TESTOSTERONE. Finalidade do teste
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- Gustavo da Costa Casado
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1 TM TESTOSTERONE REF Finalidade do teste Resumo e explicação do teste Princípios do teste Informações sobre o produto O teste Access Testosterone é um imunoensaio quimioluminescente com partículas paramagnéticas para a determinação quantitativa dos níveis de testosterona no soro e no plasma humanos utilizando os Sistemas de Imunoensaio Access. Nos homens, a testosterona é segregada pelas células adultas de Leydig e é controlada principalmente pela hormona luteinizante (LH). A maior parte da testosterona sérica está ligada à globulina de ligação das hormonas sexuais (SHBG), mas também existe em ligação solta com a albumina e em estado livre. Nos homens, um nível de testosterona total anormalmente baixo pode indicar hipogonadismo, hipopituitarismo, hiperprolactinemia, insuficiência renal, cirrose hepática ou síndroma de Kleinfelter. Ao contrário, valores elevados de testosterona total nos homens podem ser causados por tumores das glândulas supra-renais ou dos testículos, hiperplasia congênita das glândulas supra-renais ou anomalias do eixo hipotalâmico-pituitário-testicular 1. Nas mulheres, a testosterona é produzida nos ovários, nas glândulas supra-renais e nos tecidos adiposos periféricos e tem uma concentração sérica aproximadamente 10 vezes menor do que nos homens. Como para os homens, a maior parte da testosterona sérica nas mulheres está ligada à SHBG e à albumina com uma pequena quantidade em estado livre 2. Níveis de testosterona total elevados nas mulheres podem indicar síndroma ovariana policística (PCOS), hipertecose estromática, tumores ovarianos e das glândulas supra-renais, hiperplasia congênita das glândulas supra-renais e outros distúrbios do eixo hipotalâmico-pituitário-ovariano 3. O teste Access Testosterone é um ensaio imunoenzimático competitivo. Uma amostra é adicionada a um recipiente de reacção contendo Solução de Tratamento das Amostras, anticorpo monoclonal de rato antitestosterona, conjugado testosterona fosfatase alcalina e partículas paramagnéticas revestidas com anticorpo policlonal de cabra anti-rato. A testosterona contida na amostra é libertada pelas proteínas transportadoras através da Solução de Tratamento das Amostras e compete com o conjugado testosterona fosfatase alcalina pelos locais de ligação numa quantiade limitada de anticorpo monoclonal específico antitestosterona. Os complexos antigénio-anticorpo resultantes são, então, ligados à fase sólida pelo anticorpo de captura. Após a incubação num recipiente de reacção, os materiais ligados à fase sólida são retidos num campo magnético enquanto os materiais não ligados são removidos por lavagem. De seguida, o substrato quimioluminescente, Lumi-Phos* 530, é adicionado ao recipiente e a luz gerada pela reacção é medida com um luminómetro. A produção de luz é inversamente proporcional à concentração de testosterona na amostra. A quantidade de analito presente na amostra é determinada a partir duma curva de calibração multiponto armazenada no sistema. Kit de reagentes Access Testosterone Nº Cat : 100 determinações, 2 embalagens, 50 testes/embalagem Fornecido pronto para utilizar. Armazenar em posição vertical e refrigerar a 2 10 C. Manter refrigerado a 2 10 C por no mínimo duas horas antes de usar no aparelho. Estável até ao vencimento do prazo de validade marcado na etiqueta quando armazenado a 2 10 C. Estável a 2 10 C por 28 dias após utilização inicial. Página 1
