15/09/2016. Renata Rodrigues Cocco Universidade Federal de São Paulo. PROAL 2004 J Pediatr (Rio J). 2004;80(3):203-10
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1 Renata Rodrigues Cocco Universidade Federal de São Paulo PROAL 2004 J Pediatr (Rio J). 2004;80(3):
2 PROAL 2004 Desenho do estudo: IgE total /específica para alérgenos inalatórios e alimentares (RAST, UniCAP,Pharmacia) : 457 crianças (1-12 anos) acompanhadas em serviços de Alergia Pediátrica nas 5 regiões brasileiras + 62 controles pareados. <2 anos = 19,4%; 2-3a = 20,9%; 3-4a = 14,5%; 4-5a = 21,0% ; 5-12a = 24,2%. 4 grupos Lactentes sibilantes (n = 20) ~5% Alergia Alimentar (n = 16) ~4% Dermatite atópica (n = 56) ~15% Alergias respiratórias (n =348) ~76% Alérgenos avaliados Inalatórios: D. pteronyssinus, D. farinae, Blomia tropicalis, epitélio de cão, epitélio de gato, epitélio de cavalo, epitélio de vaca, fungos, polens (gramíneas) e barata. Alimentares: leite de vaca, ovo, amendoim, trigo, painel de peixes/frutos do mar. Valores >0,35 ku/l: positivos J Pediatr (Rio J). 2004;80(3): PROAL 2004 IgE específica + para inalantes e/ou alimentos: 361/457 (79%) dos pacientes e 16/62 (25,8%) controles Distribuição dos pacientes de acordo com a positividade do teste aos diferentes alérgenos 2
3 PROAL 2004 IgE específica + para inalantes e/ou alimentos: 361/457 (79%) dos pacientes e 16/62 (25,8%) controles Distribuição dos pacientes de acordo com a positividade do teste aos diferentes alérgenos PROAL 2004 Pacientes com testes positivos de acordo com o grupo de doença à qual pertencem 3
4 Avanço da Biologia Molecular - Melhor conhecimento das proteínas alergênicas - Melhor acurácia no diagnóstico - Aumento no número de proteínas identificadas, clonadas e disponíveis para análise laboratorial (detecção IgE específica). - Componentes para diagnóstico (CRD): prognóstico, risco de reações cruzadas, marcadores de reações clínicas, história natural da doença, refinamento de imunoterapias : - Alteração no padrão de sensibilização da população brasileira? - Análise da sensibilização aos componentes atualmente disponíveis. - O padrão de sensibilização varia de acordo com a doença alérgica avaliada? 4
5 PROAL II 2014/2016 Sensibilização a alérgenos inalantes e alimentares em crianças brasileiras atópicas pela mensuração in vitro de IgE específica proteínas totais e componentes Projeto Alergia (PROAL) II Renata Rodrigues Cocco Carolina Aranda Dirceu Solé Disciplina de Alergia, Imunologia Clínica e Reumatologia Departamento de Pediatria da Escola Paulista de Medicina - Universidade Federal de São Paulo. Objetivos: 1. Caracterizar o padrão de sensibilização de pacientes atópicos acompanhados em diferentes serviços de alergia no Brasil, incluindo a análise dos principais componentes proteicos (CRD). 2. Comparar os dados atuais com os obtidos em 2004 (PROAL I). 3. Avaliar a relação de proteínas totais e seus respectivos componentes. 4. Comparar o método convencional de mensuração de IgE específica (ImmunoCAP ) com a tecnologia do microarray (ImmunoCAP ISAC ). 