INTACT PTH A Modo Rotineiro (~30 minutos) Modo Intra-operatório (~15 minutos) Finalidade prevista

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1 INTACT PTH Modo Rotineiro (~30 minutos) Modo Intra-operatório (~15 minutos) A16972 Finalidade prevista Resumo e explicação do teste O teste Access Intact PTH é um imunoensaio quimioluminescente com partículas paramagnéticas para a determinação quantitativa dos níveis de hormona paratiroideia intacta (paratirina, PTH) no soro e no plasma humanos utilizando os Sistemas de Imunoensaio Access. É indicado como coadjuvante no diagnóstico diferencial de hiperparatiroidismo, hipoparatiroidismo ou hipercalcemia de tumor maligno e pode ser usado em diagnósticos intraoperativos. Os resultados do teste devem ser utilizados em conjunto com outros dados clínicos a fim de auxiliarem o clínico a tomar as decisões adequadas ao tratamento de cada doente individual. A hormona paratiroideia (PTH) é sintetizada pelas células principais das glândulas paratiroideias e armazenada em grânulos secretores densos de tipo neuroendócrino, à espera de secreção. A PTH intacta é um polipéptido composto de 84 aminoácidos com uma massa molecular de aproximadamente 9,43 quilodaltons. Após a secreção, a PTH passa por uma rápida proteólise gerando vários fragmentos C-terminais na circulação. Alguns desses fragmentos voltam para a corrente sanguínea e são excretados principalmente por filtração glomerular, um importante meio para a depuração da PTH. O péptido intacto e biologicamente activo tem uma meia-vida na circulação de menos de 5 minutos. 1 A PTH desempenha um papel crucial na manutenção da homeostase do cálcio e a sua medição representa uma importante ajuda no diagnóstico de distúrbios relacionados com o cálcio. Em indivíduos saudáveis, a secreção da PTH reage, em poucos segundos, a pequenas alterações na concentração de cálcio ionizado no plasma. Concentrações de cálcio ionizado extremamente baixas provocam a secreção da PTH, enquanto níveis elevados de cálcio extracelular reduzem a secreção da PTH através de um mecanismo de feedback negativo. A PTH regula os níveis de cálcio através do efeito combinado sobre três órgãos principais: sistema ósseo, mucosa intestinal e rins. O efeito da PTH sobre o cálcio intestinal é indirecto, resultante da produção renal do metabólito da vitamina D activo no intestino, 1,25 diidroxivitamina D. Nos rins, a PTH estimula a reabsorção do cálcio e a inibição da reabsorção de fosfato pelos túbulos renais. Por fim, a PTH promove a reabsorção óssea osteoclástica e a libertação de cálcio e fostato dos ossos. 2 Em doentes com distúrbios do metabolismo do cálcio, a determinação quantitativa da PTH na circulação pode auxiliar no diagnóstico diferencial de hipercalcemia e hipocalcemia. Nos casos de hipercalcemia causada por hiperparatiroidismo primário ou secreção ectópica de PTH (pseudo-hiperparatiroidismo), a maioria dos doentes apresentam níveis aumentados de PTH. Ao contrário, nos casos de hipercalcemia provocada por tumor maligno ou outras causas, a concentração de PTH na circulação é tipicamente baixa, abaixo ou próxima do limite inferior do intervalo de referência para indivíduos aparentemente saudáveis. 3 O hiperparatiroidismo secundário é um hiperfuncionamento compensatório das glândulas paratiróides causado por hipocalcemia ou pela resistência periférica à PTH. Em geral, é causado por insuficiência renal e provoca níveis elevados de PTH. A superprodução crónica de PTH nos casos de insuficiência renal contribui para o desenvolvimento de uma série de osteopatias, também chamadas de osteodistrofia renal. 2 A National Kidney Foundation (NKF) publicou directrizes de prática clínica que recorrem ao metabolismo ósseo para o tratamento de Página 1

2 doenças renais crónicas. A fundação recomenda a medição periódica dos níveis séricos de cálcio, fósforo e PTH em todos os doentes com doença renal crónica. 4 Dado que esta é uma doença complexa e multifactorial, os resultados do ensaio da PTH devem ser interpretados à luz de todas as informações disponíveis sobre o doente. O hipoparatiroidismo é uma doença congénita ou adquirida pouco comum na qual a secreção de PTH é insuficiente ou inexistente. Na maioria dos casos, o hipoparatiroidismo decorre da paratiroidectomia ou da tiroidectomia. O pseudo-hipoparatiroidismo é um distúrbio raro e representa um estado hereditário que provoca a resistência dos órgãos terminais à PTH. 2 Também foram relatadas medições rápidas de PTH intraoperativas em doentes submetidos a paratiroidectomia. 5,6 Baseando-se num exame da literatura neste campo, a National Academy of Clinical Biochemistry publicará, em breve, directrizes da prática de medicina de laboratório para o uso de medições intraoperativas de PTH. 7 Estas directrizes recomendam o uso de testes intra-operatórios da PTH para os doentes submetidos a cirurgia por hiperparatiroidismo primário e recomendam fortemente o seu uso em procedimentos cirúrgicos pouco invasivos ou guiados por imagem. Princípios do teste Informações sobre o produto O teste Access Intact PTH é um ensaio imunoenzimático de local duplo ( sandwich ). Uma amostra é adicionada a um recipiente de reacção, juntamente com um conjugado anticorpo monoclonal anti-pth - fosfatase alcalina, solução salina tamponada TRIS com proteínas e partículas paramagnéticas revestidas com anticorpo policlonal de cabra anti-pth. Após a incubação num recipiente de reacção, os materiais ligados à fase sólida são retidos num campo magnético enquanto os materiais não ligados são removidos por lavagem. De seguida, o substrato quimioluminescente, Lumi-Phos* 530, é adicionado ao recipiente e a luz gerada pela reacção é medida com um luminómetro. A produção de luz é directamente proporcional à concentração de PTH na amostra. A quantidade de analito presente na amostra é determinada a partir duma curva de calibração multiponto armazenada no sistema. Kit de reagentes Access Intact PTH Nº Cat. A16972: 100 determinações, 2 embalagens, 50 testes/embalagem Usado quer para o modo Rotineiro, quer para o modo Intra-operatório. Fornecido pronto para utilizar. Armazenar em posição vertical e refrigerar a 2 10 C. Manter refrigerado a 2 10 C por no mínimo duas horas antes de usar no equipamento. Estável até ao vencimento do prazo de validade marcado no rótulo quando armazenado a 2 10 C. Estável a 2 10 C por 28 dias após utilização inicial. Uma possível degradação pode ser indicada pela ruptura da camada de elastómero da embalagem ou por valores de controlo fora do intervalo de variação. Abrir a embalagem de reagente caso tenha sofrido prejuízos (p.ex. ruptura da camada elastomérica). Todos os anti-soros são policlonais, excepto quando indicado em contrário. R1a: R1b: R1c: Partículas paramagnéticas revestidas com anticorpo de cabra anti-pth suspenso em solução salina tamponada TRIS com albumina sérica bovina (BSA), surfactante, < 0,1% de azida sódica, 0,1% de ProClin** 300. Solução salina tamponada TRIS com block ACE, proteína (murina, caprina), surfactante, < 0,1% de azida sódica, 0,1% de ProClin 300. Conjugado anticorpo monoclonal de rato anti-pth - fosfatase alcalina em solução salina tamponada ACES com BSA, surfactante, < 0,1% de azida sódica, 0,1% de ProClin 300. Access Intact PTH A57349D 2011 Beckman Coulter, Inc. Página 2

