Dermatologicamente testado e hipoalergenicidade (RFE-TC R0)
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- Ronaldo Correia Ferretti
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1 Dermatologicamente testado e hipoalergenicidade (RFE-TC R0) Investigador principal: Relevância do estudo: Metodologia: Investigar a segurança do produto investigacional quanto ao potencial de Irritabilidade Dérmica Primária, Irritabilidade Dérmica Acumulada, Sensibilização Dérmica, Fotossensibilização Dérmica e Fototoxicidade Dérmica. Rafaella Luzzo da SIlva O estudo foi planejado e conduzido segundo as determinações da Resolução 196/96 do Conselho Nacional de Saúde, sobre Diretrizes e Normas Regulamentadoras de Pesquisa Envolvendo Seres Humanos e, aprovado por um Comitê de Ética em Pesquisa Clínica A compatibilidade cutânea dos produtos foi verificada pelo Médico Dermatologista ou pelo Investigador ou por um Pesquisador qualificado e experiente sob sua responsabilidade. As condições experimentais adotadas, com produto aplicado sob apósitos, causam certa oclusão cutânea que favorece o contato dos componentes do produto com a pele. Caso algum componente apresente potencial irritante ou sensibilizante o mesmo seria facilmente comprovado por este método. No fototeste é feito irradiação do local dos apósitos na pele para pesquisa de fotossensibilização dérmica e de fototoxicidade dérmica onde ocorre um aumento da reatividade cutânea a luz ultravioleta. Esta metodologia fundamenta-se em várias publicações. A área experimental escolhida (dorso direito ou esquerdo) é uma área mais homogênea, facilitando a avaliação do produto teste. Painel de voluntários: A amostra foi constituída por 85 voluntários, sendo 02 voluntários do sexo masculino e 83 voluntários do sexo feminino, com idade entre 19 e 65 anos. Os voluntários participantes foram instruídos para tomar banho antes das provas e absterse de realizar movimentos bruscos e molhar o local durante o período do teste. Foi orientada, também, a não se expor diretamente ao sol e não iniciar o uso de produtos tópicos novos durante o período da avaliação. Nas condições em que o produto investigacional foi avaliado e na amostra de voluntários estudada, pôde-se concluir que: não Induziu fenômenos irritativos ou de sensibilização cutânea e não provocou fotoalergia e nem fototoxicidade detectáveis durante o período de estudo, sendo considerado seguro para uso tópico, dermatologicamente testado e hipoalergênico. Instituto de Pesquisa Centro de Estudos Clínicos Ltda. Valinhos/SP Página 1 de 7
2 Avaliação clínica do potencial demaquilante (RFE-EM B) Diretor do estudo: Aspectos éticos: Participantes da pesquisa: Avaliar in vivo a eficácia do produto investigacional quanto o poder demaquilante, ou seja, capacidade de limpar a pele com aplicação de maquiagem. Dra. Daniela Brotto Lopes Terci. O estudo foi planejado e conduzido segundo as determinações da Resolução 466/12 do Conselho Nacional de Saúde, sobre Diretrizes e Normas Regulamentadoras de Pesquisa Envolvendo Seres Humanos. Finalizaram o estudo 10 participantes da pesquisa, do sexo feminino, com idade média de 39 ± 7 anos. Não houve relatos ou evidências de reações adversas durante o estudo. Desenho experimental: No antebraço volar da participante da pesquisa foram demarcados dois sítios de 2,5 cm 4,0 cm nos quais foram obtidas micrografias na condição inicial, antes da aplicação da maquiagem, utilizando uma microcâmera com objetiva de ampliação de 30x. Após, aplicouse 2 mg/cm 2 da maquiagem à prova d água e obteve-se micrografias de cada sítio após a secagem da maquiagem. Em seguida, a maquiagem foi removida de forma padronizada utilizando o controle (disco de algodão hidrofílico embebido com 1,0 ml de água) ou a amostra (disco de algodão hidrofílico embebido com 1,0 ml do produto investigacional). Após remoção da maquiagem e secagem da pele, foram obtidas novas micrografias de cada sítio. Por meio de análise de imagens determinou-se a quantidade relativa de maquiagem presente em cada sítio, antes e depois da limpeza. Através da análise estatística dos dados, determinou-se a eficácia da limpeza da pele (poder demaquilante) do controle e da amostra, comparando-se ainda os resultados da amostra em função do controle. De acordo com os resultados obtidos pela aplicação do protocolo de estudo descrito, a amostra do produto investigacional Perfect Balance Toner, segundo o modo de uso detalhado neste documento, proporcionou a remoção significativa de até 91,7% de uma maquiagem à prova d água aplicada na pele. A eficácia foi, também, significativamente superior à limpeza da pele utilizando água apenas. Página 2 de 7
