Avaliação de híbridos F1 de café (Coffea arabica L.) e respectivos genitores, com marcadores RAPD'

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1 Bioteenologia Avaliação de híbridos F1 de café (Coffea arabica L.) e respectivos genitores, co arcadores RAPD' José Roberto M. FONTES - UFV; Ney. S. SAKIYAMA - UFV (sakiyaa@ail.ufv.br); Antônio A. CARDOSO - UFV; Laércio ZAMBOLIM - UFV; Antônio A. PEREIRA - EPAMIG. RESUMO: U estudo co arcadores RAPD foi realizado para avaliação de híbridos F, de café (CofSeu arabica L.) e respectivos genitores. Dos priers utilizados para a obtenção de arcadores RAPD, 53.5% apresentara poliorfiso, co édia de 2,35 bandas poliórficas por prier. Marcadores RAPD fora eficientes para a avaliação de diversidade genética e Cofea arabica L. e para a certificação da natureza híbrida de ateriais genéticos obtidos por cruzaentos artificiais. PALAVRAS-CHAVE: diversidade, híbrido, C. arabica, RAPD. ABSTRACT: RAPD arkers were used to evaluate the F, coffee hybrids (C. arabica L.) and their respective progenitors. Fro the total of the priers used to generate RAPD arkers, 53.5% showed polyorphis, with an average of 2.35 polyorphic bands per prier. RAPD arkers were efficient to evaluate the genetic diversity in C. arabica L., and to certificate the hybrid condition of the genetic aterials obtained by artificial crosses. INTRODUÇÃO A utilidade dos arcadores de DNA C deterinada e grande parte pela tecnologia que é epregada para revelar o poliorfiso (TINGEY et al., 1992). A técnica do DNA poliórfico aplificado ao acaso (RAPD) surgiu coo ferraenta para detectar seqüências poliórficas (WILLIAMS et al., 1990). Estes arcadores são fáceis de sere detectados pois não requere inforações sobre a seqüência de DNA a ser aplificada ou a síntese de priers específicos. O conheciento da diversidade genética é iportante para que possa ser explorado no elhoraento e inforações de poliorfisos de DNA entre os acessos de u banco de geroplasa são hteis para este propósito. Outra aplicação dos arcadores de DNA para o elhoraento C a possibilidade da certificação do sucesso de u cruzaento artificial na obtenção de híbridos. O presente trabalho foi realizado co o propósito de obter inforaçöes sobre a diversidade genética e certificação da natureza híbrida de ateriais do prograa de elhoraento da UFV/EPAMIG. MATERIAL E MOTODOS Foi realizado u estudo da diversidade genética de 51 genótipos: 10 genitores Catuaí, 12 genitores Híbrido de Tior e 29 híbridos resultantes de diferentes cobinações entre Catuaí e Híbrido de Tior, na geração FI (Tabela 1). Foi realizada tabé a certificação da natureza híbrida de 12 híbridos F, estudados. Foi utilizada a técnica de arcadores oleculares RAPD. Para o estudo de diversidade fora realizadas u total de 157 reações, co 86 priers diferentes. Para a certificação da natureza híbrida dos F, fora utilizados 12 priers previaente selecionados de u total de 30. A extração do DNA dos genótipos estudados foi obtida através de folhas novas de cada planta seguida de aplificação de fragentos de DNA, separação dos fragentos por eletroforese e gel de agarose a 1,4%, coloração dos fragentos co broeto de etídio e fotodocuentação sob luz U.V., e equipaento próprio (FERREIRA & GRA'ITAPAGLIA, 1996). 0 s dados fora tabulados considerando a presença (1) ou ausência (O) das bandas aplificadas (reproduzíveis e ais intensas), originando ua atriz que foi usada para calcular as distâncias genéticas. Utilizando-se 0 Prograa GENES (CRUZ, 1997), estes dados fora subetidos a análise para obtenção da atriz de dissiilaridade e, e seguida, dos grupos de genótipos e suas respectivas distâncias genéticas. O prograa STATISTICA foi utilizado para construir os dendrograas. ' Apoio: CNPq. FINEP, FAPEMIG e CONS6RClO BRASILEIRO DE PESQUISA E DESENVOLVIMENTO DO CAFÉ. 160