3 Avisos e precauções Para utilização em diagnóstico in vitro. As amostras dos doentes e os produtos hemoderivados podem ser analisados rotineiramente com riscos mínimos utilizando o procedimento descrito. Contudo, deve manusear estes produtos como potencialmente infecciosos de acordo com as precauções gerais e os métodos adequados de laboratórios clínicos, independentemente da origem, tratamento ou certificação anterior. Usar um desinfectante apropriado para a descontaminação. Armazenar e eliminar estes materiais e os respectivos contentores segundo o regulamento e as normas locais. A azida sódica pode reagir com as canalizações de chumbo ou cobre formando azidas metálicas altamente explosivas. Portanto, deixar fluir água em abundância nos tubos durante a eliminação de líquidos para prevenir a acumulação de azidas. 8 Xi. Irritante: ProClin 300 0,1%. R 43: Pode causar sensibilização em contacto com a pele. S 28-37: Após contacto com a pele, lavar imediata e abundantemente com água e sabão. Usar luvas adequadas. A Folha dos Dados de Segurança do Material (MSDS) está disponível a pedido. Colheita e preparação da amostra 1. Soro e plasma (heparina e EDTA) são as amostras aconselhadas. 2. Seguir as recomendações abaixo para manipular, analisar e armazenar amostras de sangue: 9 Colher todas as amostras de sangue tomando as precauções habituais para a colheita venosa. Deixar as amostras de soro coagularem completamente antes da centrifugação. Manter as provetas sempre fechadas. Dentro de duas horas após a centrifugação, transferir no mínimo 500 μl de amostra isenta de células para uma proveta de armazenamento. Tapar imediatamente a proveta com a rolha, apertando bem. Para as amostras de plasma (heparina e EDTA): Armazenar as amostras hermeticamente fechadas à temperatura ambiente (a 15-30ºC) durante o máximo de oito horas. Se o ensaio não estiver pronto dentro de 8 horas, refrigerar as amostras a 2 8 C por no máximo 48 horas. Se o ensaio não estiver pronto dentro de 48 horas ou no caso de amostras a serem expedidas, congelar a -20 C ou a temperatura mais baixa por no máximo 6 meses. Para amostras de soro: Armazenar as amostras hermeticamente fechadas à temperatura ambiente (a 15 30ºC) durante um máximo de 4 horas. Se o ensaio não estiver pronto dentro de 4 horas, refrigerar as amostras a 2 8 C por no máximo 8 horas. Se o ensaio não estiver pronto dentro de 8 horas ou no caso de amostras a serem expedidas, congelar a -20 C ou a temperatura mais baixa por no máximo 6 meses. 3. Seguir as instruções abaixo para preparar as amostras: Certificar-se de que a fibrina e a matéria celular residuais tenham sido removidas antes da análise. Para a centrifugação, seguir as instruções do fabricante das provetas de colheita de sangue. 4. Cada laboratório deve determinar a aceitabilidade das próprias provetas de colheita de sangue e dos produtos de separação do soro. Estes produtos podem variar entre fabricantes diferentes e, às vezes, de um lote para o outro. 5. As amostras podem ser descongeladas no máximo três vezes. Evitar a análise de amostras lipémicas ou hemolisadas. Página 3