2 Uma possível degradação pode ser indicada pela ruptura da camada de elastómero da embalagem ou por valores de controlo fora do intervalo de variação. Todos os anti-soros são policlonais, excepto quando indicado em contrário. R1a: R1b: R1c: Partículas paramagnéticas revestidas com IgG de cabra anti-rato; conjugado testosterona fosfatase alcalina com albumina sérica bovina (BSA), < 0,1% de azida sódica e 0,1% de ProClin** 300. Solução de Tratamento das Amostras, < 0,1% de azida sódica. Anticorpo monoclonal antitestosterona (murino), proteínas (BSA, murina, caprina), < 0,1% de azida sódica, 0,1% de ProClin 300. Avisos e precauções Colheita e preparação da amostra Para utilização em diagnóstico in vitro. As amostras dos doentes e os produtos hemoderivados podem ser analisados rotineiramente com riscos mínimos utilizando o procedimento descrito. Contudo, deve manusear estes produtos como potencialmente infecciosos de acordo com as precauções gerais e os métodos adequados de laboratórios clínicos, independentemente da origem, tratamento ou certificação anterior. Usar um desinfectante apropriado para a descontaminação. Armazenar e eliminar estes materiais e os respectivos contentores segundo o regulamento e as normas locais. A azida sódica pode reagir com as canalizações de chumbo ou cobre formando azidas metálicas altamente explosivas. Portanto, deixar fluir água em abundância nos tubos durante a eliminação de líquidos para prevenir a acumulação de azidas 4. O ProClin 300 pode causar sensibilização cutânea. Evitar entornar ou salpicar este reagente sobre a pele ou as roupas. Em caso de contacto com este reagente, lavar com abundante água e sabão. A Folha dos Dados de Segurança do Material (MSDS) está disponível a pedido. Soro e plasma (heparina) são as amostras aconselhadas. Seguir as recomendações abaixo para manusear, analisar e armazenar amostras de sangue 5,6 : Colher todas as amostras de sangue tomando as precauções habituais para a colheita venosa. Deixar as amostras de soro coagularem completamente antes da centrifugação. Manter as provetas sempre fechadas. Dentro de duas horas após a centrifugação, transferir no mínimo 500 µl de amostra isenta de células para uma proveta de armazenamento. Tapar imediatamente a proveta com a rolha, apertando bem. Armazenar as amostras hermeticamente fechadas à temperatura ambiente (a C) durante o máximo de oito horas. Se o ensaio não estiver pronto dentro de oito horas, refrigerar as amostra a 2 8 C. Se o ensaio não estiver pronto dentro de 48 horas, ou no caso de amostras a serem expedidas, congelar a -20 C ou a temperatura mais baixa. Seguir as instruções abaixo para preparar as amostras, excepto quando indicado em contrário no folheto do produto: Certificar-se de que a fibrina e a matéria celular residuais tenham sido removidas antes da análise. Para a centrifugação, seguir as instruções do fabricante das provetas de colheita de sangue. Cada laboratório deve determinar a aceitabilidade das próprias provetas de colheita de sangue e dos produtos de separação do soro. Estes produtos podem variar entre fabricantes diferentes e, às vezes, de um lote para o outro. As amostras podem ser descongeladas e congeladas no máximo duas vezes. Access Testosterone A 2003 Beckman Coulter, Inc. Página 2
3 Materiais fornecidos R1 Kits de reagentes Access Testosterone Materiais necessários mas não fornecidos Comentários sobre o procedimento Procedimento Detalhes de calibração Controlo de qualidade 1. Calibradores: Access Testosterone Calibrators Fornecido em zero e aproximadamente 0,5; 1,5; 4,0; 8,0 et 16,0 ng/ml (1,7; 5,2; 13,9; 27,8 et 55,5 nmol/l). Nº Cat Materiais do Controle de Qualidade (QC): material de controlo disponível no mercado. 3. Substrato: Access Substrate Nº Cat Tampão de lavagem: Access Wash Buffer Nº Cat (Access, Access 2, SYNCHRON LX -i) Nº Cat (UniCel DxI) 1. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para uma descrição específica da instalação, inicialização, princípios de funcionamento, características de desempenho do sistema, instruções de funcionamento, procedimentos de calibração, limitações operacionais e precauções, riscos, manutenção e solução de problemas. 