3 Figura 1 - Exemplos de imagens capturadas. Quanto menor a área escura, maior a eficácia na limpeza e remoção de sujidades. Gráfico 1 - Resultados de Potencial Demaquilante (%). Considerando o limite superior do intervalo de confiança dos resultados obtidos, a amostra do produto avaliado removeu até 91,7% das partículas. Página 3 de 7
4 Avaliação da redução e controle da oleosidade da pele por sebumetria (RFE-EM115-15) Diretor do estudo: Aspectos éticos: Participantes da pesquisa: Avaliar a redução e o controle da oleosidade da pele após aplicação do produto investigacional Juliana Rodrigues Pinto. O estudo foi planejado e conduzido segundo as determinações da Resolução 466/12 do Conselho Nacional de Saúde, sobre Diretrizes e Normas Regulamentadoras de Pesquisa Envolvendo Seres Humanos. 21 participantes da pesquisa foram finalizaram o estudo; idade média: 36 ± 10 anos. Não houve relatos ou evidências de reação adversa durante o estudo. Desenho experimental: No recrutamento das participantes da pesquisa, as mesmas foram instruídas para suspender o uso de qualquer produto cosmético na face até 48 horas antes do início do estudo. No dia do estudo, as participantes da pesquisa recrutadas que compareceram ao laboratório foram esclarecidas pelo pesquisador sobre os procedimentos do estudo, aspectos éticos e legais, riscos e benefícios, suporte médico, formas de ressarcimento dos custos de participação e solicitadas a assinarem o TCLE em duas vias. A metodologia consistiu na avaliação da redução e controle da oleosidade da pele após 15 minutos, 2 e 3 horas da aplicação do produto investigacional. A avaliação de oleosidade foi realizada através de medidas de sebumetria (Sebumeter SM 815 e Multiprobe Adapter MPA-5, CKeletronics, Alemanha). De acordo com os resultados obtidos foi possível concluir que: Em relação à condição inicial da pele, o produto investigacional Perfect Balance Toner proporcionou redução significativa da oleosidade por até 2 horas após a aplicação. Em relação ao controle (água), o produto investigacional Perfect Balance Toner proporcionou redução significativa da oleosidade da pele após 15 minutos da aplicação. Isto indicou que a aplicação do produto investigacional reduziu e controlou a oleosidade da pele por até 15 minutos. O valor percentual médio de redução da oleosidade, em relação ao estado inicial da pele e ao controle, foi de 18,9% após 15 minutos. 90,5% das participantes da pesquisa apresentaram redução da oleosidade após a aplicação do produto investigacional, em relação ao estado inicial da pele e ao controle (água). Página 4 de 7
5 Gráfico 1 Porcentagem de redução da oleosidade da pele. Valores obtidos por sebumetria após 15 minutos, 2 horas e 3 horas da aplicação do produto investigacional. Página 5 de 7
6 Avaliação da inibição do crescimento da microbiota epitelial (LSE-f068/15.101) Investigador principal: Relevância do estudo: Este estudo teve como objetivo determinar a possível atividade antimicrobiana do produto investigacional, através do ensaio de concentração inibitória mínima pela técnica de diluição em caldo. Ana Paula Machado Vilar e Wagner Vidal Magalhães, MSc. As condições experimentais adotadas condizem com as normas aprovadas pelo NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standards), além do embasamento de artigos científicos. Os microorganismos foram adquiridos comercialmente de empresas qualificadas e são certificados pela ATCC (American Type Culture Collection). Materiais: Amostra: Foram testadas concentrações entre 80 e 6,25%. Antibióticos utilizados no teste: Gentamicina. Micro-organismos: Staphylococcus aureus ATCC 6538 e Pseudomonas aeruginosa ATCC Meio de cultura: Os meios utilizados no ensaio foram Caldo e Ágar de Caseína Soja (Tryptic Soy Agar TSB; Tryptic Soy Agar TSA). Método: Preparo e Padronização do inóculo: O inóculo foi preparado a partir da suspensão de células de crescimento recente (24h) em solução salina 0,85% e a padronização foi feita