Relatório de Avaliação da Estabilidade de Cianocobalamina (Vit. B12) de 200 µg/ml em SyrSpend SF Elaborado por: Revisado por: Aprovado por:

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1 Sistema de Gestão da Qualidade Relatório de Avaliação da Estabilidade de Cianocobalamina (Vit. B12) de 200 µg/ml em SyrSpend SF

2 Sumário Sumário Página 1. Objetivo Aplicações Referências Bibliográficas Formulação Proposta para o estudo Documentação Envolvida Documentação Anexada Materiais e Componentes Equipamentos Procedimentos Resultados Conclusão

3 Página: 1 de 5 1 OBJETIVO Avaliar a estabilidade de cianocobalamina (Vitamina B12) 200µg/mL em base SyrSpend SF pelo prazo de 90 dias. 2 APLICAÇÕES A estabilidade é definida como o tempo no qual um produto mantém, dentro dos limites especificados e em todo o seu período de utilização, as mesmas propriedades e características que possuía no momento em que foi obtido. A estabilidade aqui proposta foi a estabilidade de longa duração para 90 dias. 3 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS - RE Nº. 899, de 29 de maio de 2003: Guia para Validação de métodos analíticos e bioanalíticos. - RDC 17, de 16 de abril de 2010: Boas Práticas de Fabricação de Medicamentos. - RDC 37, de 06 de junho de 2009: Trata da admissibilidade das Farmacopéias estrangeiras. - INMETRO, Orientações sobre validação de métodos químicos DOQ-CGCRE VIM Vocabulário Internacional de Metrologia. - Validación de métodos analíticos Asociación española de farmacéuticos de la industria. - BARROS NETO, Benício de, SCARMINIO, Ieda Spacino, BRUNS, Roy Edward. Como fazer experimentos. 4. Ed. Porto Alegre: Bookman, RE n 1, de 29 de julho de 2005: Guia para realização de Estudos de Estabilidade. - ICH Stability Testing of New Drug Substances and Products Q1B. - Formulário Nacional 4 FORMULAÇÃO PROPOSTA PARA O ESTUDO Cianocobalamina (Vit. B12) em Syrspend SF 200 µg/ml Cianocobalamina ,02% (p/v) Base SyrSpend SF qsp 100 ml Quantidade total preparada para o estudo ,0 ml OBS: Foi utilizada uma sobrecarga de 2% de cianocobalamina, conforme preconizado para produtos vitamínicos. 5 DOCUMENTAÇÃO ENVOLVIDA DOCUMENTO Relatório de Calibração da Balança BL 120 S Sartorius e Tepron, BTS 500 Certificados de calibração das vidrarias Procedimentos Operacionais Padrão Certificados de análise dos reagentes Registro de padronização de padrão secundário de Progesterona Certificado de Padrão oficial de Referência de Progesterona Protocolo de qualificação HPLC Relatório de Qualificação do Fluxo Laminar Certificado de Calibração e Qualificação da Estufa LOCALIZAÇÃO Contra-provas FQ II Garantia Almoxarifado Validação Validação FQ II Contra-provas Contra-provas

4 Página: 2 de 5 6 DOCUMENTAÇÃO ANEXADA DOCUMENTO Procedimento Analítico para o doseamento de Cianocobalamina suspensão de 200µg/mL e procedimento do método microbiológico Cálculos e cromatogramas de análise LOCALIZAÇÃO ANEXO I ANEXO II 7 MATERIAIS E COMPONENTES Padrões e Reagentes Lote Fabricação Validade Padrão Primário Cianocobalamina O0H288 - Não definida Padrão Secundário de Cianocobalamina 038/12 28/06/ /06/2013 Ácido Clorídrico 0,1N VAL /05/ /11/2012 Hidróxido de sódio 0,1N FQISR /05/ /11/2012 Peróxido de Hidrogênio 3% VAL /05/ /11/2012 VAL /03/ /09/2012 Fase Móvel VAL /05/ /11/2012 VAL /05/ /11/2012 Meios de cultura / Soluções / Materiais Lotes Solução Tampão ph 7,2 MB1869, MB1924, MB2112, MB2001, MB2225 Caldo Casoy MB 1859, MB1899, MB2059, MB1973, MB 2195 Placa de Petrifilm para S. aureus KA, KE, KB, KE, KB Placa de Petrifilm para Contagem Total TL, TL, TL, TL, TQ Placa de Petrifilm para E. coli 8433, 4770, 4925, 4770, 4925 Pote 8433, 8544 Pote peq. 8433, 925, Pote médio 8433, 8741 Agar cetrimida MB1855, MB1911, MB2067, MB1974, MB2224 Espátula 8309, 8433, 8609 Loop EQUIPAMENTOS Vidrarias/Equipamentos Balões Volumétricos de vários volumes Pipetas Volumétricas de vários volumes Balança Analítica Sartorius modelo BL 120 S HPLC Younglin, Modelo YL9100 HPLC System Isocrático Coluna C6 150x4,6 mm (02) Macherey-Nagel nº série: E , Lote: Phametro Marca AKSO, modelo AK86 Phametro Marca HANNA, modelo HI8424 Câmara climática, marca FANEM, modelo 345-MP Fluxo Laminar marca, Veco, HLFS 012, serie FL Estufa Bacteriológica marca Nova ética, modelo 410ND Balança Analítica, marca Tepron, BTS 500 Nº de Calibração/TAG Nº de calibração descritos nas vidrarias utilizadas e nos respectivos certificados de calibração BA-02 HPLC-04 C6 (02) ph-17 ph-18 CAM-01 FL-01 EB-07 BA-09