5. Avaliar a relação entre os resultados de Phadiatop (USA, EU, infant) e a IgE total. PROAL II 2014/2016 Métodos: crianças e adolescentes provenientes de 11 serviços de alergia em diferentes regiões do país (cerca de 40 pacientes/centro), com idade entre 6 meses e 18 anos: 400 doentes controles não alérgicos, pareados por gênero e idade. Critérios de inclusão: - Pacientes atendidos em serviços especializados em alergia de diferentes regiões do país e que tenham como diagnóstico: lactente sibilante, dermatite atópica, asma e/ou rinite alérgica e alergia alimentar, alocados de modo a constituírem grupos homogêneos quanto ao número. Os pacientes e/ou seus familiares foram submetidos a um questionário e a coleta de sangue periférico para análise: 1. Mensuração de IgE total. 2. Mensuração de Phadiatop (EU, USA, infant). 3. Avaliação de IgE específica de 23 fontes alergênicas. 4. Na dependência da positividade das proteínas totais, os respectivos componentes. 5. Mensuração individual do ISAC para avaliação da eficácia clínica. 5
6 PROAL II Centros participantes: 1. Coordenação: UNIFESP Dr. Dirceu Solé Dra Carolina Aranda Dra Renata R. Cocco 2. Instituto da Criança/USP Dr. Antonio Carlos Pastorino 3. Universidade Federal de Passo Fundo Dr. Arnaldo Porto 4. UFRJ Dra. Ekaterini Goudouris 5. UFPE Dr. Emanuel Sarinho 6. Hospital Nipo-Brasileiro/SP Dr. Flávio Sano 7. UFSE Dra Jackeline Motta Franco 8. Clínica de Alergia de Goiânia Dra. Letícia Chavarria 9. UFMT Dra Lillian Moraes 10. UFPR Dr. Nelson Rosário 11. FMABC Dra Neusa Wandalsen Dra Márcia Mallozi PROAL II Passo 1: Submissão do projeto ao comitê de ética (CEP) respectivo de cada centro Passo 2: Seleção dos pacientes e assinatura do termo de consentimento: Passo 3: Preenchimento da ficha clínica Passo 4: Coleta de sangue. Passo 5: Após a finalização das coletas envio das fichas clínicas + soros (UNIFESP) 6
7 PROAL II PROTEÍNAS TOTAIS AVALIADAS 1. D. pteronyssinus (d1) 2. D. farinae (d2) 3. B. tropicalis (d201) 4. Mix castanhas: pecan, castanha de caju, pistache, nozes (fx22) 5. P. americana (i206) 6. Epitélio de gato (e1) 7. Epitélio de cavalo (e3) 8. Epitélio de vaca (e4) 9. Epitélio de cão (e5) 10. Mix de gramíneas (gx2) 11. Mix de polens (wx1) 12. Mix de fungos (mx1) 13. Mix de pólens de árvores (tx3) 14. Ascaris lumbricoides (p1) 15. Clara de ovo (f1) 16. Leite de vaca (f2) 17. Peixe (f3) 18. Trigo (f4) 19. Milho (f8) 20. Amendoim (f13) 21. Soja (f14) 22. Camarão (f24) 23. Castanha de caju (f202) inalantes alimentos parasita PROAL II COMPONENTES AVALIADOS MEDIANTE POSITIVIDADE DA FONTE ALERGÊNICA 1. f424 rgad c 1 Parvalbumina (peixe) 2. f416 rtri a 19 Omega-5 Gliadina (trigo) 3. f433 rtri a 14 nltp (trigo) 4. f98 Gliadina (trigo) 5. f422 Ara h 1 (amendoim) 6. f423 Ara h 2 (amendoim) 7. f424 Ara h 3 (amendoim) 8. f352 Ara h 8 PR-10 (amendoim) 9. f427 Ara h 9 nltp (amendoim) 10. f353 rglym4 PR-10 (soja) 11. f431 rgly m 5 Beta-conglicinina (soja) 12. f432 rgly m 6 Glicinina (soja) inalantes 13. f233 ngal d 1 Ovomucoide (ovo) 14. f232 ngal d 2 Ovalbumina (ovo) 15. f323 ngal d 3 Conalbumina (ovo) 16. f76 nbos d 4 Alfa-lactalbumina (leite) 17. f77 nbos d 5 Beta-lactoglobulina (leite) 18. f78 nbos d 8 Caseina (leite) 19. e204 nbos d 5 albumina sérica bovina (leite/epitélio de animais) 20. d202 Der p 1 (ácaro) 21. d203 rderp 2 (ácaro) 22. d205 Der p 10 Tropomiosina (ácaro) 23. rpen a 1 Tropomiosina (camarão) alimentos 7
