os métodos adequados de laboratórios clínicos, independentemente da origem, tratamento ou certificação anterior. Usar um desinfectante apropriado para a descontaminação. Armazenar e eliminar estes materiais e os respectivos contentores segundo o regulamento e as normas locais. 18 A azida sódica pode reagir com as canalizações de chumbo ou cobre formando azidas metálicas altamente explosivas. Portanto, deixar fluir água em abundância nos tubos durante a eliminação de líquidos para prevenir a acumulação de azidas. 11 Xi. Irritante: 0,25% ProClin 300. R 43: Pode causar sensibilização em contacto com a pele. S 28-37: Após contacto com a pele, lavar imediata e abundantemente com água e sabão. Usar luvas adequadas. A Folha dos Dados de Segurança do Material (MSDS) está disponível a pedido. Procedimento Detalhes da calibração Limitações do procedimento Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre os métodos de calibração, a configuração de calibradores, a introdução de solicitações de testes dos calibradores e a visualização de dados de calibração. Os calibradores Access HBs Ag Calibrators são fornecidos como: negativos e positivos. Tanto o teste Access HBs Ag, como o teste Access HBs Ag Confirmatory necessitam de uma calibração (determinação do valor de cut-off) para obterem uma calibração activa. Cada calibração necessita de 220 µl de cada um dos dois calibradores (cada um em duplicado), além dos volumes mortos do recipiente da amostra e do sistema. Uma gota equivale a aproximadamente 40 µl. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou sistema de Ajuda para o volume mínimo de amostra necessário. Se forem notados sinais de contaminação microbiana ou excesso de turvação num reagente, rejeitar o recipiente. 2007 Beckman Coulter, Inc. WB A44132B Access HBs Ag Página 9

. HBs Ag QC A24294 Finalidade prevista Resumo e explicação do produto Informações sobre o produto Os controlos de qualidade Access HBs Ag QC são utilizados para monitorizar o desempenho do sistema dos ensaios Access HBs Ag e Access HBs Ag Confirmatory. Os materiais dos controlos de qualidade simulam as características das amostras dos doentes e são fundamentais para a monitorização do desempenho do sistema dos imunoensaios Access HBs Ag e Access HBs Ag Confirmatory. Além disso, constituem parte integrante das boas práticas de laboratório. 13,19,20,21,22,23 Ao realizar ensaios com os reagentes Access para HBs Ag e Access HBs Ag Confirmatory, utilizar materiais dos controlos de qualidade para validar a integridade dos ensaios. Se o sistema de análise funciona correctamente, os valores testados devem estar dentro dos intervalos de variação aceitáveis Access HBs Ag QC Nº Cat. A24294: QC1 e QC2: 4,0 ml/recipiente, 3 recipientes por nível Fornecidos prontos para utilizar. Armazenar em posição vertical e refrigerar a 2 10 C ou armazenar congelado a -20 C ou a temperatura mais baixa. Estável até ao vencimento do prazo de validade marcado na etiqueta quando armazenado lacrado a 2 10 C ou a -20 C. Não utilizar os reagentes do kit que estiverem expirados. O recipiente permanece estável a 2 10 C por 56 dias depois da abertura. Misturar o conteúdo invertendo delicadamente antes da utilização. Evitar a formação de bolhas. Uma possível degradação pode ser indicada por valores de controlo fora do intervalo de variação. QC 1: Plasma humano desfibrinado, HBs Ag negativo, < 0,1% de NaN 3, 0,25% de ProClin*** 300. QC 2: Plasma humano desfibrinado, HBs Ag positivo, < 0,1% de NaN 3, 0,25% de ProClin 300. Cartão de valores QC: 1 Avisos e precauções Para utilização em diagnóstico in vitro. As amostras dos doentes e os produtos hemoderivados podem ser analisados rotineiramente com riscos mínimos utilizando o procedimento descrito. Contudo, deve manusear estes produtos como potencialmente infecciosos de acordo com as precauções gerais e os métodos adequados de laboratórios clínicos, independentemente da origem, tratamento ou certificação anterior. Usar um desinfectante apropriado para a descontaminação. Armazenar e eliminar estes materiais e os respectivos contentores segundo o regulamento e as normas locais. O antigénio usado para a preparação do reagente é um derivado do soro humano/do plasma humano. Manusear estes produtos como potencialmente infecciosos de acordo com as precauções gerais e os métodos adequados de laboratórios clínicos, independentemente da origem, tratamento ou certificação anterior. Usar um desinfectante apropriado para a descontaminação. Armazenar e eliminar estes materiais e os respectivos contentores Access HBs Ag WB A44132B 2007 Beckman Coulter, Inc. Página 10

