LABORATÓRIO ANÁLISE. PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO. ANALITICO
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- Evelyn Bayer Gil
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1 Edição Análise Crítica Aprovação Data / / Data: / / Data: / / ASS.: ASS.: ASS.: NOME: Rozileide Agostinho NOME:Rozileide Agostinho NOME: Marcelo Villar FUNÇÃO/CARGO: Controle de Documentos e Dados FUNÇÃO/CARGO: Gerência da Qualidade FUNÇÃO/CARGO: Diretor Conselho É proibida a reprodução parcial ou total deste documento. Cópias extras, quando necessárias, devem ser solicitadas ao Setor da Qualidade. Código: Revisão: 04 Página 1 de 6
2 1.0 Principio: Teste imunocromatográfico rápido para determinação qualitativa de anticorpos IgM e IgG para o vírus da Dengue em amostras de sangue total, soro ou plasma. 2.0 Aplicação Clinica: O Dengue IgG/IgM é um ensaio imunocromatográfico de fase sólida para detecção rápida, qualitativa e diferencial de anticorpos IgG e IgM para o vírus da dengue em amostras de soro, plasma e sangue total humano. Este teste destina-se ao uso profissional como um recurso do diagnóstico presutivo entre a infecção primária e secundária da dengue. 3.0 Amostra: 3.1 Preparo do paciente: NA 3.2 Materiais necessários: 1- Cronometro 2- Luvas de procedimento 3- Micropipeta 4- Dispositivo teste 3.3 Conservação da amostra: Soro. Coletar 5ml do sangue por punção arterial ou venosa em tubo de coleta não contendo anticoagulante. Deixar em repouso por 30 minutos para ocorrer a coagulação e então centrifugar a amostra para obter somente o soro. Caso o soro não seja testado imediatamente, deve-se refrigerar a amostra sob temperatura entre 2-8 graus centígrados. Para períodos de armazenamento maiores que duas semanas, o congelamento é recomendado. As amostras devem ser trazidas a temperatura ambiente entre 15 a 30 graus centigrados antes do uso. As amostras de soro que apresentarem qualquer precipitação devem render resultados inconsistentes. Tais amostras devem ser clarificadas antes do ensaio. 4.0 Insumos: Materiais contidos no kit e cronometro. 5.0 Equipamentos: N.A. 6.0 Procedimento detalhado: Código: Revisão: 04 Página 2 de 6
3 Remover o dispositivo teste da embalagem de alumínio e colocá-lo em uma superfícies plana e seca Com a pipeta capilar que acompanha o teste ou com uma micropipeta, adicionar 5 ul de soro a cavidade quadrada do cassete identificada com a letra S. no caso de utilizar a pipeta capilar ter o cuidado de não ultrapassar a linha indicativa do volume de 5 ul. Adicionar 3-4 gotas de tampão diluente a cavidade redonda do cassete. Interpretar os resultados do teste em 15 a 20 minutos. Não interpretar após 20 minutos. 7.0 Cálculo: N.A. 8.0 Controle de Qualidade: 8.1 Controle Interno: O Controle Comercial é realizado quando o exame for incluso na rotina do dia. O Controle será realizado no inicio da rotina, com a analise da tira reagente e os resultados encontrados são registrado em planilha controle do POA.DCO.04. Apresentação Soro humano liofilizado. Esse material deve ser ensaiado da mesma maneira que os soros dos pacientes e conforme procedimentos utilizados no laboratório. Estabilidade e Armazenagem O material deve ser armazenado a temperaturas inferiores a 0 C. Durante o transporte este material mantém suas características a temperatura máxima de 30 C por 5 dias. O soro reconstituído deve ser utilizado imediatamente ou armazenado entre 2 e 8 C por até 3 dias para maximizar sua estabilidade. Utilidade A utilização frequente de controle interno comercial é regulamentada pela ANVISA RDC 302/2005(1). Seu uso permite monitorar o desempenho do processo analítico e confere maior confiabilidade aos resultados obtidos na rotina. O controle interno universal permite monitorar: - a reprodutibilidade analítica (variação diária); - a sensibilidade dos reagentes; - a ocorrência de falso-positivo e falso-negativo; - o desempenho do operador; - o desempenho dos lotes de reagentes; - equiparação entre sistemas analíticos. Materiais de controle pouco reativos podem fornecer informações valiosas relativas à capacidade analítica do laboratório e às variações entre lotes de reagentes que possam afetar a sensibilidade do ensaio. Código: Revisão: 04 Página 3 de 6
