Zygomycetes. Zygomycetos mais comuns MUCOR FUNGOS DE IMPORTÂNCIA MÉDICA RHIZOMUCOR RHIZOPUS

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1 FUNGOS DE IMPORTÂNCIA MÉDICA Zygomycetes Encontrados no ambiente: solo, esterco, plantas Característica hifas largas (6-15µ), não pigmentados usualmente sem septos, mas septos podem ser observados subjacentes a esporangióforos, esporângio e outras localizações em culturas velhas Cresce rapidamente em ágar ASD: colônias branco-acizentada, marrom, cinza-marrom com aspecto de algodão doce Gêneros distinguidos pela presença ou ausência de rizóides e sua localização, presença ou ausência de esporangiosporos ramificados, forma da columela e apófise. Dra. Marilene Rodrigues Chang Mestre em Análises Clínicas, área de Micologia, FCF/USP-SP Doutora em Ciências, área de Bacteriologia, IOC/FIOCRUZ- RJ Zygomycetos mais comuns Mucor não tem rizóides e os esporangiósporos tendem a ser ramificados MUCOR Rhizopus apresentam grandes rizóides no estolão imediatamente adjacente ao esporangióforo Rhizomucor relembra o Mucor, mas tem pouco rizóides; são termófilos, crescem à temperatura > 60ºC Absídia - Crescimento rápido fio de lã grosso ou algodão doce, aparência microscópica ao Rhizopus, mas os rizóides são internodais. RHIZOMUCOR RHIZOPUS Normalmente contaminante. Colônias de crescimento rápido, invadindo toda a placa de Petri. Inicialmente branco, ficando de amarelo a marrom claro com o tempo. O reverso é branco Os micélios largos, asseptados são marcados por numerosos estolões que conectam esporangióforos longos. Esporangióforos simples e/ou ramificados, de hialino a marrom claro elevam-se nos nós sobre os rizóides No ápice dos esporangióforos estão esporângios escuros globosos com columela e inúmeros esporangiósporos endógenos Normalmente contaminante, mas pode causar doença invasiva. Colônias de crescimento rápido e lembram algodão doce de cor branco cinza amarelado, que escurece com o passar do tempo. o reverso é de coloração clara ou branca. Hifas largas ~ 6-15µ Sem estolões e rizóides. Os esporangióforos são longos, freqüentemente ramificados e contêm esporângios grandes e arredondados (50-300µ) As colônias são fofas, de coloração cinza que se torna marrom com o tempo. O reverso é branco. A morfologia microscópica é intermediária entre Rhizopus e Mucor; Apresentam rizóides pouco desenvolvidos Os esporângios são globosos e escuros e variam de 40100µ; São termófílicos, com temp máx de 50 a 58ºC Rhizomucor em cultura. Note rizóide único, rudimentar que surge próximo, mas não adjacente ao esporangióforo 1

2 Crescimento rápido flocoso a cotonoso de branco cinza a cinza oliváceo. Reverso de mesma tonalidade. Micélio cenocítico hialino Dos estolões elevam-se esporangióforos simples e/ou ramificados. Rizóides são encontrados nos nós dos estolões Esporângios piriformes, columela e esporangióforo globosos a ovais Espécie patogênica: A. corymbifera e A. famosa ABSIDIA Hialohifomicetos Grupo grande e heterogêneo de fungos caracterizados por hifas hialinas septadas e estreitas HIALOHIFOMICETOS Considerações Gerais Hifomicetos Hialinos Três grandes grupos podem ajudar a organizar esta categoria Conídios formados em cadeia Ex. Aspergillus, Penicillium, Paecilomyces, Scopulariopsis Conídios formados em agrupamentos. Ex. Acremonium, Fusarium, Gliocladium, Trichoderma Conídios isolados Ex.Beauveria, Pseudallescheria boydii/scedosporium apiospermum As hifas são hialinas e a cor da colônia varia muito, mas o reverso é claro ou branco. Acremonium Aspergillus Scedosporium Hifas regulares, de 3-6µ, com paredes paralelas e septadas As hifas são hialinas (sem cor) quando não coradas Fig 1 Fig 2 mostra coloração especial pela prata Aspergillus fumigatus Aspergillus flavus Causa mais comum de aspergillose Colônia granular a cotonosa, aveludada ou pulvurulenta; Branca no início e verde acinzentada ou marrom esverdeado com fina margem branca. O reverso é branco ou bege. Diferente de outras espécies, A. fumigatus cresce a 45 C. Conidióforos longos ( µ) vesículas em forma de clava que medem de µ de diâmetro Fiálides uniseriadas e cobrem a vesícula apenas na metade distal Os conídios se agrupam em cadeias e tendem tomar todo o eixo central Conidio Fiálide Vesícula Conidióforo A.fumigatus A. flavus; Fiálides circundam toda a vesícula. Usualmente contaminante, mas eventualmente causa doença Colônias granular, aveludada ou lanosa e de coloração amarela marrom amarelada; o reverso é dourado ou marrom avermelhado Os conidióforos são longos ( µ) e freqüentemente rugosos logo abaixo da vesícula globosa (25-45 µ) As fiálides são biseriadas ou algumas vezes uniseriadas Os conídios são arredondados, liso ou fracamente rugoso e formam longas cadeias 2