através do Densimat, um densitômetro que mede a densidade óptica de um inóculo microbiano. A leitura no Densimat é feita no comprimento de onda de 550 nm e a densidade óptica correspondente a 0,5 da escala McFarland é 0,125, que equivale a 108 UFC/mL. Em seguida foram realizadas diluições para a concentração final de 105 UFC/mL de cada micro-organismo testado. Determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM): Para este estudo a CIM foi determinada pelo método de macrodiluição que englobou testes em tubos de ensaio, com volume final de 5 ml, envolvendo a preparação de diluições seriadas e logarítmicas de antimicrobianos em meio de cultura líquido, o qual permitirá o crescimento bacteriano. As diluições em tubos de ensaio do agente antimicrobiano foram preparadas e em seguida inoculadas com uma suspensão bacteriana padronizada a 105 UFC/mL. Após o período de incubação de 24 horas, a 35±2 C, os tubos foram inspecionados visualmente para evidenciar o crescimento bacteriano que se traduz em um aumento de turbidez. Após inspeção da turbidez, as diluições foram plaqueadas em TSA, incubadas por 24 horas a 35±2 C. Tendo transcorrido o tempo de incubação, as placas foram avaliadas quanto ao crescimento bacteriano e foi considerada a CIM para a concentração que foi capaz de inibir o crescimento bacteriano. O teste foi feito em triplicata para cada concentração. O produto-teste Perfect Balance Toner apresentou uma CIM de 20% para P. aeruginosa e de 40% para S. aureus. Instituto de Pesquisa Medcin Instituto da Pele. Osasco/SP Página 6 de 7
7 Avaliação in vitro da expressão gênica de 5-α redutase (LSE-f067/15.101) Avaliar o efeito da aplicação do produto investigacional sobre a expressão gênica de 5 alfa redutase em cultura de queratinócitos humanos. Investigador principal: Relevância do estudo: Ana Paula Machado Vilar e Wagner Vidal Magalhães, MSc. As condições experimentais adotadas, através da utilização de células humanas em condições ótimas de cultivo, condizem com as metodologias atuais aplicadas, aceitas e validadas pela comunidade científica internacional. As culturas celulares humanas foram adquiridas comercialmente de companhias internacionais qualificadas e certificadas. Os experimentos foram conduzidos mediante aprovação do Comitê de Ética em Pesquisa da Faculdade de Ciências Médicas da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Cronograma do estudo: Início: 14/08/2015. Término: 17/05/2015. Método: Cultura de Queratinócitos humanos Queratinócitos humanos foram semeados em garrafas de 75 cm 2, cultivados e expandidos em estufa úmida a 37ºC em presença de 5% de CO2, utilizando meio de cultura específico. Ao atingirem confluência, as células foram semeadas em placas de 6 poços para posterior incubação com o produto-teste e avaliação do parâmetro proposto. Incubação com o produto-teste As culturas celulares foram incubadas com 3 concentrações não-citotóxicas do produto investigacional, determinadas previamente através da técnica de MTT, sendo que as concentrações avaliadas neste estudo foram, para ambos os produtos, 1,56; 0,78; 0,39 % (p/v). As culturas foram incubadas com o produto-teste por um período de 48 horas para posterior coleta do sobrenadante e quantificação do mediador proposto. Expressão gênica de 5α-redutase 1 (SRD5A1) por Real-Time PCR. Após 6 horas de incubação com as concentrações pré-estabelecidas dos produtos-teste, o RNA foi extraído utilizando-se Trireagent Solution (Applied Biosystems) e quantificado através da utilização do Quant-iT RNA Assay Kit (Invitrogen) realizando-se a leitura no equipamento Quibit Fluorometer (Invitrogen). Os testes foram conduzidos em um aparelho StepOnePlus (Applied Byosystems). Para a realização do Real-Time PCR um sistema de ensaio comercialmente disponíveis foi utilizado (TaqMan Gene Expression Assays; SRD5A1: Hs _g1; B2M: Hs _m1; Applied Biosystems). A quantidade relativa de mrna foi calculada conforme descrito por Pfaffl (2001). O produto-teste Perfect Balance Toner mostrou-se capaz de reduzir a expressão gênica de 5α -redutase 1 em queratinócitos humanos, em comparação ao grupo controle, portanto apresenta potencial de reduzir a produção de sebo na pele. Instituto de Pesquisa Medcin Instituto da Pele. Osasco/SP Página 7 de 7
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