Controle Interno de Micologia (Micoteca)

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1 Controle Interno de Micologia (Micoteca) CNPJ / Rua Ana Neri, 416 Benfica Rio de Janeiro/RJ CEP Tel (21) Fax (21) Resp. Técnica: Kátia O'Dwyer Nery CRF-RJ 6957 N o Microrganismo Meio de cultura N o Microrganismo Meio de cultura 1 Trichopyton rubrum 28 Penicillium sp. 2 Trichopyton mentagrophytes 29 Acremonium sp. 3 Trichopyton tonsurans 30 Fusarium sp. 4 Trichopyton schoenleinii 31 Madurella mycetomatis 5 Microsporum canis 32 Scedosporium apiospermum 6 Microsporum gypseum 33 Nocardia brasiliensis 7 Epidermophyton floccosum 34 Nocardia asteroide 8 Trichosporon beigelii 35 Rhizopus sp. 9 Piedraia hortae 36 Syncephalastrum sp. 10 Hortae werneckii 37 Circinella sp. 11 Candida sp. 38 Cunninghanella sp. 12 Cryptococcus neoformans 40 Basidiobolus ranarum 13 Paracoccidioides brasiliensis 41 Isaria cretacea 14 Histoplasma capsulatum 42 Monascus purpureus 15 Sporothrix schenckii 43 Rhodotorula sp. 16 Fonsecaea pedrosoi 45 Scytalidium sp. 17 Fonsecaea compacta 46 Rhizopus stolonifer 18 Phialophora verrucosa 47 Prototheca wickerhamii 19 Cladosporium carrionii 48 Penicillium aurantiogriseum 21 Curvularia sp. 49 Penicillium chrysogerum 22 Alternaria sp. 50 Cryptococcus laurentii 23 Aspergillus fumigatus 51 Candida albicans 24 Aspergillus niger 52 Candida glabrata 25 Aspergillus flavus 53 Candida guilhermondii 26 Aspergillus clavatus 54 Candida krusei 27 Aspergillus tamari 55 Candida parapsilosis Página 1 de 7

2 Apresentação Tubo com meio de cultura inclinado ágar ou, conforme especificidade do gênero fúngico. Micoteca de origem clínica. Estabilidade e Armazenagem A manutenção da micoteca é realizada através de repiques periódicos (quinzenais), quando o meio de cultura mostrar sinais de desidratação (diminuição da espessura) ou quando o fungo tiver consumido o meio. Em ambientes de temperatura inferior a 20ºC o intervalo entre os repiques poderá ser maior do que 15 dias. A localização da micoteca deve ser longe da janela e distante das lâmpadas fluorescentes, se possível dentro de um armário bem ventilado e abrigado de poeira e luz direta. As colônias repicadas deverão ser mantidas em temperatura de 25 C a 30 C. A temperatura de 37 C (estufa) pode inativar alguns fungos da micoteca. Toda micoteca deve ser repicada em cabine de segurança biológica, para evitar a contaminação da cultura, do ambiente e do pessoal do laboratório, uma vez que o mecanismo de infecção das doenças provocadas por alguns fungos se faz pela aspiração (inalação) dos conídios (propágulos). A validade do lote é de 30 dias a partir da data do repique (descrita no rótulo do produto). Durante este prazo podem ser feitos novos repiques, sendo de responsabilidade do laboratório a manutenção e validade das novas culturas (verificar as condições de estabilidade e armazenagem). Atenção Os materiais utilizados para o controle interno devem ser considerados como materiais potencialmente infectantes, devendo-se tomar as precauções habituais para manipulação e o descarte segundo as normas de biossegurança. Ver advertências e precauções no final desta bula. Utilidade A micoteca é uma parte fundamental para o setor de Micologia e faz parte, como exigência, das normas da Comissão Técnica de Laboratórios de Ensaio CTLE 04 e Análises Clínicas INMETRO. A micoteca auxilia na classificação dos fungos isolados na rotina do laboratório, através da comparação da colônia isolada com a colônia padrão, servindo também para confecção de lâminas e microculturas, utilizadas para treinamento do pessoal técnico do laboratório e discentes e ensaios comparativos entre microscopistas. Instruções de Uso Para realizar o repique o laboratório deve: 1. Transferir com auxílio de alça em L ou alça de platina (para leveduras), uma pequena porção da colônia do fungo, retirada da borda da colônia e longe dos locais de pleomorfismo, de um tubo para outro com meio de cultura idêntico ao de origem. 