segundo o regulamento e as normas locais. 18 A azida sódica pode reagir com as canalizações de chumbo ou cobre formando azidas metálicas altamente explosivas. Portanto, deixar fluir água em abundância nos tubos durante a eliminação de líquidos para prevenir a acumulação de azidas. 11 Xi. Irritante: 0,25% ProClin 300. R 43: Pode causar sensibilização em contacto com a pele. S 28-37: Após contacto com a pele, lavar imediata e abundantemente com água e sabão. Usar luvas adequadas. A Folha dos Dados de Segurança do Material (MSDS) está disponível a pedido. Procedimento Os controlos de qualidade Access HBs Ag QC devem ser tratados e analisados com os mesmos procedimentos utilizados para as amostras dos doentes, de acordo com as instruções que acompanham o aparelho e/ou o método em uso. Nota: Para os Sistemas de Imunoensaio Access, consultar os respectivos manuais de sistema e/ou sistema de Ajuda para informações sobre os princípios dos controlos de qualidade, a configuração dos controlos de qualidade, a introdução de solicitações de testes de amostras de controlo de qualidade e a visualização de dados dos controlos de qualidade. Para analisar o controlo de qualidade Access HBs Ag QC no teste Access HBs Ag, são necessários 110 µl para cada um dos dois níveis, além do volume morto do recipiente da amostra e do sistema (determinação simples). Uma gota equivale a aproximadamente 40 µl. Para analisar os controlos de qualidade Access HBs Ag QC no teste Access HBs Ag Confirmatory, são necessários 110 µl para o teste de Controlo e 110 µl para o teste de Neutralização para cada um dos dois níveis, além do volume morto do recipiente da amostra e do sistema (determinação simples). Uma gota equivale a aproximadamente 40 µl. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou sistema de Ajuda para o volume mínimo de amostra necessário. Limitações do procedimento Se forem notados sinais de contaminação microbiana ou excesso de turvação num reagente, rejeitar o recipiente. Valores esperados Para o teste Access HBs Ag, a relação A/CO média esperada (0) e o DP (σ) para os níveis Access HBs Ag QC (QC 1 e QC2) são indicados no cartão de valores QC. As relações A/CO individuais devem estar dentro dos respectivos intervalos de variação aceitáveis. Contudo, cada laboratório deve estabelecer a sua própria média A/CO e os intervalos de variação aceitáveis, depois de ter colhido dados suficientes. 13,23 Para o teste Access HBs Ag, os dados dos controlos de qualidade devem ser: QC1: Não reactivo QC2: Reactivo Para o teste Access HBs Ag Confirmatory, os dados dos controlos de qualidade devem ser: Controlo Neutralização QC1 Não reactivo Não confirmado QC2 Reactivo Confirmado 2007 Beckman Coulter, Inc. WB A44132B Access HBs Ag Página 11

HBs Ag CONFIRMATORY A24295 Finalidade prevista Princípios do teste Informações sobre o produto O teste Access HBs Ag Confirmatory é um imunoensaio quimioluminescente com partículas paramagnéticas para a confirmação da presença do antigénio de superfície do vírus da hepatite B (HBs Ag) no soro e no plasma humanos que resultaram repetidamente reactivos no teste Access HBs Ag. O teste Access HBs Ag Confirmatory deve ser utilizado com os Sistemas de Imunoensaio Access. O teste Access HBs Ag Confirmatory emprega o princípio da neutralização através de um excesso de anticorpos específicos do antigénio HBs (reagente de neutralização) para confirmar a presença do antigénio HBs no soro ou no plasma considerado repetidamente reactivo no ensaio Access HBs Ag. O teste de confirmação regista uma % de inibição (supressão) de um teste de controlo (HBs Ct) com um reagente de neutralização (HBs Bk). Uma amostra pura é adicionada a dois recipiente de reacção separados, um contendo o reagente de neutralização (IgG humanas específicas do antigénio HBs) e o outro contendo a solução diluente de amostras. Em seguida, são adicionados à mistura partículas paramagnéticas revestidas com anticorpos monoclonais específicos do antigénio HBs e, depois, conjugado de