3 Aspergillus niger Aspergillus terreus Usualmente contaminante, eventualmente causa doença colônias inicialmente branca a amarelo claro mas rapidamente forma conídios pretos; o reverso usualmente é castanho ou cinza amarelado A conidiação é tanta que os conidios escondem a vesícula Fiálides biseriadas Conidio são esféricos, 3-5 µ, e rugosos quando maduros Usualmente contaminante, eventualmente causa doença As colônias podem ser aveludada, marrom semelhante a couro ou marrom alaranjado e freqüentemente apresenta sulco radiais; o reverso é branco a marrom As vesículas são pequenas (10-16 µ) Conídios lisos e pequenos formam longas cadeias A. niger em cultura. Os conídios circundam a vesícula escura A terreus. Fiálides biseriadas, com aparência de vassoura Aspergillus nidulus Aspergillus glaucus Usualmente contaminante, eventualmente causa doença Colônias aveludadas verde marrom a amarelo; o reverso é avermelhado ou marrom avermelhado Podem produzir ascósporos dentro de um cleistotécio (marrom vermelhado de µ de diâmetro) Conidióforo: µ de comp e 3-6 µ de largura Fiálides na porção distal da vesícula Fiálides biseriadas Conídios esféricos, 3-4 µ A glaucus. Note a similaridade entre A. glaucus e A. niger; os conidios de A. niger tendem a ser maiores Usualmente contaminante, eventualmente causa doença Produzem ascósporos (sexualmente) dentro de cleistotécio (esféricos, de parede fina e de coloração amarela medindo de µ de diâmetro) Conidióforo µ comprimento, 7-12 µ largura Vesícula esférica, µ Conídios surgem ao redor da vesícula Uniseriada Conidia "subgloboso",5 µ Aspergillus clavatus Usualmente contaminante, eventualmente causa doença Colônias azul esverdeada; reverso branco que se torna marrom ou escuro com a idade Vesículas grandes, na forma de clava Uniseriadas Hifomicetos Hialinos Formados de Conídios Agrupados Aspergillus clavatus. Note vesícula em forma de clava 3

