Laboratório de Nefrologia Celular, Genética e Molecular LIM 29. Grupo de Nefropatias Hereditárias. Atividades e Linhas de Pesquisa
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- David Oliveira Stachinski
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1 Laboratório de Nefrologia Celular, Genética e Molecular LIM 29 Grupo de Nefropatias Hereditárias Atividades e Linhas de Pesquisa Coordenação: Luiz Fernando Onuchic
2 Atividades Clínicas Grupo de Nefropatias Hereditárias: - Membros: Luiz F. Onuchic, Bruno E. Balbo, Elieser Watanabe e Fernando Sales - Ambulatório e seguimento intra-hospitalar de pacientes com nefropatias hereditárias - Estudos clínicos e genético-moleculares Exemplo: Balbo et al. Infundibular stenosis in Bardet-Biedl syndrome. Kidney Int, Estudo observacional em andamento Doença Renal Policística Autossômica Dominante (DRPAD) - Criação do Centro Brasileiro de Esclerose Tuberosa projeto conjunto com os Serviços de Pneumologia, Neurologia, Urologia e Dermatologia do HC-FMUSP
3 Atividades Científicas Experimentais: Linhas de Pesquisa 1. Análise Estrutural de Proteínas Associadas à DRPAD - Expressão e purificação de polipeptídeos recombinantes - Análises estruturais baseadas em metodologias bioquímicas e biofísicas Exemplo: Ferreira et al. Macromolecular assembly of polycystin-2 intreacytosolic C- terminal domain. Proc Natl Acad Sci USA, Colaboração externa para análises de dinâmica molecular
4 Patogênese Molecular, Celular e Sistêmica da DRPAD e da DRPAR 1. Modelos Animais Geneticamente Modificados - Alelo knockout para o gene Pkd1 - Alelo knockout condicional para o gene Pkd1 - Alelo knockout condicional para o segmento genômico completo de Pkhd1 em construção, utilizando estratégia baseada em zinc-finger nuclease - Camundongos haploinsuficientes para Pkd1 Exemplo: Bastos et al. Pkd1 haploinsufficiency increases renal damage and induces microcyst formation following ischemia/reperfusion. J Am Soc Nephrol, Camundongos homozigotos para alelo Pkd1 knockout condicional e transgênicos para Cre recombinase, com sua expressão controlada pelo promotor do gene da nestina Exemplo: Fonseca et al. Renal growth is the main determinant for hypertension and concentrating deficit in Pkd1-deficient mice. In review, Kidney Int - Camundongos homozigotos para alelo Pkhd1 hipomórfico Exemplo: Garcia-Gonzalez et al. Genetic interaction studies link autosomal dominant and recessive polycystic kidney disease in a common pathway. Hum Mol Genet, 2007
5 Patogênese Molecular, Celular e Sistêmica da DRPAD e da DRPAR 1. Transfecção Gênica em Células de Origem Renal - Transfecção de PKHD1 em células HEK293 Exemplo: Kaimori et al. Polyductin undergoes notch-like processing and regulated release from primary cilia. Hum Mol Genet, Análises de Expressão Proteica - Caracterização do perfil de expressão da poliductina Exemplo: Menezes et al. Polyductin, the PKHD1 gene product, comprises isoforms expressed in plasma membrane, primary cilium and cytoplasm. Kidney Int, Efeitos de Células Tronco Mesenquimais em Camundongos Deficientes em Pkd1 Submetidos a Insulto Renal por Isquemia/Reperfusão em andamento 4. Cultura Primária de Células Tubulares Renais em andamento
6 Patogênese Molecular e Celular da Esclerose Tuberosa Sistema Tridimensional de Cultura de Células - Tubulogênese in vitro Exemplo: Silva et al. Expression profile of tuberous sclerosis and polycystic kidney disease related proteins during in vitro tubulogenesis. Submitted, Nephrol Dial Transplant
7 Membros Atuais do Laboratório - Andressa Godoy Amaral - Margoth Ramos Guarnica - Bruno Eduardo Balbo - Zenaide Providello Moysés - Jonathan Mackowiak da Fonseca - Crysthiane Rubião Silva - Willian Pereira Felix - Elieser Hitoshi Watanabe - Juliano Bertollo Dettoni - Fernanda Souza Messias - Fernando Sales - Marciana Veloso de Sousa - Mariana Akemi Misawa - Thais Lumi Matuki
8 Ações Integradas Envolvendo a Disciplina de Medicina Molecular do Departamento de Clínica Médica 1. Núcleo de Estudos e Terapia Celular e Molecular da USP - NETCEM - 23 grupos de pesquisa pertencentes à FM-USP, HC-FMUSP, IQ-USP, ICB-USP e FMVZ-USP - Estruturas físicas associadas: NUCEL da FM-USP Unidade de Terapia Celular e Engenharia de Tecidos (UTCET) do HC-FMUSP Centro de Estudos Pré-Clínicos da FMVZ-USP Centro de Animais Geneticamente Modificados do Biotério da FM-USP Unidades Laboratoriais dos Pesquisadores Principais do NETCEM - Demais docentes deste Departamento pertencentes ao NETCEM: Maria Lúcia Giannella, Ana Cláudia Latronico, Berenice Mendonça e Irene Noronha 2. Criação da Unidade de Sequenciamento de DNA em Larga Escala e Análise Bioinformática 3. Ação integrada com o IQ-USP: Reformulação dos Cursos de Bioquímica e Biologia Molecular, e Projeto de Criação do Curso Bases Moleculares da Clínica Médica.
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