fosfatase alcalina recombinante e um outro anticorpo monoclonal específico do antigénio HBs. Os anticorpos monoclonais específicos do antigénio HBs foram seleccionados pela sua capacidade em reconhecer os diferentes subtipos e mutantes do HBs Ag. 3,4,5,6,7,8,9,10 Se o antigénio HBs estiver presente na amostra, os anticorpos específicos do antigénio HBs do reagente de neutralização ligam-se aos determinantes antigénicos que não mais se poderão ligar aos anticorpos da fase sólida e do conjugado. Após a incubação num recipiente de reacção, os materiais ligados à fase sólida são retidos num campo magnético, enquanto os materiais não ligados são removidos por lavagem. Em seguida, um substrato quimioluminescente (Lumi-Phos* 530) é adicionado e a luz gerada pela reacção enzimática é medida com um luminómetro. A produção de fotões depende da quantidade de conjugado enzimático presente no final da reacção. Qualquer redução da luz gerada é registada pelo aparelho por comparação com a mesma amostra em que o reagente de neutralização é substituído pela solução diluente de amostras. Ambos os testes de neutralização e de controlo do diluente das amostras são realizados automaticamente pelos Sistemas de Imunoensaio Access. Kit de reagentes Access HBs Ag Confirmatory Nº Cat. A24295: 100 determinações (suficiente para 50 amostras de doentes), 2 embalagens, 50 testes/embalagem Fornecido pronto para utilizar. Armazenar em posição vertical e refrigerar a 2 10 C. Manter refrigerado a 2 10 C por no mínimo duas horas antes de usar no equipamento. Estável até ao vencimento do prazo de validade marcado no rótulo quando armazenado a 2 10 C. Não utilizar os reagentes do kit que estiverem expirados. Estável a 2 10 C por 56 dias após utilização inicial. Uma possível degradação pode ser indicada pela ruptura da camada de elastómero da embalagem ou por valores de controlo fora do intervalo de variação. Abrir a embalagem de reagente caso tenha sofrido prejuízos (p.ex. ruptura da camada elastomérica). Access HBs Ag WB A44132B 2007 Beckman Coulter, Inc. Página 12

R1a: R1b: R1c: R1d: Partículas paramagnéticas Dynabeads** revestidas com estreptavidina e ligadas a anticorpos monoclonais (de rato) biotinilados específicos do antigénio HBs em tampão TRIS com albumina sérica bovina (BSA), < 0,1% de azida sódica e 0,25% de ProClin*** 300. Gamaglobulinas humanas específicas para HBs Ag em tampão TRIS com surfactante, proteínas (murina, bovina), < 0,1% de azida sódica, 0,25% de ProClin 300. Tampão TRIS com surfactante, proteínas (murina, bovina), < 0,1% de azida sódica e 0,25% de ProClin 300. Conjugado fosfatase alcalina (recombinante) anticorpo monoclonal (de rato) específico do antigénio HBs em tampão fosfato com surfactante, BSA, < 0,1% de azida sódica e 0,25% de ProClin 300. Avisos e precauções Para utilização em diagnóstico in vitro. As amostras dos doentes e os produtos hemoderivados podem ser analisados rotineiramente com riscos mínimos utilizando o procedimento descrito. Contudo, deve manusear estes produtos como potencialmente infecciosos de acordo com as precauções gerais e os métodos adequados de laboratórios clínicos, independentemente da origem, tratamento ou certificação anterior. Usar um desinfectante apropriado para a descontaminação. Armazenar e eliminar estes materiais e os respectivos contentores segundo o regulamento e as normas locais. A azida sódica pode reagir com as canalizações de chumbo ou cobre formando azidas metálicas altamente explosivas. Portanto, deixar fluir água em abundância nos tubos durante a eliminação de líquidos para prevenir a acumulação de azidas. 11 Xi. Irritante: 0,25% ProClin 300. R 43: Pode causar sensibilização em contacto com a pele. S 28-37: Após contacto com a pele, lavar imediata e abundantemente com água e sabão. Usar luvas adequadas. A Folha dos Dados de Segurança do Material (MSDS) está disponível a pedido. Colheita e preparação da amostra 1. Soro e plasma (heparina, EDTA, ACD e citrato de sódio) são as amostras aconselhadas. 