4 Materiais fornecidos R1 Kits de reagentes Access Intact PTH Materiais necessários mas não fornecidos Comentários sobre o procedimento Procedimento Detalhes de calibração Controlo de qualidade 1. Calibradores: Access Intact PTH Calibrators Fornecido em zero e aproximadamente 10, 60, 300, 1500 e 3500 pg/ml (1,1, 6,4, 31,8, 159,0 e 371,0 pmol/l). Nº Cat. A Materiais do Controlo de Qualidade (QC): material de controlo disponível no mercado. 3. Diluente de amostras A: Access Sample Diluent A Recipiente Nº Cat Embalagem de diluente Nº Cat. A79783 (A usar com o instrumento de diluição contido no sistema UniCel DxI.) 4. Substrato: Access Substrate Nº Cat Access, Access 2, SYNCHRON LXi, UniCel DxC 600i: Tampão de lavagem: Access Wash Buffer II, Nº Cat. A16792 UniCel DxI: Tampão de lavagem: UniCel DxI Wash Buffer II, Nº Cat. A Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para uma descrição específica da instalação, inicialização, princípios de funcionamento, características de desempenho do sistema, instruções de funcionamento, procedimentos de calibração, limitações operacionais e precauções, riscos, manutenção e solução de problemas. 2. Misturar o conteúdo das embalagens novas (vedadas) de reagentes invertendo delicadamente a embalagem várias vezes antes de carregá-la no equipamento. Não inverter embalagens abertas (perfuradas). 3. Usar cinqüenta e cinco (55) μl de amostra para cada determinação além dos volumes mortos do recipiente da amostra e do sistema. Usar cinqüenta (50) μl de amostra além dos volumes mortos do recipiente da amostra e do sistema para cada sessão de análise realizada com o instrumento de diluição contido no sistema DxI. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para o volume mínimo de amostra necessário. 4. A unidade de medida padrão do sistema para indicar os resultados das amostras é pg/ml. Para mudar essas unidades de medida para o Sistema Internacional de Unidades (unidades do SI), pmol/l, consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda. Para converter as concentrações manualmente para o Sistema Internacional, multiplicar pg/ml pelo factor de multiplicação 0,106. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre a gestão das amostras, a configuração dos testes, a solicitação de testes e a visualização dos resultados dos testes. Utilizar PTH como nome do teste para o Modo Rotineiro do teste Access Intact PTH e PTHIO como nome do teste para o Modo Intra-operatório do teste Access Intact PTH. O mesmo kit de reagentes é usado para ambos os modos. Para todos os testes, é necessário ter uma curva de calibração activa. Para o ensaio Access Intact PTH, a calibração é necessária a cada 28 dias. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre os métodos de calibração, a configuração de calibradores, a introdução de solicitações de testes dos calibradores e a visualização de dados de calibração. Os materiais de controlo de qualidade simulam as características das amostras dos doentes e são fundamentais para a monitorização do desempenho do sistema de análises imunoquímicas. Access Intact PTH A57349D 2011 Beckman Coulter, Inc. Página 4

5 Dado que as amostras podem ser analisadas a qualquer momento utilizando um formato de acesso aleatório em vez dum formato por lote, é aconselhável utilizar os materiais de controlo de qualidade a cada 24 horas. 10 Utilizar materiais de controlo de qualidade disponíveis no mercado que cubram pelo menos dois níveis de analito. O uso mais frequente de controlos ou o uso de controlos adicionais fica a critério do utilizador de acordo com os métodos adequados ou os requisitos de acreditação dos laboratórios e as leis competentes. Seguir as instruções do fabricante para a reconstituição e o armazenamento. Cada laboratório deve estabelecer os seus próprios valores médios e limites aceitáveis para garantir um desempenho adequado dos testes. Os resultados do controlo de qualidade que não estiverem dentro dos limites aceitáveis, podem indicar resultados de testes não válidos. Examinar todos os resultados dos testes obtidos desde o último ponto de teste de controlo de qualidade aceitável para este analito. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para informações sobre como visualizar os resultados do controlo de qualidade. Resultados Limitações do procedimento Os resultados dos testes dos doentes são determinados automaticamente pelo software do sistema utilizando um modelo matemático smoothing spline. A quantidade de analito na amostra é determinada a partir da produção de luz medida através dos dados de calibração armazenados no sistema. Os resultados dos testes dos doentes podem ser visualizados através do ecrã apropriado. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para as instruções completas sobre como visualizar os resultados das amostras. 1. Para o Modo Rotineiro: As amostras podem ser medidas com exactidão dentro do intervalo de análise compreendido entre o limite mínimo de detecção e o valor mais alto do calibrador (aproximadamente 3500 pg/ml [371 pmol/l]). Se uma amostra contém uma quantidade de analito menor que a sensibilidade analítica para o ensaio, registar os resultados como menores que aquele valor (por ex., < 1 pg/ml [< 0,1 pmol/l]). Informações adicionais sobre a sensibilidade funcional para o teste Intact PTH podem ser encontrada na secção Características específicas de desempenho deste folheto. Quando se usa o instrumento de diluição contido no sistema DxI, o sistema registará os resultados como inferiores a 2975 pg/ml (316 pmol/l). Se uma amostra contém uma quantidade maior que o valor estabelecido do calibrador mais alto Access Intact PTH Calibrator (S5), registar os resultados como maiores que aquele valor (por ex., > 3500 pg/ml [> 371 pmol/l]). Alternativamente, diluir um volume de amostra com nove volumes de diluente de amostras A Access Sample Diluent A. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para as instruções sobre a introdução duma diluição de amostra numa solicitação de teste. O sistema mostra os resultados adaptados à diluição. O instrumento de diluição contido no sistema DxI automatiza o processo de diluição, usando um volume de amostra com nove volumes de diluente de amostras Access Sample Diluent A, permitindo que as amostras sejam quantificadas até a aproximadamente pg/ml (3714 pmol/l). O sistema mostra os resultados adaptados à diluição. Para o Modo Intra-operatório: As amostras podem ser medidas com exactidão dentro do intervalo de análise compreendido entre o limite mínimo de detecção e o valor mais alto do calibrador (aproximadamente 3500 pg/ml [371 pmol/l]). Se uma amostra contém uma quantidade de analito menor que a sensibilidade analítica para o ensaio, registar os resultados como menores que aquele valor (por ex., < 6 pg/ml [< 0,6 pmol/l]). Quando se usa o instrumento de diluição contido no sistema DxI, o sistema registará os resultados como inferiores a 2975 pg/ml (316 pmol/l). Se uma amostra contém uma quantidade maior que o valor estabelecido do calibrador mais alto Access Intact PTH Calibrator (S5), registar os resultados como maiores que aquele valor (por ex., > 3500 pg/ml [> 371 pmol/l]). Alternativamente, diluir um Página 5