4 Acremonium Acremonium em microcultivo. Usualmente contaminante, eventualmente causa micetoma, infecção de córnea, onicomicoses e mais raramente outras doenças Colônias lisa ~ leveduras de cor pastel ou pode ser ~ feltro, pregueada e compacta. Reverso incolor, amarelo ou rosa acinzentado Hifas extremamente delicadas e septadas Fiálides retíneas, delicadas, não ramificadas que surgem em ângulo reto das hifas Os conídios são alongados ~ a grãos de arroz e se dispõe agrupados Os conídios se desprendem facilmente. Fusarium Usualmente contaminante, pode causar infecções de pele, ocular e sistêmica, em pacientes imunocomprometido Colônias de crescimento rápido, de cor e textura variável, freqüentemente granular ou fofa, cor rosa, púrpura ou lavanda. Inicialmente pode aparecer de cor branca, escurecendo com a maturidade. O reverso é de cor palha, mas pode escurecer com a idade Hifas septadas Dois tipos de esporulação: Macroconídios grande em forma de foice (11-70 µ X 3-8 µ) que surgem de fiálides originadas em conidióforos ramificados ou não. Conidióforo contendo microconídios de um a dois células que lembram Acremonium. Clamidosporos podem estar presentes Trichoderma Usualmente contaminante, eventualmente causa doença em pacientes imunocomprometido Colônias no ágar sabouraud são brancas e fofas quando jovens, mas se tornam verde com a maturidade As fiálides se parecem com as do Paecilomyces Os conídio surgem isolados ou agrupados no topo das fiálides e têm cerca de 3µ de diâmetro Scedosporium apiospermum Principal causa de micetoma por fungos na América do Norte; Afeta mãos e pés, mas pode causar bola fúngica pulmonar e infecções em outros sítios Agente de Feohifomicose Atualmente, importante fungo oportunista Colônias de crescimento rápido, cotonosa, branco acinzentado a marrom escuro; o reverso inicialmente é branco, mas torna-se escuro com o tempo Conidióforos hialinos longos ou curtos Conidio unicelular isolados Cresce em meios contendo cicloheximida Pode ser confundido com a fase filamentosa do Blastomyces dermatitidis HIFOMICETOS HIALINOS QUE FORMAM CONIDIOS SIMPLES Pseudallescheria boydii Causa micetoma (maduromicose) Colônias crescem moderadamente rápido, branco cotonosas, escurece com a idade; o reverso inicialmente é branco e posteriormente cinza ou preto Usualmente causam lesões a tumor que drenam pus granuloso O crescimento é inibido por cicloheximida Forma cleistotécio grande de cor marrom que varia em diâmetro ( µ) e libera ascósporos elípticos O ágar fubá ou batata é útil para induzir o estágio sexual do fungo 4

5 Chrysosporium Sepedonium Chrysosporium em microcultivo. As colônias crescem moderadamente rápido e variam na aparência Usualmente contaminante, mas pode causar onicomicose Hifas septadas 1-2 µ Conídios 2-10 µ Conídios isolados ou em cadeias curtas Lembra Blastomyces dermatitidis Sepedonium em microcultivo Colônias flutuantes, inicialmente branca que se torna amarela com a idade; o reverso é branco Geralmente considerado contaminante Pode se parecer com Histoplasma, mas sem microconídios e não é dimórfico Macroconídios grandes, esféricos espiculados pode ser acompanhado por conídios menores, ovais, surgem isolados ou de conidióforos curtos, Os conidióforos podem ser curtos ou ramificados As hifas são septadas FUNGOS DEMÁCIOS Grupo grande e heterogêneo caracterizado por colônias escuras e elementos fúngicos pigmentados no exame microscópico NOMENCLATURA E DOENÇAS Phaeohyphomycoses são entidades clínicas definidas pela presença de hifas pigmentadas, pseudohifas, ou células leveduriformes em tecidos; Chromoblastomycoses também conhecida como cromomicose. São infecções crônicas da pele e tecido subcutâneo desenvolvida após traumatismo por fungos demácios ; Micetomas (micetomas eumicóticos) são infecções crônicas, progressivas localizada na pele, tecido subcutâneo, músculo ou ósseo que são causados por fungos hialinos ou demácios; observa-se a presença de grãos parasitários, formados filamentos micelianos no tecido com formação de abscesso Fungos Demácios ALTERNARIA Hifas septadas, de coloração castanha a marrom, 3-6 µ, de paredes paralelas com ramificação irregular No microcultivo podem ser observados Macroconídia divididos por septo longitudinal e transversal, macroconídio divididos apenas por septo transversal microconídio Usualmente contaminante, mas pode causar feohifomicose Colônias de crescimento rápido, lisas ou cotonosas; reverso preto. Superfície branco acinzentada que se torna preto esverdeado ou marrom com bordas claras. Conídios isolados ou em cadeias e são divididos por septos longitudinais e transversais; 5