2. Seguir as recomendações abaixo para manipular, analisar e armazenar amostras de sangue: 12 Colher todas as amostras de sangue tomando as precauções habituais para a colheita venosa. Deixar as amostras de soro coagularem completamente antes da centrifugação. Centrifugar as amostras. Manter as provetas sempre fechadas. Armazenar as amostras hermeticamente fechadas à temperatura ambiente (a 20 25 C) durante o máximo de oito horas. Se o ensaio não estiver pronto dentro de oito horas, refrigerar as amostra a 2 8 C. 3. Se o ensaio não for concluído dentro de 4 dias ou no caso de amostras a serem expedidas, congelar a -20 C ou a temperatura mais baixa. 4. Seguir as instruções abaixo para preparar as amostras: Em geral, as amostras de soro necessitam de 1 hora para coagularem completamente. Todas as amostras armazenadas por mais de 8 horas devem ser centrifugadas a 3000 g por 15 minutos antes do teste. Para a centrifugação, seguir as recomendações do fabricante das provetas de colheita do sangue ou os procedimentos validados pelo laboratório. 5. Certificar-se de que os resíduos de fibrina e de substâncias celulares foram removidos antes da análise. Amostras turvas de soro ou plasma contendo partículas devem ser transferidas 2007 Beckman Coulter, Inc. WB A44132B Access HBs Ag Página 13

da proveta original e centrifugadas novamente antes do teste. Uma amostra (proveta original) que contiver um agente de separação (barreira de gel) nunca deve ser centrifugada novamente. 6. Se uma amostra não for analisada dentro de 2 horas após a centrifugação, transferir a amostra isenta de células para uma proveta de armazenamento (é necessário pelo menos um volume de amostra de 550 µl, além dos volumes mortos do contentor da amostra e do sistema, para se obter um volume suficiente para o algoritmo da análise de confirmação, se preciso). Tapar bem a proveta imediatamente. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou sistema de Ajuda para uma descrição específica dos requisitos de volume morto de cada aparelho. 7. As amostras devem ser misturadas completamente após a descongelação. Remover, por centrifugação a 3000 g por 15 minutos, as partículas ou os agregados de fibrina suspensos. Transferir a amostra para um recipiente de amostragem para a execução do teste. 8. Manusear as amostras dos doentes com cuidado para evitar contaminação cruzada. 9. As amostras podem ser descongeladas no máximo 5 vezes. 10.Não foi encontrada nenhuma diferença qualitativa nos resultados depois que 25 amostras não reactivas e 25 amostras reactivas foram aquecidas a 56 C por 30 minutos. Materiais fornecidos R1 Kits de reagentes Access HBs Ag Confirmatory Materiais necessários mas não fornecidos Comentários sobre o procedimento 1. Calibradores: Access HBs Ag Calibrators Negativa e positiva ao HBs Ag Nº Cat. A24292 2. Access HBs Ag QC ou outro material de controlo disponível no mercado. Nº Cat. A24294 3. Substrato: Access Substrate Nº Cat. 81906 4. Access, Access 2: Tampão de lavagem: Access Wash Buffer II, Nº Cat. A16792 UniCel DxI: Tampão de lavagem: UniCel DxI Wash Buffer II, Nº Cat. A16793 1. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para uma descrição específica da instalação, inicialização, princípios de funcionamento, características de desempenho do sistema, instruções de funcionamento, procedimentos de calibração, limitações operacionais e precauções, riscos, manutenção e solução de problemas. 2. Misturar o conteúdo das embalagens novas (vedadas) de reagentes invertendo delicadamente a embalagem várias vezes antes de carregá-la no equipamento. Não inverter embalagens abertas (perfuradas). 3. Atenção: Para garantir um cálculo correcto dos resultados, atribua sempre um ID da Amostra único às amostras dos doentes que foram diluídas manualmente antes da análise. 4. O teste utiliza o princípio de neutralização do Ag. As amostras reconhecidas como reprodutivelmente reactivas com o teste HBs Ag são incubadas com e sem o reagente de neutralização (IgG humanas específicas do antigénio HBs). As amostras contendo HBs Ag neutralizado apresentam valores de URL inferiores aos das amostras não neutralizadas. A % de inibição é usada para determinar se as amostras positivas são confirmadas. 5. Calibrar o teste de controlo de confirmação utilizando os calibradores HBs Ag e o cartão de calibração de confirmação. Nota: O kit de calibradores contém dois cartões de calibração; um para o teste HBs Ag e um para o teste de confirmação HBs Ag. 6. Os controlos de qualidade Access HBs Ag QC podem ser usados tanto para o teste HBs Ag, como para o teste de HBs Ag Confirmatory. Access HBs Ag WB A44132B 2007 Beckman Coulter, Inc. Página 14