5 Página: 3 de 5 9 PROCEDIMENTO 9.1 Validação do método analítico e degradação forçada O método analítico foi validado conforme a resolução RE 899 da ANVISA. O aparelho utilizado foi um sistema de HPLC YoungLin. As condições cromatográficas para a determinação da Cianocobalamina foram as seguintes: Comprimento de onda: 361 nm. Fase estacionária: coluna fase reversa C6 150 x 4,6 mm. Fase móvel: Uma mistura de metanol e solução tampão de ph 3,0 (250:750). Tampão ph 3,0: 11,8125 g de ácido cítrico + 5,325 g de fosfato de sódio dibásico anidro para 750 ml de água. Solução diluente: Água ultrapura Volume de injeção: 20 µl. Fluxo: 2,0 ml/min. Concentração de trabalho: 20 µg/ml CV%: 2,0% O método foi avaliado quanto à especificidade, linearidade, exatidão, precisão. A degradação forçada foi realizada pela submissão do produto à condições de Estresse tais como: Calor, 60 C; HCl 01N; Luz ultravioleta, 254nm; Oxidação, H 2 O 2 3% ; todos foram avaliados em 0h; 24h; 48h e 72h. 9.2 Análise microbiológica O método microbiológico para contagem total de micro-orgamismos viáveis totais, dos patógenos E. coli e S.aureus foi o método de Petrifim; para P. auruginosa foi o método Pour Plate. A contagem total foi avaliada nas diluições: 10-1 ; 10-2 ; 10-3 e Os patógenos foram avaliados quanto à presença/ausência. 9.3 Avaliação da estabilidade O estudo para avaliação da estabilidade foi conduzido com o produto na embalagem primária, frasco de vidro âmbar com tampa de rosca à temperatura de 30 C ± 2 C e umidade relativa de 75% ± 5%, com análises zero dias, 15 dias, 30 dias, 60 dias e 90 dias. Foram avaliados o aspecto, o teor do ativo, ph e limites microbianos: contagem total e os patógenos, P. auruginosas, E. coli; e S. aureus.

6 Página: 4 de 5 10 RESULTADOS Os resultados da validação estão apresentados na Tabela 1. Tabela 1. Resultados estatísticos para especificidade, linearidade, precisão e exatidão. Parâmetro Valor Especificação Especificidade % de discrepância n = 6 1,75 2% Linearidade Faixa Intercepto Inclinação R 2 F 0 = MQreg/MQres F 0 = MQfaj/MQep n = 3 80,0 120,0% 39066, ,7 0, ,51 2,05 No mínimo 0,99 > (F crítico = 4,64) < (F crítico = 3,71) Precisão (repetibilidade e intermediária) CV (%) Intradias 1º dia CV (%) Intradias 2º dia CV (%) Interdias n = 12 n = 12 n = 24 1,727 1,690 1,671 CV 5% Exatidão (Adição de padrão) Recuperação média n = 9 99,85% 98,0 102,0% CV: coeficiente de variação; MQ: média quadrática; reg: regressão; res: resíduo; ep: erro puro; faj: falta de ajuste; R 2 : coeficiente de determinação; Conforme os resultados obtidos em que todos os resultados se apresentaram dentro das especificações, o método proposto se confirmou válido. Os resultados da Degradação forçada estão apresentados na Tabela 2. Tabela 2. Degradação forçada. % de Degradação 24h 48h 72h Calor 60 C 7,51 10,84 19,17 HCl 0,1N 3,30 5,73 47,31 Luz 254nm 8,77 6,95 34,17 Oxidação 0,76 2,13 20,27 OBS: Em relação ao pico principal Na degradação forçada a amostra em 72 horas já apresentou uma degradação de 19% a 47%, conforme o teste realizado.

7 Página: 5 de 5 O resultado da avaliação da estabilidade está apresentado na Tabela 3. Tabela 3. Avaliação da estabilidade de cianocobalamina (Vit. B12) em SyrSpend SF por 90 dias. Teor de Cianocobalamina (%) Contagem de Micro-organismos (UFC/mL) Teor (%) UFC/mL dias dias Conforme os resultados a amostra permaneceu estável por 90 dias, tanto físico-química quanto microbiologicamente. 11 CONCLUSÃO A Vitamina B12 foi estável em SyrSpend SF por 90 dias quando estocada em frasco de vidro âmbar com tampa de rosca e obedecidas a condições ambientais de 15 C a 30 C.