6 Ulocladium Usualmente contaminante. Colônias de crescimento rápido, lisas ou cotonosas; de cor marrom a preta e reverso preto Os conídios são + esféricos do que a Alternaria, não formam cadeias e nascem de conidióforos curtos Fungos Demácios com Macroconídos Septados Transversalmente Ulocladium em microcultivo. Enquanto as hifas são coradas com lactofenol azul algodão. Os macroconidios resistem e permanecem escuros. Curvularia Pode causar sinusite e ceratite, endocardite, infecção pulmonar e feohifomicose subcutânea mas podem ser contaminantes Colônias verde escuras a marrom ou preta; superfície lisa e acinzentada. O reverso é escuro. Os macroconídios são encurvados e separados por septos transversais Fungos Demácios com Microconídios Curvularia em microcultivo. CLADOSPORIUM Phialophora verrucosa Podem causar infecções cutâneas, subcutâneas e oculares, mas podem ser contaminantes Anterirmente Cladosporium carrionii, atualmente é chamado de Cladophialophora carrionii As colônias são escuras: coloração cinza aveludado ou verde acinzenado ou marrom púpura com o reverso preto A conidição do tipo Cladosporium exibe hifas ramificadas com longas cadeia de conídios elípticos Causa cromoblastomicose, feohifomicose, ou micetoma As colonias são de crescimento lento, cinza escuro ou preto e aspecto aveludado As fiálides têm o aspecto de uma jarra de flores e agrupa no ápice conídios esféricos e hialinos Cladosporium em microcultivo 6

7 Fonsecaea pedrosoi Causa cromoblastomicose e feohifomicose Colônias de crescimento lento, marrom escuro, ou preto e pode ser coberta por um micélio aveludado de cor prata. O reverso é preto. Conidióforos bege a marrom, erecto, pleomórficos com conidiação variável: tipo cladosporium e tipo phialophora Wangiella dermatitidis Causa feohifomicose envolvendo pele, subcutâneo, olhos, cérebro e articulações Crescimento lento. As colônias jovens lembram leveduras pretas, mas eventualmente mostram delicado micélio aveludado aéreo. O reverso é branco As fiálides não têm colarete Os conídios são unicelulares. Hortae werneckii Outros Fungos Demácios Anteriormente conhecida como Exophiala werneckii e Phaeoannelomyces werneckii Colônias de crescimento lento. Inicialmente bege semelhante a leveduras e depois preto esverdeado. O reverso é preto Pode causar Tinea nigra, lesão superficial na palma da mão Forma leveduras com 2 células Em colônias velhas podem ser observadas hifas de paredes grossas Exophiala jeanselmei Chaetomium spp Amplamente distribuindo: solo, planta, água e madeira em decomposição Sapróbio da natureza Agente causal de várias infecções humanas: Micetoma, cistos subcutâneas, endocardite e infecções disseminadas Cultura inicialmente úmida de cor esverdeada a preta levedura Em cultura jovem, células elipticas compostas de duas células, com extremidade aredondada Fungo filamentoso oportunista. Usualmente contaminatne. Colônias jovens de cor branca a bege, cotonosa que se torna bege acinzentado ou verde acinzentado com o tempo Ascósporos de células simples, marrom esverdeado O peritécio é arredondado com apêndices em forma de seta, de coloração marrom esverdeado e que medem de µ Os ascos possuem a forma de clava e contêm de 4 a 8 esporos O ascos se desprendem rapidamente após a abertura do ostíolo do peritécio, mas esporos semelhantes a limão de cor verde oliva permanecem Chaetomium em microcultivo. Note peritécio com filamentos irregulares, marrom em forma de seta 7