4 Instruções de Uso 1. Deixar à temperatura ambiente (entre 15 e 30 C) por 20 minutos. 2. Reconstituir adicionando água reagente (CLSI) conforme volume indicado no rótulo, utilizando pipeta calibrada(6). 3. Deixar em repouso por 20 minutos e, em seguida, homogeneizar suavemente até dissolução completa. 4. Realizar o ensaio de forma rotineira e conforme procedimento de controle do laboratório. Para reconstituição de liofilizados, retirar a tampa de borracha com muito cuidado, para que o material à ela aderido não seja perdido. Ao retirar a tampa, deve-se colocá-la virada para cima na bancada. Após acrescentar a água para dissolução no frasco, recolocar a tampa com o mesmo cuidado, para que nenhuma porção do produto liofilizado seja perdida. Se um controle apresentar resultado superior à faixa de detecção é necessário realizar diluições até chegar ao resultado real, exceto se contra-indicado nas instruções (bula) do reagente/equipamento. Controle Externo: Trimestralmente é realizado o Controle Comercial, com esse sistema de controle em que o resultado de cada teste do laboratório participante do programa é comparado com a média de consenso do seu grupo. Portanto, consiste na comparação da exatidão dos exames de um laboratório com a de outros participantes. Desta maneira, o Controle Externo da Qualidade visa padronizar os resultados de laboratórios diferentes através da comparação de análises de alíquotas do mesmo material. Por último, é feita uma avaliação dos resultados de cada laboratório e caso tenha inadequação dos analitos avaliados, é realizada uma investigação de inadequação e após detectar o erro realiza-se ação corretiva. Todas essas informações são registradas em planilha controle anexo 11 do POA.DCO Resultados: Teste positivo para IgG: Formação uma linha vermelha na região teste (T1) e uma linha azul na região do controle (C) nos primeiros 15 a 20 minutos. Teste positivo para IgM: Formação uma linha vermelha na região teste (T2) e uma linha azul na região do controle (C) nos primeiros 15 a 20 minutos. Teste positivo IgM e IgG: Formação duas linhas vermelhas na região teste (T1 e T2) e uma linha azul na região do controle (C) nos primeiros 15 a 20 minutos. Teste negativo: Formação de uma linha azul na região controle (C) e ausência completa de linha vermelha nas regiões testes (T1 e T2). Resultado inválido: Ausência completa de linha na região controle (C) com ou sem linha vermelha nas regiões testes (T1 e T2). Testar a amostra novamente. Notas: 1. Resultados negativos só devem ser lidos em 10 minutos, e não antes ou depois desse tempo. 2. A linha na região controle pode aparecer antes dos 10 minutos de incubação do teste, e isso não significa que resultados negativos podem ser interpretados antes do tempo. 3. Os resultados não devem ser interpretados após esse 20 minutos para evitar resultados incorretos. 9.1 Interpretações dos resultados Código: Revisão: 04 Página 4 de 6
5 Não reagente: quando aparecer somente uma linha colorida na janela de resultados, linha controle C. Essa linha devera aparecer em todos os testes. Reagente: IgM: quando as linhas controle C e teste M forem visíveis na janela de resultados. Nota: a intensidade da cor das linhas controle e linha teste podem ser diferentes, ou seja, a linha controle poderá ser mais fraca que a linha teste M ou vice-versa. Considerar o resultado IgM REAGENTE em qualquer situação. Reagente: IgG: quando a linha controle e teste G forem visíveis na janela de resultados. Nota: a intensidade da cor das linhas controle e linha teste podem ser diferentes, ou seja, a linha controle poderá ser mais fraca que a linha teste G ou vice-versa. Considerar o resultado IgG REAGENTE em qualquer situação. Obs: descartar o teste em caso de ausência da linha C Desempenho do teste: 10.1 Sensibilidade: A sensibilidade é de 100% Fontes potenciais de variabilidade e interferentes: Reatividade cruzada com outros vírus do grupo flavivírus pode ser comum, segundo referências bibliográficas, porém não foram evidenciadas nos testes de desenvolvimento do produto Referências Bibliográficas: Bula do kit 13.0 Natureza das Alterações: NATUREZA DAS ALTERAÇÕES REVISÃO NATUREZA DAS ALTERAÇÕES 01 Alteração da responsabilidade na aprovação do documento. 02 Adequação ao PALC 03 Inclusão dos procedimentos detalhados do PCIQ e PAEQ 04 Reavaliação do documento sem alteração. Código: Revisão: 04 Página 5 de 6
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