2. Misturar o conteúdo das embalagens novas (vedadas) de reagentes invertendo delicadamente a embalagem várias vezes antes de carregá-la no aparelho. Não inverter embalagens abertas (perfuradas). 3. Usar vinte (20) µl de amostra para cada determinação além dos volumes mortos do recipiente da amostra e do sistema. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para o volume mínimo de amostra necessário. 4. A unidade de medida padrão do sistema para indicar os resultados das amostras é ng/ml. Para mudar essas unidades de medida para o Sistema Internacional de Unidades (unidades do SI), nmol/l, consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda. Para converter as concentrações manualmente para o Sistema Internacional, multiplicar ng/ml pelo factor de multiplicação 3,47. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre a gestão das amostras, a configuração dos testes, a solicitação de testes e a visualização dos resultados dos testes. Para todos os testes, é necessário ter uma curva de calibração activa. Para o ensaio Access Testosterone, a calibração é necessária a cada 14 dias. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre os métodos de calibração, a configuração de calibradores, a introdução de solicitações de testes dos calibradores e a visualização de dados de calibração. Os materiais de controlo de qualidade simulam as características das amostras dos doentes e são fundamentais para a monitorização do desempenho do sistema de análises imunoquímicas. Dado que as amostras podem ser analisadas a qualquer momento utilizando um formato de acesso aleatório em vez dum formato por lote, é aconselhável utilizar os materiais de controlo de qualidade a cada 24 horas 7. Utilizar materiais de controlo de qualidade disponíveis no mercado que cubram pelo menos dois níveis de analito. Seguir as instruções do fabricante para a reconstituição e o armazenamento. Cada laboratório deve estabelecer os seus próprios valores médios e limites aceitáveis para garantir um desempenho adequado dos testes. Os resultados do controlo de qualidade que não estiverem dentro dos limites aceitáveis, podem indicar resultados de testes não válidos. Examinar todos os resultados dos testes obtidos desde o último ponto de teste de controlo de qualidade aceitável para este analito. Consultar os Página 3
4 respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para informações sobre como visualizar os resultados do controlo de qualidade. Resultados Os resultados dos testes dos doentes são determinados automaticamente pelo software do sistema utilizando um modelo matemático de curva logística de quatro parâmetros ponderada (4PLC). A quantidade de analito na amostra é determinada a partir da produção de luz medida através dos dados de calibração armazenados no sistema. Os resultados dos testes dos doentes podem ser visualizados através do ecrã apropriado. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para as instruções completas sobre como visualizar os resultados das amostras. Limitações do procedimento 1. As amostras podem ser medidas com exactidão dentro do intervalo de análise compreendido entre o limite mínimo de detecção e o valor mais alto do calibrador (aproximadamente 0,1 16 ng/ml ( 0,35 55,5 nmol/l)]. Se uma amostra contém uma quantidade menor que o limite mínimo de detecção para o ensaio, registar os resultados como menores que aquele valor (por ex., < 0,1 ng/ml (< 0,35 nmol/l)]. Se uma amostra contém uma quantidade maior que o valor estabelecido do calibrador mais alto Access Testosterone Calibrator (S5), registar os resultados como maiores que aquele valor (por ex., > 16 ng/ml (> 55,5 nmol/l)]. Alternativamente, diluir um volume de amostra com um volume de calibrador Access Testosterone Calibrator S0 (zero). Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para as instruções sobre a introdução duma diluição de amostra numa solicitação de teste. O sistema mostra os resultados adaptados à diluição. 