2. O fragmento da colônia deve ser colocado em um único ponto da superfície do novo meio de cultura, de preferência na porção média inferior, onde a espessura do meio é maior. Os tubos de cultura devem ser identificados, datados e mantidos à temperatura ambiente. Verificar semanalmente se a colônia repicada corresponde à colônia original ou se houve contaminação por outro fungo. Os repiques têm que seguir uma ordem, iniciando pelos fungos causadores de micoses superficiais e cutâneas, seguida de micoses profundas e finalizando pelos fungos sapróbios ou saprófitas. Os repiques devem iniciar-se pelos dermatófitos: Trichopyton sp.; Microsporum sp.; e Epidermophyton sp. Na semana seguinte, repicar os fungos do grupo das miscelâneas: Hortae sp.; Trichosporon beigelii, Piedraia hortae, as leveduras: Candida sp.; Rhodotorula sp.; e Cryptococcus neoformans. Na terceira semana, repicar os fungos de micoses subcutâneas e profundas: P. brasiliensis, H. capsulatum, agentes de cromomicose: Sporothrix schenckii, Basidiobolus sp.; agentes de micetoma. Na quarta semana as bactérias: Nocardia spp., Actinomadura spp. E, finalmente, os fungos sapróbios: Rhizopus sp.; Penicillium sp; Aspergillus spp.; etc. O meio de cultura inclinado em tubo deve ser sempre o escolhido, porque o meio em placa contamina com facilidade e provoca maior chance de contágio do ambiente e das pessoas do laboratório. A presença do ar condicionado também influencia no desenvolvimento do fungo, pois a temperatura mais baixa retarda o desenvolvimento das colônias. Limitações O armazenamento e manuseio impróprios do controle podem afetar as características dos fungos. Página 2 de 7

3 Resultados esperados Esta micoteca é preparada com microrganismos que apresentam características específicas, conforme descrito a seguir: N o Microrganismo Meio de Cultura Macromorfologia Micromorfologia 1 Trichophyton rubrum Colônias geralmente brancas e algodonosas. Podem ser rosadas ou vermelhas. Tem variedades granulosas em cepas que esporulam abundantemente. Reverso vermelho escuro ou rubro. Microconídios abundantes e em forma de lágrima, ao longo das hifas (Tirse). 2 Trichophyton mentagrophytes Dois tipos de colônias, algodonosa ou granulosa. Cor usualmente branca ou bege, Reverso incolor, acastanhado ou avermelhado. Microconídios abundantes, globosos e agrupados. Hifa em espiral e macroconídios em forma de lápis. 3 Trichophyton tonsurans Colônia pulverulenta, cor bege ou amarelado-sulfuroso, sulcada a partir do centro. Reverso acastanhado ou avermelhado. Microconídios em balão (gotas grandes), implantados alternadamente. 4 Trichophyton schoenleinii Colônias com crescimento lento, aspecto cerebriforme, lisas (glabras), rachando o meio de cultura. Reverso incolor. Candelabro fávico. 5 Microsporum canis Colônia de superfície plumosa (penugenta), branca. Reverso amarelo-canário no bordo e alaranjado no centro. Macroconídio em forma de naveta, parede espessa, com mais de seis células. 6 Microsporum gypseum Colônias de superfície granulosa, cor canela. Reverso acastanhado ou avermelhado. Macroconídio em naveta, parede delgada, com menos de seis células. 7 Epidermophyton floccosum Colônia pulverulenta de início, tornando-se branca cotonosa (pleomorfismo). Anverso amarelo-esverdeado, reverso amarelado ou acastanhado. Macroconídios em forma clava, geralmente em grupos. 