8 DERMATÓFITOS DERMATÓFITOS Fungos que infectam o estrato córneo, cabelo e unhas. Fungos antropofilicos, zoofilicos e geofilicos De 30 espécies conhecidas, que causam infecções de pele, cabelo e unha, as mais freqüentes são: Epidermophyton floccosum, Microsporum canis, M. gypseum, Trichophyton mentagrophytes, T. rubrum, T. tonsurans. Todas as espécies produzem delicadas hifas hialinas Dermatófitos elaboram enzimas que digerem a queratina Identificação Gênero Microsporum Gde quantidade de macroconídios, multiseptados, de paredes grossas Cilindros ou fusiformes e são sustentados por conidióforos curtos. Microconídios pouco numerosos e não possuem características morfológicas específicas Gênero Trichophyton Escassos macroconídios, em forma de bastão e possuem uma parede lisa e fina. Os microconídios são numerosos e são originados lateralmente ao longo da hifa ou em grupos. Gênero Epidermophyton Macroconídios em forma de clava, de paredes lisas, divididas em 2 a 5 septos transversais Não produzem microconídios. Feita por meio de caracteres microscópicos e macroscópicos As características macroscópicas variam quanto: coloração: do anverso e do reverso da cultura, à morfologia: filamentosa, pulverulenta, ou leveduriforme, aos aspectos macroscópicos: por vezes comparados com acidentes geográficos (crateriforme, cerebriforme, plana, elevada, etc.). Identificação Microsporum canis Além dos macroconídios e microconídios, uma grande variedade de estruturas vegetativas podem ser produzidas, como: hifas em espiral (T. mentagrophytes), hifas em raquete (T. tonsurans) e candelabros fávicos (T. schoenleinii). Colônias de crescimento moderado. Podem ser lisas ou algodoadas de coloração branca cotonosa e amarela na periferia. O reverso pode tornar-se marrom amarelado com a idade Os macroconídios de aspecto rugoso e forma de barril possuem de 6 a mais células 8

9 Microsporum gypseum Crescimento moderado de coloração castanha a marrom canela, com textura granular devido a esporulação Trichophyton verrucosum Numerosos macroconidios com ponta aredondada e de 6 ou menos células Colônias crescem mais lentamente, podem ser de coloração creme, bege ou ocre; pregueada; glabrosa ou aveludada. O reverso pode ser incolor ou amarelo. Os microconídios são pouco comuns, piriforme ou subglobosos Macroconidios são raros, em forma de rabo de rato Numerosos clamidósporos, simétricos e em cadeia podem ser observados Microsporum gypseum em microcultivo. Trichophyton rubrum Trichophyton tonsurans Colônias crescem mais lentamente e apresentam coloração, textura e forma variável ; normalmente produz um tom de amarelo amarronzado. Microconídios alongados em forma de clava; alguns são ligados a conidióforos por uma haste curta Macroconidios são raros mas podem ocorrer Clamidoconidios são freqüentes em culturas velhas T. rubrum X T. mentagrophytes Testes bioquímicos simples T. mentagrophytes cresce bem em Dermatophyte milk agar (contento púrpura de bromocresol), T. rubrum tem crescimento restrito. T. mentagrophytes é urease positivo dentro de 7 dias enquanto T. rubrum é urease negativo. Colônia branca com vermelho vinho no reverso; pigmento vermelho se difunde no meio. Microconídios piriformes são encontrados ao longo de hifas não ramificadas Macroconídios são raros ou ausentes; tem a parede fina, cilindrica ou em forma de clava; podem se forma diretamente do fim de hifas grossas Artroconídios podem estar presentes Trichophyton rubrum microcultivo. Microconidia piriformes são abundantes. Trichophyton mentagrophytes Colônia de aparência variável; reverso pode ser bege, marrom, incolor, amarelo ou vermelho Microconídios globoboso a piriforme são encontrados agrupados ou isolados ao longo da hifa Macroconídios em forma de clava podem estar presentes Hifas helicoidais pode estar presentes 9

10 T. tonsurans Perfurações no pelo por T. mentagrophytes Responsável por Tinea capitis e tínea corporis Morfologia colonial: Textura (cotonosa, aveludada, granular, glabra), Topografia (rugosa, lisa, umbilicada) Cor ( verso e reverso) T. violaceum Afeta couro cabeludo e corpo. Raramente afeta pés e unhas Epidermophyton floccosum Colônias verde amarelada, hifas aéreas curtas e aparência de camurça Microconídios ausentes Macroconidio em forma de clava com parede lisa clavate, e que contem de 2 a 6 células Clamidoconídio pode estar presente em culturas velhas FUNGOS DIMÓRFICOS FUNGOS DIMÓRFICOS Sporotrix schenckii Paracoccidioides brasiliensis Histoplasma capsulatum Blastomyces dermatitidis Coccidioide immitis Penicillium marneffei Crescem lentamente Forma filamentosa a Levedura a C 10