6 volume de amostra com nove volumes de diluente de amostras A Access Sample Diluent A. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para as instruções sobre a introdução duma diluição de amostra numa solicitação de teste. O sistema mostra os resultados adaptados à diluição. O instrumento de diluição contido no sistema DxI automatiza o processo de diluição, usando um volume de amostra com nove volumes de diluente de amostras Access Sample Diluent A, permitindo que as amostras sejam quantificadas até a aproximadamente pg/ml (3714 pmol/l). O sistema mostra os resultados adaptados à diluição. 2. Nos ensaios que utilizam anticorpos, existe a possibilidade de interferência dos anticorpos heterófilos contidos na amostra do doente. Os doentes que estão regularmente em contacto com animais ou que tenham sido submetidos a imunoterapia ou a técnicas de diagnóstico que utilizam imunoglobulinas ou fragmentos de imunoglobulinas podem produzir anticorpos, por ex. HAMA, que interferem com os imunoensaios. Para além disso, outros anticorpos heterófilos, tais como os anticorpos humanos anti-cabra, podem estar presentes nas amostras dos doentes. 11,12 Tais anticorpos interferentes podem produzir resultados errados. Os resultados de doentes suspeitos de ter estes anticorpos devem ser avaliados com cuidado. 3. Os resultados do Access Intact PTH devem ser interpretados baseando-se no quadro clínico geral do doente, incluindo: os sintomas, a anamnese clínica, os dados de outros testes e outras informações apropriadas. 4. O ensaio Access Intact PTH não apresenta algum efeito gancho (hook) até a pg/mL (26500pmol/L). 5. Não foram estabelecidos intervalos de referência pediátricos (valores esperados) para o teste Access Intact PTH. 6. O Modo Intra-operatório do teste Access Intact PTH não é recomendado para o uso em testes rotineiros da PTH. As características de desempenho para a reactividade cruzada com formas metabolizadas da PTH não foram estabelecidas. 7. Para análises com o teste Access Intact PTH no Modo Intra-operatório em doentes submetidos a paratiroidectomia por hiperparatiroidismo primário, recomenda-se o seguinte: 7 As amostras basais devem ser colhidas antes da operação/exploração e excisão. As amostras devem ser colhidas de 5 a 10 minutos após a ressecção do tecido hiperfuncionante da paratiróide. Pode-se necessitar de amostras adicionais. Pelo menos 50% de redução no valor da PTH deve ser observado quando a amostra basal mais elevada é comparada com as amostras pós-ressecção. Valores esperados 1. Cada laboratório deve estabelecer os seus próprios intervalos de referência para garantir uma representação adequada de populações específicas. 2. Está abundantemente documentado que as concentrações de PTH são influenciadas por diversos factores conhecidos por seu efeito sinérgico sobre a homeostase do cálcio. A idade, o sexo, a latitude, a estação do ano, a pigmentação da pele, a exposição solar, a integração de vitamina D, a função renal e a deficiência de vitamina D são todos factores que podem afectar o metabolismo da PTH e influenciar os valores de referência e os limites de decisão. 13 Para estabelecer um intervalo de referência, as concentrações de PTH foram medidas em 289 amostras emparelhadas de soro e plasma EDTA humanos provenientes de indivíduos de ambos os sexos aparentemente saudáveis com idade de 19 a 67 anos. Por causa das variações sazonais significativas da 25-hidroxivitamina D, as amostras foram colhidas durante três períodos diferentes do ano e em duas latitudes geográficas: Junho de 2005 no norte dos Estados Unidos e Setembro de 2005 no sul dos Estados Unidos, assim como em Fevereiro de 2006 tanto no norte como no sul dos Estados Unidos. Em seguida, foram realizados testes adicionais para excluir os indivíduos com níveis anormais de cálcio no soro, creatinina ou 25-hidroxivitamina D. Os valores medianos e os intervalos de referência não paramétricos a Access Intact PTH A57349D 2011 Beckman Coulter, Inc. Página 6

7 95% estão descritos abaixo. Os intervalos de referência dos Modos Rotineiro e Intra-operatório são equivalentes. n Idade mediana Faixa etária Valor mediano ,8 pg/ml (4,0 pmol/l) Intervalo de referência pg/ml (1,3 9,3 pmol/l) Características específicas de desempenho Modo Rotineiro Desempenho clínico Modo Rotineiro A PTH intacta também foi medida em doentes com vários distúrbios do metabolismo do cálcio. A figura abaixo ilustra a relação entre as concentrações de cálcio sérico de cada paciente e o respectivo valor de PTH intacta traçados numa escala logarítmica. Neste estudo, foram avaliadas as seguintes populações de pacientes: indivíduos aparentemente saudáveis (n=289) e doentes com hiperparatiroidismo primário confirmado por cirurgia (n=22), com hiperparatiroidismo secundário (n=32), com hipoparatiroidismo (n=12) e com hipercalcemia de tumor maligno (n=3). Comparação de métodos Modo Rotineiro Uma comparação de 500 valores obtidos com o Modo Rotineiro do ensaio Access Intact PTH do sistema de imunoensaio Access e com um sistema de imunoensaio disponível no mercado forneceu os seguintes dados estatísticos aplicando os cálculos Deming: n Intervalo de observações Intercepção Inclinação Coeficiente de correlação (r) (1,7 278,5) -11,48 (-1,22) 1,09 0,99 Página 7