8 PROAL I vs II: semelhanças e diferenças PROAL I Faixa etária 6m-12 anos 6m-18 anos Distinção fenótipos Alérgenos completos avaliados Componentes (CRD) avaliados Centros brasileiros envolvidos Valor de referência IgE específica (ku/l) Predominância alergias respiratórias (~76%) 10 aeroalérgenos, 5 alimentos Nenhum ,35 0,1 PROAL II Divisão homogênea (asma/rinite, lactente sibilante, DA, AA) 12 aeroalérgenos, 10 alimentos, 1 parasita 8
9 1. Aplicação ficha clínica 1. Ficha clínica: avaliação parcial dos resultados questionários: 1-18 anos de idade Média de idade do início dos sintomas: 7,8 meses Média de idade na data da avaliação: 56,5 meses (4,7 anos) Prevalência dos alérgenos alimentares mais referidos: leite 86% ovo 32% trigo soja amendoim frutos do mar 4,1% 3,3% 2,5% 2,5% Aceito para apresentação no Food Allergy and Anaphylaxis Meeting, Roma, out/2016 9
10 1. Ficha clínica: avaliação parcial dos resultados Número de alérgenos alimentares referidos AA múltipla 28% AA única 72% Sintomas referidos 22,5 2,5 1,7 Gravidade dos sintomas (17% com hospitalizações decorrentes da AA) grave 38% leve 33% moderada 29% Aceito para apresentação no Food Allergy and Anaphylaxis Meeting, Roma, out/ Ficha clínica: avaliação parcial dos resultados (todos os grupos) TPO para diagnóstico 80,0% 70,0% 60,0% 50,0% 40,0% 30,0% 20,0% 10,0% 0,0% TPO Resultado TPO 64% 72,7% 36% Não Realizou realizou 27,3% Negativo Positivo 92,5% 91,4% História familiar alergia 47.5% : asma e/ou RA. 73,1% 26,9% 52,7% 47,3% 7,5% 8,6% Não Sim Não Sim Não Sim Não Sim Asma Rinite AA DA 10
11 1. Ficha clínica: avaliação parcial dos resultados (todos os grupos) 6,5% Tabagismo gestacional 93,5% Não 1 22,6% Tabagismo passivo 77,4% Não 23,7% Tabagismo 76,3% Não 0,0% 20,0% 40,0% 60,0% 80,0% 100,0% 100,0% 90,0% 80,0% 70,0% 60,0% 50,0% 40,0% 30,0% 20,0% 10,0% 0,0% 89,2% Não Prematuridade 10,8% Sim Sim Não Sim Não 31,9% Cão 68,1% Não 6,6% Gato Não 93,4% Presença de animais domésticos Aceito para apresentação no Food Allergy and Anaphylaxis Meeting, Roma, out/2016 Histórico Familiar de asma 100,0% Não 73,1% Sim 26,9% Histórico Familiar de rinite 100,0% Não 47,3% Sim 52,7% Histórico Familiar de DA 100,0% Não 92,5% Sim 7,5% Histórico Familiar de AA 100,0% Não 91,4% Sim 8,6% Tabagismo 100,0% Não 76,3% Sim 23,7% Tabagismo passivo 100,0% Não 77,4% Sim 22,6% Tabagismo gestacional 100,0% Não 93,5% Sim 6,5% Animais 100,0% Não 64,5% Sim 35,5% Gato 100,0% Não 93,4% Sim 6,6% Cão 100,0% Não 68,1% Sim 31,9% Outro 100,0% Não 98,9% Sim 1,1% Prematuridade 100,0% Não 89,2% Sim 10,8% - Fatores de risco associados: História familiar de RA (OR=4.1; 95%CI= ), História familiar de asma (OR=2.5; 95%CI= ) Tabagismo (OR=1.4; 95%= ). 11