2. Nos ensaios que utilizam anticorpos murinos, podem ocorrer interferências com os anticorpos anti-rato humanos (HAMA) contidos na amostra. Os anticorpos anti-rato humanos (HAMA) podem estar presentes nas amostras de doentes submetidos a imunoterapia ou procedimentos de diagnóstico que utilizam anticorpos monoclonais 8,9 ou em indivíduos que tiveram contacto regular com animais. Além disso, outros anticorpos heterófilos, tais como os anticorpos anticabra humanos podem estar presentes nas amostras dos doentes. 3. Os resultados do Access Testosterone devem ser interpretados baseando-se no quadro clínico geral do doente, incluindo: os sintomas, a anamnese clínica, os dados de outros testes e outras informações apropriadas. Valores esperados 1. Cada laboratório deve estabelecer os seus próprios intervalos de referência para garantir uma representação adequada de populações específicas. 2. A testosterona foi medida em amostras de soro humano e plasma com heparina provenientes de homens e mulheres aparentemente sadios usando o ensaio Access Testosterone. As faixas observadas de concentrações de testosterona são mostradas abaixo para cada população representada. 3. Os valores de soro e plasma não podem ser intercambiados. Consultar a respectiva secção da tabela abaixo. 4. Demonstrou-se que o plasma EDTA fornece resultados errados. Não utilizar plasma EDTA. Tipo de amostra Grupo de referência n Idade mediana (anos) Faixa etária Concentration moyenne Intervalo de referência de 95% Soro Homens ,84 1,75 7,81 Mulheres ,29 < 0,1 0,75 Access Testosterone A 2003 Beckman Coulter, Inc. Página 4
5 Nature de l'échantillon Grupo de referência n Idade mediana (anos) Faixa etária Concentração mediana Intervalo de referência de 95% Plasma Homens ,84 1,68 7,58 (heparina) Mulheres ,41 < 0,1 0,90 Características específicas de desempenho Comparação de métodos Uma comparação de 343 valores de testosterona sérica obtidos com o ensaio Access Testosterone do sistema de imunoensaio Access e com um kit de radioimunoensaio disponível no mercado forneceu os seguintes dados estatísticos aplicando os cálculos Deming: n Intervalo de observações Intercepção Inclinação Coeficiente de correlação (r) 343 0,11 14,81 0,18 0,95 0,98 Recuperação da diluição (linearidade) Cinquenta e duas amostras de soro humano masculino com valores de testosterona de 4 a 10 ng/ml foram diluídas na proporção 1/2 no calibrador Access Testosterone Calibrator S0. As amostras puras e diluídas foram então medidas com o teste Access Testosterone. A recuperação média foi de 105% (faixa de variação = %). Algumas recuperações de diluição representativas são mostradas abaixo. Amostra Concentração pura Concentração diluída Concentration esperada Récupération (%) 1 9,94 5,26 4, ,32 4,24 4, ,00 3,66 3, ,46 2,63 2, ,55 2,27 2, ,93 2,82 2, Imprecisão Este ensaio apresenta uma imprecisão total 20% com concentrações de 0,5 ng/ml de testosterona e < 10% com concentrações de 2 a 10 ng/ml de testosterona. Um estudo realizado utilizando amostras de soro humano congeladas incluindo um total de 20 testes, 2 replicados por teste, no decorrer de 10 dias, forneceu os seguintes dados, examinados através da análise de variância (ANOVA) 10,11. Amostra Média geral (n=40) *Amostra de soro com adição de testosterona. Intra-execução (%CV) Inter-execução (%CV) Imprecisão total (%CV) 1 0,35 3,93 7,08 8,10 2 0,83 2,89 4,51 5,36 3 2,25 1,67 4,78 5,07 4 5,38 1,99 4,22 4,67 5 8,31 2,14 4,91 5,36 6* 12,88 2,71 5,65 6,26 Especificidade analítica / Interferências Amostras contendo até a 10 mg/dl (171 mmols/l) de bilirrubina, 1000 mg/dl (10 g/l) de hemoglobina, o equivalente de 1800 mg/dl (20,32 mmol/l) de triglicerídeos (Trioleína) ou 5,5 8,5 g/dl de proteína total (albumina sérica humana) não afectam de modo significativo a Página 5