8 Recuperação da diluição (linearidade) Modo Rotineiro As amostras de plasma EDTA com concentrações elevadas de PTH foram diluídas com o diluente de amostras Access Sample Diluent A. Os resultados de recuperação estão resumidos na seguinte tabela: Amostra 1 Concentração esperada Concentração determinada Recuperação (%) Pura 3185 (337,6) 3185 (337,6) N/A 1/1, (311,9) 2847 (301,8) 97 1/1, (278,1) 2510 (266,1) 96 1/1, (236,2) 2103 (222,9) 94 1/1, (187,6) 1718 (182,1) 97 1/2, (150,2) 1383 (146,6) 98 1/3, (112,8) 997 (105,7) 94 1/4,5 709 (75,2) 660 (70,0) 93 1/9,0 356 (37,7) 317 (33,6) 89 Recuperação média em% 95 Amostra 2 Concentração esperada Concentração determinada Recuperação (%) Pura 3081 (326,6) 3081 (326,6) N/A 1/1, (301,6) 2848 (301,9) 100 1/1, (269,2) 2486 (263,5) 98 1/1, (229,4) 2066 (219,0) 95 1/1, (181,6) 1803 (191,1) 105 1/2, (145,2) 1325 (140,5) 97 1/3, (108,9) 966 (102,4) 94 1/4,5 684 (72,5) 640 (67,8) 94 1/9,0 345 (36,6) 327 (34,7) 95 Recuperação média em% 97 Amostra 3 Concentração esperada Concentração determinada Recuperação (%) Pura 992,7 (105,2) 992,7 (105,2) N/A 1/1, ,0 (76,5) 712,6 (75,5) 98,7 1/2,75 361,1 (38,3) 358,6 (38,0) 99,3 1/5,5 180,6 (19,1) 178,0 (18,9) 98,6 1/11 90,4 (9,6) 83,7 (8,9) 92,6 1/27,5 36,2 (3,8) 31,6 (3,3) 87,2 1/220 4,6 (0,5) 3,4 (0,4) 73,3 Recuperação média em% 91,6 Imprecisão Modo Rotineiro Este ensaio apresenta uma imprecisão total 8% com concentrações acima de 12 pg/ml (1,3 pmol/l). Um estudo, utilizando material de controlo com base em plasma EDTA humano, realizado com um único instrumento de medição e durante um único ciclo de calibração, incluindo um total de 20 testes, 2 replicados por teste, no decorrer de 22 dias, forneceu os seguintes dados, examinados através da análise de variância (ANOVA). 14 Access Intact PTH A57349D 2011 Beckman Coulter, Inc. Página 8

9 Amostra de Plasma EDTA humano Dose média Intra-execução (%CV) Inter-execução (%CV) Imprecisão total (%CV) Nível 1 12,1 (1,3) 2,6 5,8 6,4 Nível (15,3) 1,6 3,2 3,6 Nível (152,5) 2,2 2,8 3,5 Especificidade analítica/interferências Modo Rotineiro Os seguintes fármacos/substâncias interferentes foram adicionados a um pool de amostras de plasma EDTA contendo aproximadamente 60 pg/ml (6,4 pmol/l) de PTH. Cada fármaco/substância interferente foi testado com as concentrações mínimas relacionadas abaixo. Todos os valores de PTH obtidos na presença de cada fármaco/substância interferente resultaram dentro de ± 10% dos valores de controlo, indicando que estas substâncias não interferem com o ensaio. Fármaco/Substância interferente Concentração testada % de interferência Bilirrubina, conjugada 20 mg/dl -3,2 Bilirrubina, não conjugada 20 mg/dl -2,5 Trioleína 3000 mg/dl 4,8 Colesterol 500 mg/dl -1,1 Hemoglobina 500 mg/dl 4,3 albumina sérica humana 49 g/l -5,6 Paracetamol 20 mg/dl 0,2 D-biotina 100 μg/l 0,0 Heparina 8000 IU/dL 0,0 Ibuprofeno 40 mg/dl -2,2 Pamidronato 10 μg/ml 0,6 Propofol 2 μg/ml -1,3 Ácido salicílico 50 mg/dl 1,9 Cada um dos seguintes fragmentos com potencial reactividade cruzada foi adicionado ao calibrador Access Intact PTH Calibrator S0 e testado em replicados de cinco. Substância Analito adicionado Reatividade cruzada (%) PTH (500) 100 PTH (500) 72 PTH (2000) < 0,1 PTH (2000) < 0,1 PTH (2000) < 0,1 PTHrp (2000) < 0,1 Sensibilidade analítica Modo Rotineiro O nível mínimo detectável de PTH distinguível de zero (calibrador Access Intact PTH Calibrator S0) com 95% de confiança é 1 pg/ml (0,1 pmol/l). Este valor é determinado através do processamento duma curva de calibração completa de seis pontos, controlos e 10 replicados do calibrador zero em testes múltiplos. O valor de sensibilidade analítica é calculado a partir da curva no ponto que representa dois desvios padrão do sinal médio medido no calibrador zero. Sensibilidade Funcional Modo Rotineiro O termo sensibilidade funcional foi originalmente utilizado para definir o ponto mais baixo do intervalo de medição do teste TSH, onde os resultados podiam ser constantemente obtidos com uma imprecisão total de 20% do CV. 15 A sensibilidade funcional determinada por uma imprecisão total de 20% do CV resultou ser de < 4 pg/ml (< 0,4 pmol/l). Página 9