12 2. Subdivisão em 4 grupos controles - Lactente sibilante - Asma/rinite alérgica - Dermatite atópica - Alergia Alimentar: 92 pacientes perfil: Média DP Mínimo Máximo 1 Quartil Mediana 3 Quartil N Média (IC95%) Idade atual (meses) 54,48 (4,5a) 42,76 6,00 204,00 (17a) 24,00 (2a) 36,00 (3a) 84,00 (7a) 92 54,48 (45,62-63,33) Idade de início (meses) 6,66 5,34 1,00 24,00 4,00 5,00 7, ,66 (5,56-7,77) N % Gênero ,0 Feminino 44 47,8 Masculino 48 52,2 Classificação da ,0 doença principal Leve 25 27,2 Moderada 37 40,2 Grave 30 32,6 Gênero ação da doença a b 2,370 Chi-Square,174 df 1 2 Asymp. Sig.,677,306 RESULTADOS PRELIMINARES PROAL II Prevalência alérgenos alimentares leite 83,7% clara de ovo 70,7% trigo 56,5% amendoim soja milho camarão castanha caju 45,7% 43,5% 43,5% 41,3% 35,9% peixe 18,5% 12
13 RESULTADOS PRELIMINARES PROAL II Prevalência outros alérgenos vaca 81,5% D pteronyssinus D fariane cão 70,7% 67,4% 72,5% Blomia tropicalis gato 54,3% 52,7% ascaris gramíneas barata de esgoto fungo mix cavalo 44,6% 38,0% 37,0% 30,4% 29,3% MÉDIAS DOS VALORES SÉRICOS DE IgE ESPECÍFICA (ku/l) D pteronyssinus D fariane leite Blomia tropicalis vaca clara de ovo gato cão camarão trigo gramíneas ascaris amendoim milho peixe cavalo barata de esgoto soja castanha caju fungo mix 6,38 6,02 3,98 3,49 3,11 2,81 2,04 1,89 1,60 1,20 1,07 1,05 0,99 0,88 0,67 0,19 12,12 20,13 17,89 28,46 0,00 5,00 10,00 15,00 20,00 25,00 30,00 13
14 PROAL I vs PROAL II: sensibilização do grupo com alergia alimentar milho soja amendoim trigo leite ovo peixe fungos cavalo cão Vaca Gramíneas Gato Barata Blomia Df D.pt 6,30 6,30 6,30 6,30 12,50 12,50 12,50 18,80 18,5 18,80 18,00 29,3 31,30 30, ,5 43,5 45,7 43,80 56,5 50,00 52,7 54,3 50,00 62,50 62,50 68,80 70,7 67,4 70,7 72,7 81,5 83,7 RESULTADOS PRELIMINARES PROAL II 2016 ISAC (n=123) (n=93) trop. camarão Barata trop. ácaro Ovoalbumina ASB Βlac Caseína αlac Camarão (AQ) Anisakis Ácaro Blomia D. farinae D. farinae D. pteronyss. D. pteronyss. trop. camarão Barata trop. ácaro Ovoalbumina ASB Βlac Caseína αlac Camarão (AQ) Anisakis Ácaro Blomia D. farinae D. farinae D. pteronyss. D. pteronyss. 14
15 PROAL II A SEGUIR... Análise dos componentes: Presença de marcadores de reatividade clínica (ex, Ara h 1,2,3; ω-5 gliadina, ovomucoide); Identificação da sensibilização a albumina sérica bovina ImmunoCAP (reatividade cruzada leite e epitélio de vaca?) Perfil brasileiro de sensibilização aos componentes proteicos (ImmunoCAP/ISAC). Avaliação do perfil de sensibilização de cada um dos grupos, comparação entre si e com o grupo controle. Identificação de possíveis marcadores de sensibilização lactente sibilante: asma? DA? AA?...Girassol 2017, 2018, 2019, AGRADECIMENTOS Dr. Dirceu Solé Dra Carolina Aranda Felipe Pierotti 15
16 AGRADECIMENTOS Dr. Dirceu Solé Dra Carolina Aranda Felipe Pierotti Dr. Antonio Carlos Pastorino Dr. Arnaldo Porto Dra. Ekaterini Goudouris Dr. Emanuel Sarinho Dr. Flávio Sano Dra. Jackeline Motta Franco Dra Lillian Moraes Dra. Márcia Mallozi Dra. Maria Letícia Chavarria Dr. Nelson Rosário Dra. Neusa Wandalsen Thermo Fisher Diagnosticos Fábio Arcuri Janaína Araújo Aline Oliveira Cynthia Bartalini Magnus Borres Kerstin Wall 16
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