8 Trichosporon beigelii Colônia cremosa, leveduriforme, cor bege, cerebriforme, reverso incolor. Artroconídios hialinos, blastoconídios, hifas e pseudo-hifas. Levedura blastoartrosporada. 9 Piedraia hortae Colônia apiculada, filamentosa, negra ou verde escura. Reverso negro. Ascósporos fusiformes 10 Hortae werneckii Colônia inicialmente cremosa, leveduriforme, que com o tempo torna-se filamentosa. Cor negra. Reverso negro. Hifa septada acastanhada e conídios uni e bicelulares. 11 Candida sp. opaca, às vezes emitindo 12 Cryptococcus neoformans Colônias inicialmente brancas, com o tempo ficam amareladas ou acastanhadas, leveduriformes e com aspecto mucóide. Forma arredondada, gemulante e com cápsula que tem o dobro do raio da célula fúngica. Coloração pelo nanquim e mucicarmim para evidenciar a cápsula. Página 3 de 7

4 Paracoccidioides brasiliensis Histoplasma capsulatum Sporothrix schenckii 16 Fonsecaea pedrosoi Fonsecaea compacta Phialophora verrucosa Cladosporium carrionii Curvularia sp. 22 Alternaria sp Aspergillus fumigatus Aspergillus niger elevada, cotonosa, branca. Reverso acastanhado. Centro com aspecto de pipoca estourada. Colônia inicialmente branca cotonosa que depois, se torna acastanhada e de superfície finamente granulosa, rompendo-se no centro dando aspecto de pipoca estourada. Reverso acastanhado. Colônia cresce em cerca de 3 a 7 dias, inicialmente branca, torna-se branco-amarelada ou branco- acinzentada e posteriormente coloração negra. Aspecto membranoso. Micélio aéreo denso, algodonoso. Cor inicialmente branco-acinzentado, depois negro. Reverso negro. Micélio aéreo denso, algodonoso. Cor inicialmente branco-acinzentado, depois negro. Reverso negro. Colônias maduras com bordos nítidos e certo tom verde, verde-azulado ou verde acinzentado. Superfície de aspecto pulverulento ou granular. Reverso branco ou creme (pardo). Colônia coberta primeiro por um micélio aéreo branco e algodonoso. Com o tempo se cobre de esporos negros, dando aspecto granuloso. Reverso castanho escuro. Formas arredondadas, parede espessa, de duplo contorno com gemulação múltipla (gêmulos com tamanhos diferentes da célula-mãe). Microconídios (aleuroconídios) e macroconídio mamilonado. Hifas septadas delgadas, conidióforos implantados em angulo reto e conídios ovalados implantados em forma de margarida ou flor. Reprodução tipo rinocladiela, conídios implantados ao longo e na extremidade do conidióforo. Reprodução tipo rinocladiela, conídios implantados ao longo e na extremidade do conidióforo. Reprodução tipo fialófora, conidióforo em forma de garrafa. Reprodução tipo Cladosporium. Macroconídios acastanhados, divididos em 4 células, sendo a segunda maior, com aparência encurvada. Macroconídio castanho, multicelular, com septos transversais e longitudinais. Conidióforo largo, com vesícula em forma de cúpula e a metade superior está coberta por fiálides. Conidióforo com vesículas esféricas, cobertas por fiálides e conídios escuros rugosos. Página 4 de 7

5 25 Aspergillus flavus Colônia de bordo definido, coberto por um micélio aéreo algodonoso, que ao amadurecer toma aspecto granuloso, cor amarelado, acastanhado ou amareloesverdeado. Conidióforo com vesícula esférica coberta por fiálides e conídios amarelados. 26 Aspergillus clavatus algodonosa, branca de início, depois surgem grãos cinza ou cinza-esverdeado nas extremidades de hifas longas. Reverso incolor ou castanho. Conidióforo com vesícula em clava, coberta de fiálide. 27 Aspergillus tamari granulosa, cor marrom. Reverso incolor ou pardo. Conidióforo com vesícula esférica, coberta por fiálides. 