10 Características específicas de desempenho Modo Intra-operatório Comparação de métodos Modo Intra-operatório Uma comparação de 393 valores obtidos com o Modo Intra-operatório do ensaio Access Intact PTH do sistema de Imunoensaio Access e com um sistema de imunoensaio disponível no mercado forneceu os seguintes dados estatísticos aplicando os cálculos Deming: n Intervalo de observações Intercepção Inclinação Coeficiente de correlação (r) 393 8, (0,8 260,0) 0,13 (0,014) 0,87 1,00 Uma comparação de 493 valores obtidos com os Modos Rotineiro e Intra-operatório do ensaio Access Intact PTH do sistema de Imunoensaio Access forneceu os seguintes dados estatísticos aplicando os cálculos Deming: n Intervalo de observações Intercepção Inclinação Coeficiente de correlação (r) (1,4 301,9) 9,69 (1,03) 0,94 1,00 Recuperação da diluição (linearidade) Modo Intra-operatório As amostras de plasma EDTA com concentrações elevadas de PTH foram diluídas com o diluente de amostras Access Sample Diluent A. Os resultados de recuperação estão resumidos na seguinte tabela: Amostra 1 Concentração esperada Concentração determinada Recuperação (%) Pura 3054 (323,7) 3054 (323,7) N/A 1/1, (299,2) 2818 (298,7) 100 1/1, (266,9) 2522 (267,3) 100 1/1, (227,1) 2093 (221,9) 98 1/1, (180,1) 1731 (183,5) 102 1/2, (143,8) 1357 (143,8) 100 1/3, (108,1) 987 (104,6) 97 1/4,5 680 (72,1) 639 (67,7) 94 1/9,0 343 (36,4) 319 (33,8) 93 Recuperação média em% 98 Amostra 2 Concentração esperada Concentração determinada Recuperação (%) Pura 3050 (323,3) 3050 (323,3) N/A 1/1, (298,2) 2700 (286,2) 96 1/1, (265,1) 2408 (255,2) 96 1/1, (225,8) 1945 (206,2) 91 1/1, (179,9) 1611 (170,8) 95 1/2, (143,6) 1244 (131,9) 92 1/3, (107,9) 931 (98,7) 91 1/4,5 678 (71,9) 576 (61,1) 85 1/9,0 343 (36,4) 290 (30,7) 85 Recuperação média em% 91 Access Intact PTH A57349D 2011 Beckman Coulter, Inc. Página 10

11 Amostra 3 Concentração esperada Concentração determinada Recuperação (%) Pura 737 (78,1) 737 (78,1) N/A 1/5 148 (15,7) 138 (14,6) 93 1/10 75 (8,0) 63 (6,7) 84 1/25 31 (3,3) 26 (2,8) 85 1/50 16 (1,7) 14 (1,5) 88 1/100 8,6 (0,9) 7,8 (0,8) 90 Recuperação média em% 88 Imprecisão Modo Intra-operatório Este ensaio apresenta uma imprecisão total 12% com concentrações acima de 12 pg/ml (1,3 pmol/l). Um estudo, utilizando material de controlo com base em plasma EDTA humano, realizado com um único instrumento de medição e durante um único ciclo de calibração, incluindo um total de 20 testes, 2 replicados por teste, no decorrer de 22 dias, forneceu os seguintes dados, examinados através da análise de variância (ANOVA). 14 Amostra de Plasma EDTA humano Dose média Intra-execução (%CV) Inter-execução (%CV) Imprecisão total (%CV) Nível 1 11,4 (1,2) 6,8 8,1 10,6 Nível (15,3) 2,8 3,3 4,4 Nível (151,9) 3,2 3,0 4,4 Especificidade analítica/interferências Modo Intra-operatório Os seguintes fármacos/substâncias interferentes foram adicionados a um pool de amostras de plasma EDTA contendo aproximadamente 60 pg/ml (6,4 pmol/l) de PTH. Cada fármaco/substância interferente foi testado com as concentrações mínimas relacionadas abaixo. Todos os valores de PTH obtidos na presença de cada fármaco/substância interferente resultaram dentro de ± 10% dos valores de controlo, indicando que estas substâncias não interferem com o ensaio. Fármaco/Substância interferente Concentração testada % de interferência Bilirrubina, conjugada 20 mg/dl 1,1 Bilirrubina, não conjugada 20 mg/dl 2,2 Trioleína 3000 mg/dl 6,1 Colesterol 500 mg/dl 5,3 Hemoglobina 500 mg/dl -0,3 albumina sérica humana 49 g/l -9,9 Paracetamol 20 mg/dl -0,3 D-biotina 100 μg/l -1,3 Heparina 8000 IU/dL -2,0 Ibuprofeno 40 mg/dl 0,2 Pamidronato 10 μg/ml -0,2 Propofol 2 μg/ml -4,0 Ácido salicílico 50 mg/dl 2,0 Página 11

12 Sensibilidade analítica Modo Intra-operatório O nível mínimo detectável de PTH distinguível de zero (calibrador Access Intact PTH Calibrator S0) com 95% de confiança é 6 pg/ml (0,6 pmol/l). Este valor é determinado através do processamento duma curva de calibração completa de seis pontos, controlos e 10 replicados do calibrador zero em testes múltiplos. O valor de sensibilidade analítica é calculado a partir da curva no ponto que representa dois desvios padrão do sinal médio medido no calibrador zero. Sensibilidade Funcional Modo Intra-operatório O termo sensibilidade funcional foi originalmente utilizado para definir o ponto mais baixo do intervalo de medição do teste TSH, onde os resultados podiam ser constantemente obtidos com uma imprecisão total de 20% do CV. 15 A sensibilidade funcional determinada por uma imprecisão total de 20% do CV resultou ser de < 8 pg/ml (< 0,8 pmol/l). Access Intact PTH A57349D 2011 Beckman Coulter, Inc. Página 12