6 concentração de testosterona total testada.a tabela seguinte descreve a reactividade cruzada do ensaio com substâncias com estrutura semelhante a do testosterona. A tabela seguinte descreve a reactividade cruzada do ensaio com substâncias com estrutura semelhante a do testosterona. Foram adicionadas substâncias com reactividade cruzada potencial numa amostra de testosterona de aproximadamente 1,5 ng/ml. Substância Compostos presentes no soro humano Analito adicionado Reatividade cruzada (%) Testosterona-glucoronido 100 0,4 Sulfato de testosterona 100 0,3 5-alfa-DHT 100 2,0 Androstanediol 100 0,4 Androstenediol 100 0,6 Androstenediona 100 0,7 DHEA ,0 Sulfato de DHEA ,0 Androsterona 100 0,2 Corticosterona ,0 Cortisol ,0 Estradiol 100 0,0 Sulfato de Estradiol 100 0,0 Estriol 100 0,2 Estrona 100 0,4 Estrona-glucoronido 100 0,0 Sulfato de estrona 100 0,0 Progesterona 100 0,4 11-Deoxicortisol ,0 17-alfa-hidroxiprogesterona 100 0,1 19-hidroxitestosterona 100 0,5 2-hidroxiestradiol 100 0,0 Contraceptivos Etinilestradiol 100 0,3 Mestranol 100 0,0 Noretindrona 100 0,05 Norgestrel 100 0,3 Fármacos Danazol 100 0,3 Mesterolona 100 1,5 Dexametasona ,0 19-Nortestosterona 100 1,6 Etiniltestosterona 100 0,07 Compostos estruturalmente relacionados 19-Acetato de noretisterona 100 0,02 11B-hidroxitestosterona 100 4,1 11-Cetotestosterona 100 6,7 17-alfa-metiltestosterona 100 0,2 Sensibilidade analítica O nível mínimo detectável de testosterona distinguível de zero (calibrador Access Testosterone Calibrator S0) com 95% de confiança é 0,1 ng/ml (0,35 nmol/l). Este valor é determinado através do processamento duma curva de calibração completa de seis pontos, controlos e 10 Access Testosterone A 2003 Beckman Coulter, Inc. Página 6
7 replicados do calibrador zero em testes múltiplos. O valor de sensibilidade analítica é calculado a partir da curva no ponto que representa dois desvios padrão do sinal do calibrador zero. Página 7
8 TM TESTOSTERONE CALIBRATORS REF Finalidade do produto Resumo e explicação do produto Padronização Informações sobre o produto Os calibradores Access Testosterone Calibrators são utilizados para calibrar o ensaio Access Testosterone para a determinação quantitativa dos níveis de testosterona no soro e no plasma humanos utilizando os Sistemas de Imunoensaio Access. A calibração dum ensaio quantitativo é o processo pelo qual as amostras com concentrações conhecidas de analito (por ex., calibradores de ensaio) são testadas como amostras de doentes a fim de medir a sua resposta. A relação matemática entre as respostas medidas e as concentrações conhecidas de analito define a curva de calibração. Esta relação matemática, ou curva de calibração, é utilizada para converter as medições URL (Unidade Relativa de Luz) de amostras de doentes em concentrações quantitativas específicas de analito. A substância a ser medida (analito) nos calibradores Access Testosterone Calibrators tem como referência material de referência da Farmacopeia Americana (USP). O processo de padronização baseia-se na norma pren ISO Os valores atribuídos foram estabelecidos usando amostras representativas deste lote de calibrador e são específicos para as metodologias de ensaio dos reagentes Access. Os valores atribuídos por outras metodologias podem ser diferentes. Tais diferenças, se presentes, podem ser causadas por desvios entre os métodos. Access Testosterone Calibrators Nº Cat : S0 S5, 2,5 ml/recipiente Fornecidos prontos para utilizar. Armazenar em posição vertical e refrigerar a 2 10 C. Misturar o conteúdo invertendo delicadamente antes da utilização. Evitar a formação de bolhas. Estável até ao vencimento do prazo de validade marcado na etiqueta quando armazenado a 2 10 C. Uma possível degradação pode ser indicada por valores de controlo fora do intervalo de variação. Consultar o cartão de calibração ou as etiquetas dos recipientes para as concentrações exactas.. S0: Matriz de albumina sérica bovina (BSA) tamponada, 0,5% de ProClin** 300 e < 0,1% de azida sódica. S1, S2,S3, S4, S5: Cartão de calibração Matriz de BSA com 0,5% de ProClin 300 e < 0,1% de azida sódica e testosterona a 0,5; 1,5; 4,0; 8,0 ou 16,0 ng/ml (1,7; 5,2; 13,9; 27,8 e 55,5 nmol/l). 1 Avisos e precauções Para utilização em diagnóstico in vitro. As amostras dos doentes e os produtos hemoderivados podem ser analisados rotineiramente com riscos mínimos utilizando o procedimento descrito. Contudo, deve Página 8