7. Uma vez estabelecida uma curva activa para o teste HBsCt, programar o aparelho quer para o teste HBsBk, quer para o teste HBsCt. O teste HBsBk é medido através da percentagem de inibição e o teste HBsCt é medido através da relação S/CO. 8. Tanto o teste HBsBk como o teste HBsCt necessitam de 110 µl de amostra, além dos volumes mortos do recipiente da amostra e do sistema. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou sistema de Ajuda para o volume de amostra mínimo necessário. 9. O tempo aproximado para o primeiro resultado é 55 minutos. 10.A relação S/CO é determinada pela calibração activa e a percentagem de inibição é calculada pela seguinte fórmula: [1 - (HBsBk RLU / HBsCt RLU)] x 100. Relação S/CO % de inibição Interpretação < 1,0 Não aplicável 1,0 40 Confirmada Reactiva 1,0 < 40 A diluir ou Não confirmada 11.Se a relação for maior ou igual a 1,0 e a % de inibição estiver abaixo de 40%, diluir a amostra com o tampão de lavagem e analisá-la novamente com os testes HBsBk e HBsCt. Não inserir o factor de diluição no Campo do Factor de Diluição, dado que este é um ensaio qualitativo. 12.As amostras repetidamente reactivas com uma relação S/CO maior ou igual a 150 no teste Access HBs Ag podem ser directamente diluídas e testadas com o teste Access HBs Ag Confirmatory. Contudo, se o resultado do teste indicar que uma amostra pode ter sido diluída excessivamente (ou seja, relação sinal/cut-off < 1,0 para o Controlo do Diluente das Amostras), é necessário preparar e testar uma amostra mais concentrada. Procedimento Detalhes de calibração Controlo de qualidade Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre a gestão das amostras, a configuração dos testes, a solicitação de testes e a visualização dos resultados dos testes. Os resultados dos calibradores HBs Ag são verificados automaticamente pelo sistema Access tendo como referência limites predefinidos de URL. Se as URL satisfizerem as especificações predefinidas, o sistema calcula o valor de cut-off de calibração. Um valor de cut-off de calibração activo é necessário para todos os testes. Para o teste de confirmação Access HBs Ag Confirmatory, é necessário efectuar a calibração a cada 56 dias ou para cada novo lote do kit de reagentes. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre os métodos de calibração, a configuração de calibradores, a introdução de solicitações de testes dos calibradores e a visualização de dados de calibração. Os materiais de controlo de qualidade simulam as características das amostras dos doentes e são fundamentais para a monitorização do desempenho do sistema de análises imunoquímicas. Dado que as amostras podem ser analisadas a qualquer momento utilizando um formato de acesso aleatório em vez dum formato por lote, é aconselhável utilizar os materiais de controlo de qualidade a cada 24 horas. 13 Utilizar materiais de controlo de qualidade disponíveis no mercado que cubram pelo menos dois níveis de analito. Seguir as instruções do fabricante para a reconstituição e o armazenamento. Cada laboratório deve estabelecer os seus próprios valores médios e limites aceitáveis para garantir um desempenho adequado dos testes. Os resultados do controlo de qualidade que não estiverem dentro dos limites aceitáveis, podem indicar resultados de testes não válidos. Examinar todos os resultados dos testes obtidos desde o último ponto de teste de controlo de qualidade aceitável para este analito. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para informações sobre como visualizar os resultados do controlo de qualidade. 2007 Beckman Coulter, Inc. WB A44132B Access HBs Ag Página 15