11 Sporotrix schenckii Agente de esporotricose Habitat: solo e vegetais Via de administração: implantação traumática, inalação de esporos Distribuição: regiões de clima temperado e úmido Epidemiologia P. brasiliensis Microscopia das formas teciduais (T) e de culturas (C) T: Células leveduriformes globosas, 3-40 µm Ø, parede celular espessa, bi-refringente, brotamento múltiplo conectados à célula-mãe por uma ponte estreita. KOH 10% C: 25 C, Sabouraud/Mycosel micélio hialino finos; 37 C, Fava Netto, BHI células leveduriformes globosas, caracteristicamente multibrotantes = dimorfismo. Mais freqüente entre indivíduos que manipulam o solo ou plantas, tais como jardineiros, floristas e paisagistas. Doença ocupacional Histoplasma capsulatum Histoplasma capsulatum Levedura muito pequena, unicelular Tamanho uniforme que varia de 3 a 5 µ Extracelular ou dentro de macrófagos Colônias filamentosas (25-30 ) branca inicialmente que se torna bege com o passar do tempo no ASD. Branca e úmida no ágra BHI; Colônias de crescimento lento Cyclohexamide inibe o crescimento da forma leveduriforme Macroconidios espiculados e microconídios são observados Sepedonium spp deve ser considerado Exame Direto: Giemsa Blastomyces dermatitidis O fungo usualmente ocorre como levedura globosa de paredes espessas e refringentes que mede de 8 a 15 µm Ø, Cada blastósporo está ligado à célula mãe por uma base larga. Pode ser confundido com o Coccidioides immitis ou Cryptococcus. Coccidioides immitis Cultura de crescimento lento. Fino micélio aéreo de branco a bege e reverso bege Biópsia de tecido pulmonar. (HE x 1000) Colônias de crescimento moderadamente rápido Em ASD colônia úmida de aparência membranosa branco acinzentadas, com filamento aéreo branco cotonoso. O reverso é branco. As colônias escurecem com a idade. O reverso é branco ou cinza As colônias leveduriformes (35-37 ) precisam de muitas gerações para obter a aparência úmida e branca no ágar BHI Cicloheximida inibe a forma filamentosa No tecido, observa-se grande esférulas de tamanho irregular, de paredes finas medindo de µ até µ As esférulas contêm pequenos endosporos (2-4 µ) os quais podem ser confundidos com Histoplasma 11

12 Penicillium marneffei Olha a Confusão! Endêmico no Sudeste Asiático Causa gde variedade de doenças em pacientes imunocomprometidos e menos freq em imunocompetente. Colônias leveduriformes crescem rapidamente de coloração brancobege e aspecto aveludado. Pigmento vermelho solúvel é observado em culturas velhas. A forma filamentosa (25-30 ) é típica dos Penicillium, com hifas septadas conídios lisos presos a fiálides O conidióforo carreia de 4 a 5 metula, cada uma com 4 a 6 fiálides. As formas leveduriformes são redondas ou ovais e tem 3-7µ de diâmetro; As leveduras se reproduzem por fissão ao invés de brotamento Frente Forma leveduriforme Verso Forma filamentosa Fungo dimórfico Histoplasma capsulatum Sporothrix schenckii Blastomyces dermatitidis Identificação errônea Chrysosporium Sepedonium B. dermatitidis Acremonium Scedosporium apiospermum Chrysosporium Pneumocystis Pneumocystis jiroveci Eucarioto originalmente classificado como protozoário, mas agora considerado como fungo (ASM Manual of Clinical Microbiology 7th ed). Cistos contêm mais de 8 esporos ovais Em amostras clínicas células arredondadas de 1.5-5µ são mais comuns Diagnóstico ainda é baseado na identificação morfológica de espécimes respiratórias Em pacientes com AIDS, 80% of PCP pode ser diagnosticado no escarro induzido; o restante deve ser feito em LBA Pneumocystis em escarro (Azul de orto-toluidina (X100 e X400) Vamos continuar? 12