28 Penicillium sp. pulverulenta, cor verde, azulverde, acinzentada, amarelada. Reverso incolor ou pardo. Conidióforos que originam fiálides em forma de pincel, não se observa vesícula. 29 Acremonium sp. Colônia úmida, membranosa, espiculada, cor amarelada. Reverso incolor. Conidióforo com conídios aglomerados na extremidade do conidióforo. 30 Fusarium sp. algodonosa, cor rósea, púrpura ou vermelho rosado. Reverso castanho ou púrpura. Hifas hialinas septadas. Macroconídio multicelular, em forma de banana. 31 Madurella mycetomatis Colônia pregueada, elevada, lisa, cor creme ou marrom escuro. Colônia cerebriforme, demácia. Hifas septadas, com fiálides em forma de frascos produzindo conídios redondos. 32 Scedosporium apiospermum Colônia de crescimento rápido originando um micélio aéreo branco, algodonoso, que se torna cinza ou pardo. Reverso castanho. Hifas septadas e conídios piriformes na extremidade de conidióforos curtos. 33 Nocardia brasiliensis Colônia de crescimento lento, que logo se torna coriácea, depois rugosa e se cobre com uma superfície branca, às vezes de cor amarela e abóbora. Reverso incolor ou alaranjado. Filamentos bacterianos, delgados de 1 micrômetro de diâmetro, que produzem esporos por fragmentação. Odor de terra molhada. 34 Nocardia asteroide Colônia de crescimento lento, que logo se torna coriácea, depois rugosa e se cobre com uma superfície branca, às vezes de cor amarela e abóbora. Reverso incolor ou alaranjado. Filamentos bacterianos delgados, de 1 micrômetro de diâmetro, que produzem esporos por fragmentação. 35 Rhizopus sp. algodonosa, preenchendo o interior do tubo. Com granulações escuras na parte superior. Cor branca, amarelada ou cinza. Reverso incolor. Hifa contínua (cenocítica), castanha com rizóide. Esporângio globoso, volumoso com columela grande. Esporangióforo não ramificado. Página 5 de 7

6 36 Syncephalastrum sp. Colônia algodonosa, preenchendo o interior do tubo, cor acinzentada. Reverso incolor. Esporangióforo parecido à margarida, no qual merosporângios alongados digitiformes estão dispostos radialmente ao redor de uma vesícula. Hifa contínua. 37 Circinella sp. Colônia algodonosa, preenchendo a superfície do meio de cultura, cor castanha. Reverso incolor. Esporângios globosos, esporangióforo encurvado sobre si mesmo. Esporangiosporos castanhos. 38 Cunninghamella sp. Colônia algodonosa, preenchendo o interior do tubo, cor branca. Reverso incolor. Esporos esféricos na superfície de uma vesícula globosa. Hifas contínuas. 40 Basidiobolus ranarum aderente ao meio, pregueada, cor bege. Reverso incolor. Esporo (zigosporo) com protuberância de um lado. Hifas largas e às vezes septadas. 41 Isaria cretacea 42 Monascus purpureus 43 Rhodotorula sp. 45 Scytalidium sp. 46 Rhizopus stolonifer 47 Prototheca wickerhamii 48 Penicillium aurantiogriseum 49 Penicillium chrysogerum 50 Cryptococcus laurentii branca, com grupos de conidióforos cilíndricos (synema) brancos, na superfície. Reverso pardo. algodonosa, de cor rósea. Reverso róseo. Colônia leveduriforme, lisa ou rugosa, de cor coral. algodonosa, de cor cinza. Reverso negro. algodonosa, preenchendo o interior do tubo. Com granulações escuras na parte superior. Cor branca, amarelada ou cinza. Reverso incolor. Alga aclorofilada, colônia branca, cremosa, opaca. Colônias grande, filamentosa, inicialmente branca, com algumas semanas tornando-se verde escura. Reverso verde. Colônias de crescimento rápido, brancas, filamentosas que ficam amarelas, tornando-se cinzas. Reverso amarelo esverdeado. Colônias inicialmente brancas, com o tempo