2 Sipósia de Pesquisa dos Cafes do Brasil tatuaí Híbrido de Tior Híbridos FI 1.~~.? , UFV376-2, UFV427-15, UFV332-1, UN332-3, UN332-5, UFV332-6, ~.~V , UN435-1, UN438-52, UN341-11, UFV342-1, UFV342-2, UFV342-5, KFV , UN439-2, UFV440-22, UFV342-I, UN342-8, UN348-2, UN348-3, L FV , UN441-1, UFV , UFV348-4, UN348-7, UFV348-9, UFV415-1, LFV , UFV443-3, UN445-46, UFV415-2, UFV415-4, UFV418-6, UFV419-8, ~FV , UN446-8, UN832-1 UFV419-10, UFV421-5, UN427-2, UN429-1, ~.~~ , UFV430-1, UFV505-9, UN506-3, UFV511-1, cfv , UFV513-5 ~.~V , c~v Tabela I- Lista dos 51 gen6tipos de cafe estudados. I(I:SULTADOS E DISCUSSÃO da diversidade genética: Dos 86 priers diferentes que fora utilizados neste trabalho, 46 deles, ou,,+, 533% dos priers, apresentara poliofiso; totalizando 108 bandas poliórficas, édia de 2,35 I,;,,ldas/prier poliórfico. Os poliorfisos são identificados coo fragentos de DNA aplificados a I,;trtir de u indivíduo e não aplificados a partir do outro, que resulta e presença e ausência de banda llt~ xel, Dentre os priers que apresentara aior núero de bandas poliórficas encontra-se o OPA-8, ()pc.lo, OPA-5 e OPA-IO co nove, seis, cinco e cinco bandas poliórficas, respectivaente. A análise de ;Icrupaento(Figura 1) definiu, ao nível de 74%, dois grupos: o grupo A co 15 genótipos (14 híbridos FI e I llíbrido de Tiar) e o grupo B co os outros 36 genótipos restantes. Todos os I4 híbridos presentes no crupo A são híbridos enos produtivos, segundo avaliações de capo (dados não deonstrados). Considerando u liite de 60% de dissiilaridade genética, u terceiro grupo é forado pela divisão do yupo B. Este novo grupo é forado apenas por u genótipo, o híbrido F, UFV Dos 13 híbridos F, presentes no segundo subgrupo, 11 deles são os híbridos ais produtivos. No terceiro subgrupo encontrase todos os genitores Catuaí estudados, alé do Híbrido de Tior UFV427-I5 e do FI UFV Te-se ohservado no capo que o fenótipo do UFV se asseelha uito ao fenótipo de C. arabica. Se for considerado u liite de 44% de dissiilaridade genética, haverá ua subdivisão e 9 subgrupos, sendo 4 deles originados do grupo A e os outros 5 do grupo B. No grupo B, tereos: o prieiro subgrupo forado por UFV513-5; o segundo subgrupo forado pelo híbrido F, ais produtivo, UFV341-11, e o Híbrido de Tior CIFC832-1; o terceiro subgrupo forado por oito Híbridos de Tiar; o quarto subgrupo forado por 12 híbridos FI (10 deles trata-se dos ais produtivos) e u Híbrido de Tior (UFV376-2); e o quinto subgrupo forado pelos 10 Catuaí (todos), o Híbrido de Tior UFV e o híbrido Ft UFV O frupo dos híbridos Fl ais produtivos situa-se nua posição interediária aos dois grupos onde estão os seus genitores (grupo dos Catuaí e grupo dos Híbrido de Tiar). O Híbrido de Tior CIFC832-1 no liite de 49% de dissiilaridade já se situa nu grupo à parte dos outros Híbrido de Tior. Este híbrido é u dos POUCOS que peranece resistente a todas as raças existentes do fungo H. vastatrix. O baixo poliorfiso lnolecular observado e C. arabica por outros autores (LASHERMES et al., 1995) é ais provavelente relacionado à orige desta espécie alotetraplóide. Entretanto, a diversidade genética relativaente apla dentro da coleção do geroplasa arábica observado neste estudo deonstra a iportância da realização de hibridações entre este geroplasa e deste co outros afins. Teste dos híbridos F,: Para certificação da natureza híbrida utilizou-se u total de 15 arcadores RAPD gerados por 12 priers. Fora estudados os 12 híbridos ais produtivos. Observou-se que 11 deles Wesentara bandas poliórficas presentes apenas no genitor asculino (Híbrido de Tiar), confirando a ocorrência de cruzaento e, portanto, atestando a natureza híbrida dos ateriais estudados. Dentre aqueles que apresentara natureza híbrida estäo: UFV341-11, UFV342-8, UFV418-6, UFV419-8, UFV419-10, UFV427-2, UFV429-1, UFV430-1, UFV505-9, UFV506-3 e UFV A natureza híbrida de UFV foi confirada nos testes realizados. Por esta razão e pelo fato de ser distinto dos deais, ais estudos estão sendo realizados co este aterial. A Figura 2 exeplifica os resultados dos testes realizados para cenificaçho da natureza híbrida dos ateriais. CONCLUSÃO 161

3 O agrupaento co base e arcadores RAPD foi consistente co as inforações prévias sobre a genealogia do aterial estudado, possibilitando tabé a certificação da natureza híbrida dos ateriais genéticos obtidos por cruzaentos artificiais. 51 genótipos 108 arcadores RAPD 0,795 I ,595 0,495 i - l V._.a, 1 5 0,395 1r._ V c 0,295 2 ' ,005 Figura 1.Dcndogrsa representando disvhcias gcneticas estiadas enlre 51 gen6tipos de café baseados e 108 arcadores RAPD gerados por 46 priers. I 2 3 * B

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