9 manusear estes produtos como potencialmente infecciosos de acordo com as precauções gerais e os métodos adequados de laboratórios clínicos, independentemente da origem, tratamento ou certificação anterior. Usar um desinfectante apropriado para a descontaminação. Armazenar e eliminar estes materiais e os respectivos contentores segundo o regulamento e as normas locais. A azida sódica pode reagir com as canalizações de chumbo ou cobre formando azidas metálicas altamente explosivas. Portanto, deixar fluir água em abundância nos tubos durante a eliminação de líquidos para prevenir a acumulação de azidas 4. Xi. Irritante: ProClin 300 0,5%. R 43: Pode causar sensibilização em contacto com a pele. S 28-37: Após contacto com a pele, lavar imediata e abundantemente com água e sabão. Usar luvas adequadas. A Folha dos Dados de Segurança do Material (MSDS) está disponível a pedido. Procedimento Detalhes da calibração Limitações do procedimento Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre os métodos de calibração, a configuração de calibradores, a introdução de solicitações de testes dos calibradores e a visualização de dados de calibração. Os calibradores Access Testosterone Calibrators são fornecidos em seis níveis - zero e aproximadamente 0,5; 1,5; 4,0; 8,0 e 16,0 ng/ml. Os dados de calibração do ensaio são válidos por 14 dias. Os calibradores são analisados em duplicado. Se forem notados sinais de contaminação microbiana ou excesso de turvação num reagente, rejeitar o recipiente. Página 9
10 Referências 1 Wilson, JD, Foster, DW (Eds) Williams Textbook of Endocrinology, 8th Edition, W.B. Saunders, Philadelphia, Pennsylvania 19106, 1992, page Brutis, CA, Ashwood, ER (Eds) Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 4th Edition W.B. Saunders, Philadelphia, Pennsylvania 19106, 1996, page Cowan BD, and Seifer, DB (Eds) Clinical Reproductive Medicine, Lippincott-Raven, Philadelphia, Pennsylvania 19106, page Manual Guide Safety Management, No. CDC-22, Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts. April 30, Atlanta GA: Centers for Disease Control. 5 Approved Standard Procedures for the Collection of Diagnostic Blood Specimens by Venipuncture H3-A National Committee for Clinical Laboratory Standards, 4th edition. 6 Approved Guideline Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens, H18-A National Committee for Clinical Standards. 7 Cembrowski GS, Carey RN. Laboratory Quality Management: QC & QA. ASCP Press, Chicago, IL, Kricka, L. Interferences in Immunoassays Still a Threat. Clin Chem 2000; 46: Bjerner J, et al. Immunometric Assay Interference: Incidence and Prevention. Clin Chem 2002; 48: Approved Guideline Evaluation of precision performance of clinical chemistry devices, EP5-A National Committee for Clinical Laboratory Standards, 19: No Krouwer, JS, Rabinowitz, R. How to improve estimates of imprecision. Clinical Chemistry 1984; 30: Access, SYNCHRON LX e UniCel são marcas registadas da Beckman Coulter, Inc. *Lumi-Phos é uma marca registrada da Lumigen, Inc. **ProClin é uma marca registrada da Companhia Rohm e Haas ou de suas subsidiárias e filiais. Fabricado por: Beckman Coulter, Inc N. Harbor Blvd. Fullerton, CA U.S.A. Beckman Coulter Ireland Inc. Mervue Business Park, Mervue, Galway, Ireland Impresso nos Estados Unidos da América Fabricado nos Estados Unidos da América Editado em Junho de Página 10
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