Resultados Os resultados dos testes das amostras dos doentes são determinados automaticamente pelo software do sistema. Uma amostra é confirmada positiva se os cálculos realizados pelo sistema Access mostrarem uma relação sinal /cut-off maior ou igual a 1,0 e uma % de inibição maior ou igual a 40%. O valor de cut-off é determinado pela calibração activa e a percentagem de inibição pela seguinte fórmula: [1,0 - (Valor do Teste do Reagente de Neutralização /Valor do Teste do Controlo do Diluente das Amostras)] x 100. As amostras com uma relação S/CO 1,0 e uma % de inibição < 40% podem necessitar de uma diluição de até 1/10 000 como indicado abaixo. Amostra pura Sinal/cut-off do Controlo Diluente de amostras % de inibição ou supressão (% de Sup) Interpretação < 1,0 Não aplicável Não reactiva para HBs Ag 1,0 40 Confirmada positiva 1,0 < 40 A ser diluída 1/100 Amostra diluída (ex. 1/100) Sinal/cut-off do Controlo Diluente de amostras % de inibição ou supressão (% de Sup) Interpretação < 1,0 Não aplicável Não Confirmada reactiva 1,0 40 Confirmada positiva 1,0 < 40 A ser diluída 1/1000 Observações Por vezes, uma diluição 1/10 000 é necessária para confirmar se a amostra é realmente positiva. Todas as diluições das amostras são feitas com o tampão de lavagem Access Wash Buffer. Atenção: Para garantir um cálculo correcto dos resultados, atribua sempre um ID da Amostra único às amostras dos doentes que foram diluídas manualmente antes da análise. Limitações do procedimento O teste de confirmação Access HBs Ag Confirmatory está estritamente limitado à confirmação da presença do antigénio de superfície do vírus da hepatite B no soro ou no plasma humanos. Os resultados devem ser interpretados baseando-se no quadro clínico geral do doente, incluindo: sintomas, a anamnese clínica, os dados de outros testes e outras informações apropriadas. Valores esperados Precisão intra-ensaio A precisão intra-ensaio foi determinada testando cinco amostras diferentes 30 vezes no mesmo ensaio durante um dia. Os resultados deste estudo são mostrados abaixo: Tabela 1: Precisão intra-ensaio do teste Access HBs Ag Confirmatory Amostra Média (S/CO) % de inibição %CV (de inibição) 1 1,0 74,6 0,4 2 2,9 86,0 0,3 3 8,4 82,3 0,5 4 27,1 86,7 0,4 Access HBs Ag WB A44132B 2007 Beckman Coulter, Inc. Página 16

Precisão inter-ensaio A precisão inter-ensaio foi determinada testando cinco amostras diferentes em duplicado durante 20 dias, 2 execuções por dia. Os resultados deste estudo são mostrados abaixo: Tabela 2: Precisão inter-ensaio do teste Access HBs Ag Confirmatory Amostra Média (S/CO) % de inibição %CV (de inibição) 1 1,0 74,0 1,7 2 2,8 85,8 0,5 3 8,5 82,7 0,6 4 27,4 86,7 0,4 O ensaio Access HBs Ag Confirmatory apresenta uma imprecisão total 10% com as amostras reactivas. Especificidade A especificidade foi determinada testando amostras repetidamente reactivas, mas tidas como negativas ao HBs Ag num teste de referência. Nenhuma dessas amostras foi confirmada pelo teste de confirmação Access HBs Ag Confirmatory. Sensibilidade analítica As amostras provenientes do painel SFTS 2005, dos padrões internacionais da OMS NIBSC 80/549 (primeiro) e 00/588 (segundo), assim como do painel do subtipo PEI (ad e ay) foram confirmadas como positivas no teste Access HBs Ag Confirmatory a todas as concentrações. A concentração mais baixa testada com cada padrão está indicada na tabela abaixo. Tabela 3: Sensibilidade Analítica do teste Access HBs Ag Confirmatory Padrão SFTS 2005 OMS NIBSC 80/549 OMS NIBSC 00/588 PEI ad PEI ay Concentração mínima testada 0,11 ng/ml 0,125 IU/mL 0,062 IU/mL 0,031 PEI Units/mL 0,031 PEI Units/mL Sensibilidade A sensibilidade foi determinada testando amostras com o teste Access Hbs Ag e com um outro teste HBs Ag disponível no comércio. Todas as amostras consideradas repetidamente reactivas foram analisadas com o respectivo teste HBs Ag Confirmatory. Foi testado um total de 413 amostras, provenientes também de indivíduos com hepatite aguda e hepatite crónica. De 413 amostras repetidamente reactivas, 413 foram confirmadas com o teste Access HBs Ag Confirmatory. Vinte painéis de seroconversão para o HBV bem documentados disponíveis no comércio foram analisados. Todas as amostras reactivas foram confirmadas com o teste Access HBs Ag Confirmatory. Para avaliar a capacidade de reconhecimento dos subtipos e dos genotipos, foram testados um painel do subtipo SFTS e um painel do genotipo Teragenix. Todos os subtipos (adw2, adw4, adr, ayw1, ayw2, ayw3, ayw4 e ayr) e todos os genotipos (A-1, B-6, C-2, D-27, E-23, F-18 e G-50) foram confirmados com o teste Access HBs Ag Confirmatory. Para além disso, um painel de 15 proteínas recombinantes representando importantes mutações nas sequências de aminoácidos do antigénio HBs foi testado. Todas as amostras recombinantes do painel foram confirmadas com o teste Access HBs Ag Confirmatory. 2007 Beckman Coulter, Inc. WB A44132B Access HBs Ag Página 17