ficam amareladas, leveduriformes e com aspecto mucoide. Conídios unicelulares hialinos lisos, com paredes finas em forma de rins. Hifas unicelulares. Ascósporos ovais e aleuroconidia. Blastoconídios. Artroconídios pigmentados, formando uma cadeia, hifas septadas. Micro hifas asseptadas, esporangiofóro terminal de cor marrom escuro a preto, não ramificado, esporângio esférico contendo columela. Presença de células esféricas com ou sem endósporos em seu interior, rodeadas pela parede celular da célula mãe. Hifas hialinas septadas, com conidióforos hialinos em forma de pincel. Esporos em cadeias longas. Hifas hialinas septadas, com conidióforos hialinos em forma de pincel. Esporos em cadeias longas. Forma arredondada, gemulante e com cápsula que tem o dobro do raio da célula fúngica. Coloração pelo nanquim e mucicarmim para evidenciar a cápsula. Página 6 de 7

7 51 Candida albicans 52 Candida glabrata 53 Candida guilhermondii 54 Candida Krusei 55 Candida parapsilosis Referências Bibliográficas 1. LACAZ et al. Tratado de Micologia Médica. São Paulo. SARVIER, CASTELLANI, A Maintenance and cultivation of common pathogenic Fungi manin sterile distilled water. Further researches.j.trop.med.hyg.; 70: , Comissão Técnica de Laboratórios de Ensaio CTLE 04 e Análises Clínicas INMETRO. 4. ANVISA RDC N 302, Dispõe sobre regulamento Técnico para Funcionamento de Laboratórios Clínicos 13 de Outubro de CARLA ALBUQUERQUE, MARIA ELIZABETE MENDES Gestão da Fase Analítica do Laboratório como assegurar a qualidade na prática, ControlLab, Vol 1, CARLA ALBUQUERQUE, MARIA ELIZABETE MENDES Gestão da Fase Analítica do Laboratório como assegurar a qualidade na prática, ControlLab, Vol 2, CARLA ALBUQUERQUE, MARIA ELIZABETE MENDES Gestão da Fase Analítica do Laboratório como assegurar a qualidade na prática, ControlLab, Vol 3, JEFERSON CARVALHAES. Tópicos em Micologia Médica. Rio de Janeiro; JEFERSON CARVALHAES. Atlas de micologia Médica Colônias. Rio de Janeiro; JEFERSON CARVALHAES. Atlas de micologia Médica Lâminas. Rio de Janeiro; ADVERTÊNCIAS E PRECAUÇÕES Este produto é de origem humana e potencialmente infectante, portanto deve ser manuseado de acordo com as Boas Práticas de Biossegurança Padrão OSHA sobre Patógenos Transmitidos por Via Sangüínea. Todos os materiais de controle de qualidade devem ser tratados como potencialmente infectantes e deve-se seguir os procedimentos de biossegurança adotados pelo laboratório, incluindo: - luvas descartáveis; - vestuário de proteção; - equipamento protetor adequado para olhos/face; - ter um lava-olhos próximo ao local de manuseio da amostra. Cuidados: - evitar contato com a pele e olhos; - nunca pipetar pela boca; - não manusear lentes de contato no setor técnico; - não comer, beber, fumar ou aplicar cosméticos no setor técnico. Acidente: em caso de contato com a pele e olhos por meio de respingo ou corte, lavar imediatamente e abundantemente com água e sabão. Em seguida consulte um especialista. Bibliografia US Department of Labor, Occupational Safety and Health Administration, 29 CFR Part , Occupational Exporue to Bloodborne Pathogens; Final Rule. Federal Register 1991:56 (235): US Department of Health and Human Services. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. HHS Publication No. (CDC) Washington, DC: US Government Printing OFFICE, May World Health Organization.Laboratory Biosafety Manual.Geneva:World Health Organization, National Committee for Clinical Laboratory Standards. Protection odf Laboratory Workers from Occupationally Acquired Infectious; Approved Guideline Second Edition. NCCLS Document M29-A Wayne, PA:NCCLS, Página 7 de 7