13 INTACT PTH CALIBRATORS A16953 Finalidade prevista Resumo e explicação do produto Rastreabilidade Informações sobre o produto Os calibradores Access Intact PTH Calibrators são utilizados para calibrar o ensaio Access Intact PTH para a determinação quantitativa dos níveis de hormona paratiroideia intacta (paratirina, PTH) no soro e no plasma humanos utilizando os Sistemas de Imunoensaio Access. A calibração dum ensaio quantitativo é o processo pelo qual as amostras com concentrações conhecidas de analito (por ex., calibradores de ensaio) são testadas como amostras de doentes a fim de medir a sua resposta. A relação matemática entre as respostas medidas e as concentrações conhecidas de analito define a curva de calibração. Esta relação matemática, ou curva de calibração, é utilizada para converter as medições URL (Unidade Relativa de Luz) de amostras de doentes em concentrações quantitativas específicas de analito. A substância a ser medida (analito) nos calibradores Access Intact PTH Calibrators tem como referência os calibradores internos do fabricante. O processo de rastreabilidade baseia-se na norma EN ISO A recuperação média da preparação padrão da OMS 79/500 diluída no diluente de amostras Access Sample Diluent A (Nº Cat ) é de 57% para o Modo Rotineiro e de 53% para o Modo Intra-operatório em todo o intervalo do teste. Calibradores Access Intact PTH Calibrators Nº Cat. A16953: Tampão de reconstituição PTH (RB), 2 recipientes, 4,0 ml/recipientes; S0 S5, 1,0 ml/recipiente Usado quer para o modo Rotineiro, quer para o modo Intra-operatório. Os calibradores (Calibrators) e o tampão de reconstituição (Reconstitution Buffer) são apenas de uso único. Os calibradores S0 S5 são fornecidos liofilizados. Reconstituir cada recipiente do calibrador volumetricamente com 1,0 ml de tampão de reconstituição PTH. Deixar dissolver por 30 minutos. Misturar delicadamente antes da utilização. Utilizar os calibradores reconstituídos dentro de 2 horas se armazenados a C. Utilizar os calibradores reconstituídos dentro de 10 horas se armazenados a 2 10 C. Os calibradores liofilizados e o tampão de reconstituição PTH são estáveis até ao vencimento do prazo de validade marcado na etiqueta quando armazenados a 2 10 C. Uma possível degradação pode ser indicada por valores de controlo fora do intervalo de variação. Consultar o cartão de calibração para as concentrações exactas. Página 13

14 RB: Matriz tamponada proteica (bovina), 0,5% de ProClin** 300. S0: Tampão PBS, albumina sérica bovina (BSA), surfactante, < 0,1% de azida sódica. S1, S2,S3, S4, S5: Cartões de calibração: Aproximadamente 10, 60, 300, 1500 e 3500 pg/ml (1,1, 6,4, 31,8, 159,0 e 371,0 pmol/l) de PTH (antigénio sintético), respectivamente, em tampão PBS com BSA, surfactante, < 0,1% de azida sódica. 2 Cartões de calibração: Para o teste Access Intact PTH, é fornecido um cartão de calibração para o Modo Rotineiro e um outro cartão de calibração para o Modo Intra-operatório. Avisos e precauções Para utilização em diagnóstico in vitro. As amostras dos doentes e os produtos hemoderivados podem ser analisados rotineiramente com riscos mínimos utilizando o procedimento descrito. Contudo, deve manusear estes produtos como potencialmente infecciosos de acordo com as precauções gerais e os métodos adequados de laboratórios clínicos, independentemente da origem, tratamento ou certificação anterior. Usar um desinfectante apropriado para a descontaminação. Armazenar e eliminar estes materiais e os respectivos contentores segundo o regulamento e as normas locais. A azida sódica pode reagir com as canalizações de chumbo ou cobre formando azidas metálicas altamente explosivas. Portanto, deixar fluir água em abundância nos tubos durante a eliminação de líquidos para prevenir a acumulação de azidas. 8 Xi. Irritante: ProClin 300 0,5%. R 43: Pode causar sensibilização em contacto com a pele. S 28-37: Após contacto com a pele, lavar imediata e abundantemente com água e sabão. Usar luvas adequadas. A Folha dos Dados de Segurança do Material (MSDS) está disponível a pedido. Procedimento Detalhes da calibração Limitações do procedimento Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre os métodos de calibração, a configuração de calibradores, a introdução de solicitações de testes dos calibradores e a visualização de dados de calibração. São necessários cartões de calibração diferentes para os modos Rotineiro e Intra-operatório do teste Access Intact PTH. Cada modo tem um cartão de calibração individual e deve ser calibrado consequentemente. O mesmo grupo de calibradores é utilizado para ambos os modos. Os calibradores Access Intact PTH Calibrators são fornecidos em seis níveis zero e aproximadamente 10, 60, 300, 1500 e 3500 pg/ml (1,1, 6,4, 31,8, 159,0 e 371,0 pmol/l). Os dados de calibração do ensaio são válidos por 28 dias. Os calibradores são analisados em duplicado. Se forem notados sinais de contaminação microbiana ou excesso de turvação num reagente, rejeitar o recipiente. Access Intact PTH A57349D 2011 Beckman Coulter, Inc. Página 14

15 .. SAMPLE DILUENT A (Recipiente) A79783 (Embalagem de Diluente) Finalidade prevista Resumo e explicação do produto Informações sobre o produto O diluente de amostras A Access Sample Diluent A é utilizado juntamente com os ensaios Access para diluir as amostras dos doentes contendo concentrações de analito maiores que o calibrador S5 específico para aquele analito. O nível de analito nas amostras dos doentes podem exceder os níveis do calibrador S5 específico. Se for necessário um valor quantitativo, será preciso diluir a amostras a fim de determinar a concentração de analito. Access Sample Diluent A Nº Cat : 4 ml/recipiente Fornecido pronto para utilizar. Deixar o conteúdo repousar à temperatura ambiente por 10 minutos. Misturar invertendo delicadamente antes da utilização. Evitar a formação de bolhas. Estável até ao vencimento do prazo de validade marcado no rótulo do recipiente quando armazenado a 2 10 C. Diluente: Matriz BSA tamponada com surfactante, < 0,1% de azida sódica, 0,5% de ProClin** 300. Nº Cat. A79783: 2 embalagens de diluente, 32,9 ml/embalagem Fornecido pronto para utilizar. Armazenar em posição vertical e refrigerar a 2 10 C. Manter refrigerado a 2 10 C por no mínimo duas horas antes de usar no equipamento. Estável até ao vencimento do prazo de validade marcado no rótulo quando armazenado a 2 10 C. Estável a 2 10 C por 56 dias após a utilização inicial de cada poço. Uma possível degradação pode ser indicada pela ruptura da camada de elastómero da embalagem ou por valores de controlo fora do intervalo de variação. Se a embalagem de diluente estiver danificada (por ex., ruptura da camada de elastómero), rejeitar a embalagem. R1a R1e: Matriz BSA tamponada com surfactante, < 0,1% de azida sódica, 0,5% de ProClin 300. Avisos e precauções Para utilização em diagnóstico in vitro. As amostras dos doentes e os produtos hemoderivados podem ser analisados rotineiramente com riscos mínimos utilizando o procedimento descrito. Contudo, deve manusear estes produtos como potencialmente infecciosos de acordo com as precauções gerais e os métodos adequados de laboratórios clínicos, independentemente da origem, tratamento ou certificação anterior. Usar um desinfectante apropriado para a descontaminação. Armazenar e eliminar estes materiais e os respectivos contentores segundo o regulamento e as normas locais. Página 15

16 A azida sódica pode reagir com as canalizações de chumbo ou cobre formando azidas metálicas altamente explosivas. Portanto, deixar fluir água em abundância nos tubos durante a eliminação de líquidos para prevenir a acumulação de azidas. 8 Xi. Irritante: ProClin 300 0,5%. R 43: Pode causar sensibilização em contacto com a pele. S 28-37: Após contacto com a pele, lavar imediata e abundantemente com água e sabão. Usar luvas adequadas. A Folha dos Dados de Segurança do Material (MSDS) está disponível a pedido. Procedimento Limitações do procedimento As amostras podem ser medidas com exactidão dentro do intervalo analítico compreendido entre o limite mínimo de detecção e o valor do calibrador mais alto do ensaio específico. Se uma amostra contém uma quantidade de analito maior que o valor estabelecido do calibrador S5, diluir a amostra seguindo as instruções de diluição do ensaio específico contidas no folheto do kit sob Limitações do Procedimento na secção reagentes. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para as instruções sobre a introdução duma diluição de amostra numa solicitação de teste. Se forem notados sinais de contaminação microbiana ou excesso de turvação no reagente, rejeitar o recipiente. Access Intact PTH A57349D 2011 Beckman Coulter, Inc. Página 16

17 Referências 1 Mundy GR, Guise TA. Hormonal control of calcium homeostasis. Clin Chem 1999; 45: Strewler GJ. Mineral metabolism and metabolic bone disease. In Basic and Clinical Endocrinology Fifth Edition; Greenspan FS & Strewler GJ Eds, 1997; Marx S. Hyperparathyroid and hypoparathyroid disorders. NEJM 2000; 343: K/DOKI guidelines for the management of renal osteodystrophy. Am J Kidney Dis 2003; 42(Suppl 3): S Boggs JE, Irvin GL, Molinari AS, Deriso GT. Intraoperative parathyroid hormone monitoring as an adjunct to parathyroidectomy. Surgery 1996; 120: Clary BM, Garner SC, Leight GS. Intraoperative parathyroid hormone monitoring as an adjunct to parathyroidectomy for secondary hyperparathyroidism. Surgery 1997; 122: Laboratory Guidelines for Evidence-Based Practice for POCT, final draft. August National Academy of Clinical Biochemistry. 8 DHHS (NIOSH) Publication No , August Current Intelligence Bulletin 13 - Explosive Azide Hazard. Available 9 Approved Guideline Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens, H18-A Clinical and Laboratory Standards Institute. 10 Cembrowski GS, Carey RN. Laboratory quality management: QC QA. ASCP Press, Chicago, IL, Kricka L. Interferences in immunoassays still a threat. Clin Chem 2000; 46: Bjerner J, et al. Immunometric assay interference: incidence and prevention. Clin Chem 2002; 48: Souberbielle JC, Fayol V, Sault C, Lawson-Body E, et al. Assay specific decision limits for two new automated parathyroid hormones and 25-hydroxyvitamin D assays. Clin Chem 2006; 51: Approved Guideline Statistical Quality Control for Quantitative Measurement Procedures: Principles and Definitions, C24-A3. June Clinical and Laboratory Standards Institute. 15 Spencer CA, Takeuchi M, Kazarosyan M, MacKenzie F et al. Interlaboratory/intermethod differences in functional sensitivity of immunometric assays of Thyrotropin (TSH) and impact on reliability measurement of subnormal concentrations of TSH. Clin Chem 1995; 41: Beckman Coulter, Access, SYNCHRON LX, UniCel e DxI são marcas registadas da Beckman Coulter, Inc.; Beckman Coulter, Access, SYNCHRON LX, UniCel e DxI estão registadas nos órgãos USPTO e SIPO. *Lumi-Phos é uma marca registrada da Lumigen, Inc., uma companhia subsidiária da Beckman Coulter, Inc. **ProClin é uma marca registrada da Companhia Rohm e Haas ou de suas subsidiárias e filiais. Fabricado por: Beckman Coulter, Inc. 250 S. Kraemer Blvd. Brea, CA U.S.A. Beckman Coulter do Brasil Com e Imp de Prod Lab Ltda Estr dos Romeiros, Galpao G3 - KM Sao Paulo - SP - Brasil CNPJ: / Beckman Coulter Ireland Inc. Mervue Business Park, Mervue, Galway, Ireland Impresso nos Estados Unidos da América Fabricado nos Estados Unidos da América ou na Irlanda e na França Revisado em Abril 2011 Página 17